干扰素α抑制乙型肝炎病毒复制过程中干扰素刺激基因因子3作用的体外观察

目的研究干扰素刺激基因因子3(ISGF3)在干扰素α(IFN-α)抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制机制中的作用。方法应用定量PCR技术检测IFN-α处理前后人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞上清HBVDNA含量,DNA印迹法检测IFN-α处理前后HepG2.2.15细胞内HBV复制中间体的变化,蛋白质印迹法检测IFN-α处理前后HepG2和HepG2.2.15细胞中ISGF3的3个组分即信号转导和转录活化因子(STAT)1、磷酸化STAT2和ISGF3γ以及双链RNA依赖蛋白激酶(PKR)蛋白质表达水平的改变。用酪氨酸酶抑制剂染料木黄酮抑制IFN-α作用后,再次进行上述检测。结果IFN-α处理后,HepG2.2.15细胞上清HBVDNA和细胞内HBV复制中间体减少,HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达水平均升高。加染料木黄酮抑制IFN-α后,HepG2.2.15细胞上清HBVDNA和复制中间体无减少,而HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达均减少。结论ISGF3是IFN-α抑制HBV复制的关键因子。

LEC1等转录因子基因在花生小种子突变体种子发育过程中的表达分析

花生突变体ssm1与其对照亲本鲁花11号(LH11)相比,种子皱缩变小,百仁重、单株生产力和含油量显著降低。为了探究导致该突变体种子变小且含油量降低的原因,本试验研究了种子发育关键转录因子基因LCE1等在突变体ssm1及其对照LH11合子受精及种子发育不同阶段的表达情况。结果表明,AhLEC1在花生未受精子房(DBP0)时期表达量较低,且在ssm1和对照LH11中无明显差异,在受精后的子房(DBP1)和入土10 d(DAP10)和20 d(DAP20)种子中表达量上调,并且在LH11中的表达量极显著高于突变体ssm1;转录因子基因AhFUS3、AhABI3、AhAGL15和AhWRI1在ssm1中表达均有不同程度下调。其中,与脂肪酸合成和糖酵解关系密切的AhWRI1基因在ssm1中的表达量显著下调。因此推测,ssm1中AhLEC1基因的表达量显著下调,影响AhFUS3、AhABI3和AhWRI1等基因的表达,进而导致ssm1种子胚胎发育和油脂积累的异常。

盐酸青藤碱对db/db小鼠肾组织超微结构及干扰素基因刺激因子表达的影响

目的:观察盐酸青藤碱对db/db小鼠肾组织超微结构和干扰素基因刺激因子(STING)表达的影响。方法:将16只12周龄雄性db/db小鼠随机分为2组:模型(model)组和盐酸青藤碱(SIN)组,每组8只,并设8只野生型(WT)小鼠8只小鼠为正常(control)组。盐酸青藤碱组连续灌胃给药8周后在20周末进行相关指标检测,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃处理。每周检测各组小鼠体重和空腹血糖,全自动生化分析仪检测小鼠尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h尿微量白蛋白(ALB)和血清中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察各组小鼠肾组织的病理变化;透射电子显微镜观察各组小鼠肾组织的超微结构变化;免疫组化法和Western blot法检测各组小鼠肾组织STING蛋白以及核因子NF-κB的亚基P65蛋白的表达;RT-qPCR检测各组小鼠肾组织STING的mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠肾功能指标BUN、ALB和SCr含量均显著上升(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著上升(P<0.01);毛细血管内可见白细胞附壁,炎症细胞浸润,系膜外基质增多;足突融合明显呈线状且排列紊乱,基底膜增厚;STING蛋白和mRNA以及P65蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,盐酸青藤碱组小鼠肾功能指标BUN、SCr和ALB含量均显著下降(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著下降(P<0.01);毛细血管内白细胞附壁减少,炎症细胞和系膜外基质减少;足突融合现象显著减轻,基底膜厚度变薄;STING蛋白和mRNA以及p65蛋白表达水平均显著减少(P<0.01)。结论:盐酸青藤碱可以减轻db/db小鼠肾组织损伤,改善肾组织超微结构变化,抑制炎症反应,其作用机制与下调STING蛋白和mRNA表达紧密联系。

