细胞周期素D1反义cDNA治疗肝癌的研究

目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(CyclinD1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响。方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达CyclinD1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA)的质粒后,观察CyclinD1反义cDNA对肝癌细胞CyclinD1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响。结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义CyclinD1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48h左右最强;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测显示CyclinD1mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示CyclinD1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制。结论CyclinD1反义cDNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株CyclinD1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性。CyclinD1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。