大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因型别研究

目的研究大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb各亚型的流行情况。方法对氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性的菌株进行DNA序列测定,测得序列与已在美国国立生物信息中心(NCBI)登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族序列比对,确定型别。结果6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠埃希菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

产ESBLs肺炎克雷伯菌中新的氨基糖苷类修饰酶基因型

目的:了解一株产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因存在情况。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ,aac(3)-Ⅱ,aac(6′)-Ⅱ,ant(3″)-Ⅰ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰb,TEM,SHV,LEN,OKP,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9,GES,PER,VEB,OXA-10,OXA-1,DHA,ACT-1,intI1基因,部分产物进行测序。结果:TEM、aac(6′)-Ⅰb、intI1阳性,其他阴性。aac(6′)-Ⅰb经测序并与已在美国国立生物信息中心[NCBI]登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族比对,发现与先前登录的均不相同(包括2006年初美国学者发现的新氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb-Cr型)。结论:从该株产ESBLs肺炎克雷伯菌中发现的aac(6′)-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶为新的基因型。以aac(6′)-Ⅰb-Suzhou型命名,已登录于美国NCBI(登录号:EF375621)。

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。

产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与修饰酶基因研究

目的分析临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性，并了解其修饰酶基因携带状况及耐药机制。方法采用纸片扩散法测定临床分离的32株产ESBLs大肠埃希菌对5种氨基糖苷类抗生素的耐药性，用CLSI推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株，采用PCR法检测氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅰ，aac（3）-Ⅱ，8aC（6’）-Ⅰ ad，aac（6＇）-Ⅰ b，aac（6＇）-Ⅱ，ant（3＂）-Ⅰ，ant（2＂）-Ⅰ。提取携带单一修饰酶基因临床菌株的质粒并转化入宿主菌BL21中，比较临床分离菌与转化菌对5种氨基糖苷类药物敏感性及产ESBLs情况的区别。结果32株产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高（84．3％），对阿米卡星耐药率最低（25％）。检出氯基糖苷粪修饰酶基因aac（6＇）-Ⅱ，ant（3＂）-Ⅰ，ant（2＂）-Ⅰ，阳性分别为22株（68．8％），9株（28．1％），5株（15．6％），1株（3．1％）。质粒转化菌产ESBLs且同时检出原携带基因，但耐药表型有区别。结论临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高，对阿米卡星敏感性最高，氨基糖苷类耐药与氨基糖苷类修饰酶基因表达有关，临床应对此类菌株引起重视。

氨基糖苷类修饰酶基因aac(2')-Ib型在耐药鲍曼不动杆菌中流行

目的调查一组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药机制。方法收集2013年1至3月江苏省淮安市第一人民医院住院患者标本中分离到的鲍曼不动杆菌共32株,用分子鉴定法确认为鲍曼不动杆菌,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16S r RNA甲基化酶基因。结果本组32株耐药鲍曼不动杆菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(2')-Ib 32株(100.0%)、aac(3)-I 15株(46.9%)、aac(6')-Ib 19株(59.4%)、ant(3'')-I 20株(62.5%)、aph(3')-I 19株(59.4%),与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A 25株(78.1%)。阳性基因共分为7种检测模式,其中以aac(2')-Ib+aac(3)-I+aac(6')-Ib+ant(3'')-I+aph(3')-I+arm A等6种基因均阳性的模式最高,为12株(37.5%)。结论产5种氨基糖苷类修饰酶基因(aac(2')-Ib、aac(3)-I、aac(6')-Ib、ant(3'')-I、aph(3')-I)与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A是本组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。在鲍曼不动杆菌临床分离株检出aac(2')-Ib型氨基糖苷类修饰酶基因为国内首次报道。

从全耐嗜麦芽寡养单胞菌检出一种氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb基因的新变型基因

目的研究全耐嗜麦芽寡养单胞菌(SMA)耐药机制。方法应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株全耐SMA临床分离株6种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因,并对阳性产物测序和同源性分析。结果在该株菌,两种方法药敏结果均为全耐药;2种AMEs基因(aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ)PCR阳性,测序和同源性分析证实为2种AMEs基因;aac(6′)-Ⅰb为新变型,GenBank注册号为EF 210035;ant(2″)-ⅠGenBank注册号为EU255235。结论该株全耐菌氨基糖苷类抗菌药物耐药机制主要与2种AMEs[aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ]有关;从全耐SMA检出一种AMEs基因aac(6′)-Ⅰb的新变型基因,经检索中文生物医学期刊文献数据库(CMCC)和medline数据库,本研究是第1篇从SMA检出AMEs基因aac(6′)-Ⅰb、ant(2″)-Ⅰ及aac(6′)-Ⅰb新变型耐药基因的报道。