基于干扰素基因刺激因子的特异性靶向Dickkopf相关蛋白1的肿瘤疫苗对多发性骨髓瘤的抗肿瘤免疫应答

目的探讨干扰素基因刺激因子(STING)激动剂ADU-S100是否可增强壳聚糖(CS)纳米颗粒介导的包含肿瘤特异性抗原Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的DNA疫苗对多发性骨髓瘤(MM)的抗肿瘤免疫应答。方法应用复合物共沉淀法制备CS-DNA纳米颗粒。采用Zetasizer Nano-ZS激光粒度分析仪检测CS-DNA纳米颗粒的粒度和Zeta电位,分别通过凝胶阻滞分析和Western blot评估CS-DNA纳米颗粒的DNA保护效果和体内DNA表达效率。利用表达人DKK1(hDKK1)基因的慢病毒建立稳定表达hDKK1的MPC-11细胞(MPC-11-hDKK1),并将MPC-11-hDKK1细胞皮下接种于小鼠建立肿瘤模型。将荷瘤小鼠随机分为对照组(肌内注射CS-pcDNA3.1)、ADU-S100免疫组(皮下注射ADU-S100)、CS-pDKK1免疫组(肌内注射CS-pDKK1)和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组(肌内注射CS-pDKK1+皮下注射ADU-S100),每组5只。各组荷瘤小鼠按照相应的免疫方案以10 d为间隔免疫3次。每周测量肿瘤大小。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第42天,测量各免疫组小鼠的肿瘤重量;流式细胞术检测各免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)树突状细胞(DC)、CD8^(+)CD11c^(+)DC和主要组织相容性复合物Ⅱ类(MHCⅡ)+CD11c^(+)DC亚群的占比。采用重组hDKK1蛋白体外刺激各组小鼠的脾细胞,应用流式细胞术检测各免疫组CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比,并应用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒测定各组细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效应。结果CS-DNA纳米颗粒的粒径和Zeta电位分别约为(204.3±2.31)nm和(15.47±1.01)mV。凝胶阻滞分析表明,CS纳米颗粒包裹的DNA可被完全阻滞。Western blot分析表明,CS-DNA纳米颗粒可在体内有效表达。MPC-11-hDKK1细胞中DKK1蛋白的相对表达量显著高于MPC-11-Ctrl细胞(P<0.05)。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第7、14天,ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组与对照组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);接种后第21、28、35、42天,ADU-S100免疫组,CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤体积均显著低于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠肿瘤体积显著低于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第42天,ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤质量均显著低于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤质量显著低于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)DC、CD8^(+)CD11c^(+)DC、MHCII+CD11c^(+)DC亚群占比显著高于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)DC、CD8^(+)CD11c^(+)DC、MHCII+CD11c^(+)DC亚群占比显著高于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组、ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组的CTL杀伤效应及CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比均显著高于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组的CTL杀伤效应及CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比均显著高于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。结论STING激动剂ADU-S100可显著提高CS-pDKK1纳米颗粒疫苗对MM的抗肿瘤免疫应答,该疫苗策略为MM提供了一种潜在的治疗方法。

环磷酸鸟苷-腺苷合成酶和干扰素基因刺激因子信号通路与缺血性脑卒中相关性的研究进展

缺血性脑卒中(IS)是一种常见的神经系统损伤疾病,其特征是局部脑血流暂时或永久减少,其高发病率、高致残率和不良预后给社会带来了沉重负担[1]。迄今为止,治疗急性IS的方法主要是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂,然而由于重组组织型纤溶酶原激活剂的治疗窗口狭窄,只有少数患者接受溶栓治疗.

舍饲条件下藏仔猪腹泻源大肠杆菌毒力和粘附因子基因检测与耐药性分析

为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率最高的菌毛粘附因子基因是F18(45.10%),其次是F4(15.69%),所有菌株均未检出F41基因;102株菌株中有37株菌株未检出菌毛粘附因子基因。毒力基因中检出率最高的是Stx2e基因(25.49%),其次为STb:EAST-1基因(21.57%)和STa:STb基因(17.65%)。大肠杆菌菌毛粘附因子基因和非菌毛粘附因子基因检测结果表明,在检出AIDA-1基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为44.73%,在检出paa基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为54.17%;在检出eae基因的菌株中没有检测到F4基因。大肠杆菌对氯霉素、四环素、氨苄西林和链霉素表现出高的耐药性,对3种及以上抗生素产生耐药性的大肠杆菌菌株数占总菌株数的86.27%。

