人源性抗汉坦病毒抗体VH基因噬菌体表面展示文库的构建与筛选

目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb)。方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT—PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库。经3轮吸附—洗脱—扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性。结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库。经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆。对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人IgVH基因。结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HVmAb奠定了基础。