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

一株盐单胞菌属(Halomonas)细菌趋化因子受体基因挖掘及相关蛋白序列分析

为了解一株长牡蛎(Crassostrea gigas)致病性盐单胞菌(Halomonas sp.)7T的趋化性,采用毛细管法研究其趋化行为,并基于全基因组数据,利用KEGG Pathway分析其趋化信号通路,通过与同源物种比对分析趋化因子受体种类,进一步挖掘甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis proteins,MCPs)序列,再结合MeMe数据库和TMHMM分析MCPs结构。结果表明:Halomonas sp.7T具备趋化行为,其全基因组含有完整趋化信号通路,共有22个基因编码MCPs,涵盖5种常见趋化因子受体;22个MCPs均含有信号转导结构域,其中,19个含有跨膜结构域,3个不含跨膜结构域;基于信号转导结构域内七肽单位保守序列和存在的对称插入缺失对这22个MCPs进行分类,发现17个为36H型,1个为40H型,其余4个与已知分类均不匹配;跨膜结构分布特征和疏水性分析发现,这22个MCPs中有20个符合拓扑结构,其中ClassⅠ型、ClassⅡ型、ClassⅢ型、ClassⅣ型分别为10、4、3、3个,另有2个MCPs不符合拓扑结构。研究表明,长牡蛎致病性盐单胞菌7T具备趋化性,其基因组存在完整趋化信号通路,有22个基因编码MCPs,这些MCPs具有独特的结构,可能参与介导与细菌生存和环境胁迫响应相关的趋化行为。

复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗表皮生长因子受体基因突变型晚期非小细胞肺癌临床研究

目的:观察复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗痰湿毒蕴型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效。方法:回顾性分析80例痰湿毒蕴型EGFR基因突变型晚期NSCLC患者的临床资料,根据治疗方法不同分成观察组和对照组各40例,观察组采用复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗,对照组单纯采用甲磺酸奥希替尼片治疗。2组均以治疗6周为1个疗程,共治疗2个疗程。治疗前后评价Karnofsky功能状态评分(KPS评分),比较2组的临床疗效、不良反应发生率。结果:治疗后,观察组疾病控制率高于对照组(P<0.05);2组客观缓解率、不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组KPS评分高于治疗前(P<0.05);对照组KPS评分高于治疗前,但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组KPS评分高于对照组(P<0.05)。结论:采用复方苦参注射液联合甲磺酸奥希替尼片治疗痰湿毒蕴型EGFR基因突变型晚期NSCLC的患者,能够提高疗效,减少不良反应的发生,对患者的健康状况有明显的改善作用。

长链非编码RNA活化T细胞核因子非编码基因和长链非编码RNA小分子NF90相关RNA与三阴性乳腺癌预后的相关性分析

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)活化T细胞核因子非编码基因(NRON)和lncRNA小分子NF90相关RNA(snaR)与三阴乳腺癌(TNBC)预后的相关性。方法 2018年2月~2020年2月我院收治的TNBC病人100例,术中取其肿瘤组织及癌旁组织,根据3年随访预后情况将其分为预后良好组(72例)与预后不良组(28例)。采用实时定量荧光PCR(RT-qPCR)法检测肿瘤组织与癌旁组织lncRNA NRON、lncRNA snaR表达水平。Pearson法分析TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON与lncRNA snaR的相关性。多因素Cox回归分析TNBC病人预后的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON和lncRNA snaR表达水平对预后的预测价值。结果 与癌旁组织相比,TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON表达水平显著下降(1.01±0.10比0.65±0.08,P<0.001),lncRNA snaR表达水平显著上升(1.03±0.13比2.42±0.30,P<0.001)。lncRNA NRON、lncRNA snaR表达水平与TNM分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON表达水平显著下降(0.69±0.09比0.55±0.05,P<0.001),lncRNA snaR表达水平显著上升(2.28±0.26比2.78±0.40,P<0.001)。Pearson法分析显示,TNBC病人肿瘤组织lncRNA NRON与lncRNA snaR表达水平呈负相关(r=-0.617,P<0.001)。多因素Cox回归分析结果显示,lncRNA NRON是TNBC病人预后的保护因素(P<0.05),lncRNA snaR是TNBC病人预后的危险因素(P<0.05)。lncRNA NRON和lncRNA snaR表达水平联合预测TNBC病人预后优于lncRNA snaR单独预测(Z_(二者联合-lncRNA snaR)=3.200,P=0.001)。结论 TNBC病人肿瘤组织中lncRNA NRON表达下调,lncRNA snaR表达上调,二者与TNBC病人预后有关,可能是TNBC预后预测的生物标志物。

致羔羊脑炎粪肠球菌分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测

从新疆部分地区羊场近年来发生的以脑炎为主要临床特征的病死羔羊体内分离出2株细菌,经鉴定为粪肠球菌。经链球菌A-G乳胶分型诊断液检测后确定为D群链球菌。该菌对小鼠和羔羊有较强的致病性,人工感染可引起小鼠的死亡,感染羔羊能够复制出与自然感染相同的临床症状和病理变化,并从感染发病和死亡羊的脑、心血、肝脏中再分离到相同细菌,分离菌对万古霉素、氟苯尼考、头孢噻肟钠、诺氟沙星和恩诺沙星敏感,根据GenBank中粪肠球菌主要毒力因子的基因序列设计引物进行PCR检测,结果显示,1株细菌明胶酶(GelE)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、新的表面蛋白1(EF3314)等毒力因子基因阳性;另1株细菌溶血素激活因子(CylA)、表面蛋白(esp)、聚合物质(Asa1)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(Ace)、2种新的表面蛋白1和2(EF0591和EF3314)等毒力因子基因为阳性。

冷诱导转录因子基因CBF3转化黄瓜的研究

从拟南芥Columbia生态型基因组DNA中扩增并克隆了冷诱导转录因子CBF3基因,将其与CaMV35S启动子和Nos终止子融合后构建成植物表达载体pBINP-35S-CBF3。通过农杆菌介导转化黄瓜子叶,获得了具有卡那霉素抗性的黄瓜再生植株。经PCR检测鉴定,表明CBF3基因已整合到黄瓜基因组中。

母代鸡日粮不同蛋白水平对后代肌纤维发育及肌肉生成抑制因子基因(MSTN)mRNA表达的影响

旨在研究2个品系母鸡饲喂不同蛋白水平日粮对后代肌纤维发育及肌肉生成抑制因子基因(MSTN)mR-NA表达的影响。试验通过对高、低脂系肉种鸡饲喂3个蛋白水平(分别是NRC肉种鸡饲养标准蛋白水平的80%、100%、120%)的日粮,子代饲喂正常蛋白水平日粮,研究母体效应对后代肌纤维发育的影响。结果表明:①母代高蛋白日粮可显著提高子代1日龄肉仔鸡初生体质量(P<0.05),但屠宰日龄肉仔鸡体质量各组间差异不显著(P>0.05)。②随着母代日粮蛋白水平的降低,子代胸肌肌纤维直径逐渐减小,且低蛋白组显著低于正常蛋白和高蛋白组(P<0.05),2个品系间差异不显著(P>0.05)。③随着母代日粮蛋白水平的降低,胸肌肌纤维密度逐渐增加,且低蛋白组显著高于正常蛋白组和高蛋白组(P<0.05),2个品系间差异不显著(P>0.05)。④母代高蛋白日粮有降低MSTNmRNA表达量的趋势,但未达显著水平(P>0.05),低脂系肉仔鸡高蛋白组21日龄胸肌MSTNmRNA表达量显著低于正常蛋白组和低蛋白组(P<0.05)。结果表明,母代高蛋白日粮可提高后代初生体质量,且高蛋白日粮有降低胸肌中MSTNmRNA表达量的趋势;母代低蛋白日粮可显著降低后代肌纤维直径提高肌纤维密度,从而改善肌肉品质。品系对肌纤维无显著影响。

山羊生长分化因子9基因外显子2的PCR-SSCP分析

目的寻找与产羔数相关的遗传标记,为山羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。方法以控制Belclare绵羊和Cambridge绵羊高繁殖力的生长分化因子9(growthdifferentiationfactor9,GDF9)基因为候选基因,根据绵羊GDF9基因序列设计4对引物,采用PCR-SSCP技术检测GDF9基因外显子2在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)以及低繁殖力山羊品种(波尔山羊、文登奶山羊、辽宁绒山羊、北京本地山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果山羊与绵羊的GDF9基因外显子2核苷酸序列同源性为99%(955/965)。引物1和引物4存在多态性。对于引物1扩增片段,5个山羊品种均检测到AA、AB和BB3种基因型,测序分析发现外显子2第26bp处有1个G→A的单碱基突变,但没有引起氨基酸改变;济宁青山羊A等位基因频率为0.9128,B等位基因频率为0.0872;AA基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比AB基因型的多0.54只(P<0.01),比BB基因型的多0.63只(P<0.01)。对于引物4扩增片段,5个山羊品种均检测到CC、CD和DD3种基因型,测序分析发现外显子2第792bp处有1个G→A的单碱基突变并且导致缬氨酸改变为异亮氨酸;济宁青山羊C等位基因频率为0.9266,D等位基因频率为0.0734;CC基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比CD基因型的多0.57只(P<0.01),比DD基因型的多0.62只(P<0.01)。结论初步表明GDF9基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的分子标记。

紫花苜蓿WRKY转录因子基因的克隆与亚细胞定位

WRKY转录因子家族在植物生长发育各个阶段发挥重要作用。本研究运用电子克隆和RT-PCR结合的方法获得1个紫花苜蓿WRKY转录因子家族成员的cDNA序列,命名为MsWRKY56。该序列长1 267bp,包含1个951bp的最大开放阅读框,编码317个氨基酸;构建该基因的瞬时表达载体,通过基因枪轰击洋葱表皮的方法对编码蛋白进行亚细胞定位研究,结果表明该基因编码蛋白定位于细胞核,符合转录因子的亚细胞定位特征,为进一步研究该基因编码蛋白的结构和功能奠定了基础。

烧伤创面内表皮生长因子、表皮生长因子受体、C-myc三种基因表达变化的临床观察

目的为探讨烧伤创面愈合机理,了解烧伤创面内表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因的变化,为临床治疗提供依据。方法我们对25例病人烧伤创面的不同部位应用原位杂交方法,观察表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因在烧伤创面肉芽中心部(肉芽中心部)、肉芽与愈合皮肤的交界部(创面交界部)、愈合皮肤部位(创面愈合部)和自身正常皮肤对照部位内表达强度和分布的特点。结果同一部位烧伤创面内,表皮生长因子基因和C-myc基因在交界部表达最强;烧伤创面中心部位表达次之,烧伤创面愈合部位表达较弱;表皮生长因子受体基因表达在创面中心部位表达较强,在表达交界部次之;在创面愈合部表达较弱;正常皮肤对照部位三种基因表达不明显。结论烧伤创面内表皮生长因子基因、表皮生长因子受体基因和C-myc基因在烧伤创面内有明显的规律性表达,表达与创面愈合密切相关。

前列腺癌组织中核干因子基因表达的临床意义

目的探讨核干因子(nucleostemin gene,NS)基因在前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中的表达及其与血清前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法检测NS在PCa及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达,分析其在PCa中的表达水平与血清PSA的关系。结果45例PCa组织标本中,NS mRNA的阳性表达率为80.0%(36/45)。20例BPH组织中均未见阳性表达。在高分化、中分化、低分化PCa组织中NS蛋白阳性表达例数分别为4、19、13例。NS蛋白表达与PCa恶性程度呈正相关(r=0.954,P<0.05),与患者血清PSA水平无明显相关性(r=0.237,P>0.05)。结论NS蛋白表达与PCa的分级密切相关,可作为一种诊断PCa的新肿瘤标志物。

凹甲陆龟沙门氏菌的分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测

从成都动物园因腹泻死亡的凹甲陆龟体内分离到一株病源菌,经选择性分离培养、生化试验、血清型鉴定等,确定该病源菌为D群肠炎沙门氏菌,其抗原结构式为1,9,12∶g,m∶-。该菌株对小鼠有较强的致病性,能引起人工感染小鼠大量死亡,且从其体内分离到相同特性的菌株;药物敏感性试验证实该分离菌对头孢曲松、氧氟沙星、卡拉霉素、多粘菌素、复方新诺明、呋喃唑酮等敏感,对链霉素、四环素、氯霉素等耐药;同时根据GenBank中已报道的沙门氏菌毒力因子ivnA和ivnE的基因序列,设计两对特异性引物对该菌进行PCR检测,结果在该菌中成功扩增并检测出ivnA和ivnE基因。本试验尝试了沙门氏菌的PCR检测方法,为该分子诊断技术的全面推广奠定了良好基础,也为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了科学的实验数据。

重组人凋亡诱导因子基因的构建、表达及其对HeLa细胞的促凋亡作用

凋亡诱导因子 (apoptosis inducingfactor ,AIF)定位于细胞的线粒体膜间隙 .当凋亡信号刺激时 ,AIF分子从线粒体释放到胞浆 ,然后转位到细胞核内 ,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂 (～ 5 0kb) .用RT PCR法分段克隆得到人全长AIF基因 ,经改造截去其N端线粒体定位信号编码序列 ,代之以不同长度的绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域序列 .把这些重组基因克隆入 pIRES2 EGFP真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过荧光显微镜观察、共聚焦显微镜观察、电镜观察等方法检测了多种重组人AIF基因的表达及其对细胞生长的影响 .证明了重组人AIF基因的表达可引起HeLa细胞死亡 。

抗氧化基因核因子E2相关因子2对百草枯中毒肺损伤小鼠的保护作用

目的通过体外构建携带抗氧化基因核因子E2相关因子2（Nrf2）的骨髓间充质干细胞（BMSC），观察Nrf2对百草枯所致肺损伤模型小鼠的保护作用。方法构建携带有Nrf2基因的过表达慢病毒并转染BMSCs，建立携带有抗氧化基因Nrf2的BMSCs体系。将120只清洁级Balb／c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、P0染毒模型组、BMSCs治疗组、携带空载基因的BMSCs治疗组（BMSC—Cherry治疗组）、携带Nrf2基因的BMSCs治疗组（BMSC—Nrf2治疗组）5组，每组24只。腹腔注射PQ溶液25mg／kg复制小鼠PQ中毒肺损伤模型，正常对照组给予等体积生理盐水；BMSC治疗组、BMSC—Cherry治疗组、BMSC—Nrf2治疗组于制模后6h经球后注射相应的BMSCs0．3mL，每只1×106个。制模后处死小鼠取肺组织，用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测肺组织Nrf2蛋白表达；留取血液标本，用化学比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）等氧化应激指标，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症指标，用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况。结果与正常对照组比较，制模后3d和21d，PQ染毒模型组、BMSC治疗组、BMSC—Cherry治疗组、BMSC—Nrf2治疗组的Nrf2蛋白表达均显著升高，且以BMSC—Nff2组21d升高最明显（灰度值：3．52±0．26比1．00±0．12，P〈0．05）。PQ染毒模型组血清MDA、IL-1β、TNF-α水平均较正常对照组明显升高，SOD、GSH均较正常对照组明显降低；用BMSC、BMSC—Cherry、BMSC—Nrf2干预后，随着时间延长，各组MDA、IL-1β和TNF-α水平均较PQ染毒模型组逐渐降低，SOD、GSH均较P0染毒模型组逐渐升高，以BMSC—Nrf2组制模后21d变化最显著（MDA（umol／L）：2．09±0．28比3．11±0．11，SOD（kU／L）：23．88±0．68比16．12±0．87，GSH（ixm01]L）：2．92±0．21比2．33±0．15，IL-1β（ng／L）：55．58±4．54比87．23±9．28，TNF-α（ng／L）：179．25±9．40比228．38±13．30，均P〈0．05J。与正常对照组比较，PQ染毒模型组TUNEL染色阳性细胞明显增多[（45．06±6．78）％比（3．11±0．99）％]；与PQ染毒模型组比较，BMSC治疗组、BMSC-Cherry治疗组、BMSC—Nrf2治疗组阳性细胞明显减少【（30．34±1．79）％、（26．25±4．97）％、（18．00±3．15）％比（45．06±6．78）％]，且以BMSC—Nrf2治疗组下降最明显（P〈0．05）。结论BMSCs及携带有抗氧化基因Nrf2的BMSCs均能有效减轻PQ所致肺损伤，且以BMSCs—Nrf2的作用更显著；其保护作用可能与拮抗体内氧化应激和炎症因子等有关。