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型分布

目的调查成都地区亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药特点及氨基糖苷类修饰酶基因型。方法琼脂稀释法测定庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、异帕米星、卡那霉素6种抗生素对23株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度。PCR法检测氨基糖苷类修饰酶编码基因。结果卡那霉素、庆大霉素对23株铜绿假单胞菌MIC50、MIC90均为256 mg/L,耐药率分别为100%和91.3%。阿米卡星、异帕米星、妥布霉素及奈替米星的耐药率分别为56.6%、65.2%、69.6%和78.3%。23株铜绿假单胞菌检出4种修饰酶基因,其中aac(3)-Ⅱ基因型12株,aac(6′)-Ⅰ基因型11株,ant(2″)-Ⅰ基因型6株,ant(3″)-Ⅰ基因型9株;12株菌株同时存在2种或2种以上基因型,1株菌株同时具有4种基因型。结论成都地区亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药率高,主要有aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅰ四种氨基糖苷类修饰酶基因型。

从全耐药恶臭假单胞菌检出一种氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb基因的新变型基因

目的研究全耐药恶臭假单胞菌(PPU)耐药机制。方法应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株全耐药PPU临床分离株6种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因,并对阳性产物测序和同源性分析。结果在该株菌两种方法药敏结果均为全耐药;4种AMEs基因(aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)PCR阳性,测序和同源性分析证实为4种基因且aac(6′)-Ⅰb为新变型,GenBank注册号为EU 137667。结论该株全耐药氨基糖苷类抗菌药物耐药机制主要与4种AMEs(aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)有关;从全耐药PPU检出一种AMEs基因aac(6′)-Ⅰb的新变型基因,经检索中文生物医学期刊文献数据库(CMCC)和Medline数据库,本研究是第1篇从PPU检出AMEs基因aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)及aac(6′)-Ⅰb新变型耐药基因的报道。

南京地区铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子类型分析

目的调查南京地区铜绿假单胞菌(PA)氨基糖苷类药物修饰酶基因(AMEs)分子类型。方法K-B药敏法测定2003～2005年临床分离的PA对庆大霉素、阿米卡星、链霉素的药敏表型,筛选出56株对氨基糖苷类药物耐药(至少对一种受试药物耐药)的菌株,聚合酶链反应(PCR)的方法对6种AMEs进行了检测和分析。结果PA对庆大霉素的耐药率为51.8%(29/56),对阿米卡星的耐药率为26.8%(15/56),对链霉素的耐药率为96.4%(54/56)。6种AMEs检出率由高到低分别为:aac(3)-Ⅱ48.2%、ant(2″)-Ⅰ48.2%、aac(6′)-Ⅱ41.0%、ant(3″)-Ⅰ17.8%、aac(6′)-12.5%、aac(3)-Ⅰ0.0%。总AMEs检出率为68.0%。结论南京地区PA对氨基糖苷类抗菌药的耐药主要由AMEs引起。

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型研究

目的了解中国5个地区亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌部分氨基糖苷类修饰酶分布情况。方法从成都、杭州、北京、上海和广州收集对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,使用PCR法扩增16种氨基糖苷类修饰酶基因。结果共收集了146株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌。16种氨基糖苷类修饰酶基因中有6种基因型获得阳性的PCR结果,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为65.06%,各种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为aac(3)-Ⅱ33.6%、aac(6')-Ⅰ15.8%、aac(6')-Ⅱ19.9%、ant(2″)-Ⅰ28.8%、ant(3″)-Ⅰ14.4%和aph(3')-Ⅵ4.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的分布存在地区差异,其中杭州和上海6种AMEs基因均被检测出,成都和北京检测出4种AMEs基因,广州的IRPA中仅检测出3种AMEs基因。结论亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高;氨基糖苷类修饰酶基因型在中国5个地区间分布存在差异。

多重耐药铜绿假单胞菌aac(6’)-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 进一步探讨铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa ,Pa)的耐药机制。 方法 从分离的 2 2株Pa中 ,经药敏试验、氨基糖苷类修饰酶耐药aac(6’) Ⅱ型基因的聚合酶链反应 (PCR)检测 ,筛选出 1株具有多重耐药的特征、氨基糖苷类修饰酶aac(6’) Ⅱ型阳性的菌株 ,对其耐药基因进行序列分析。 结果 Pa菌株扩增结果阳性 ,产物的长度为 178bp ,与标准产aac(6’) Ⅱ型菌株扩增片段长度大小一致 ;PCR产物经自动测序仪进行序列分析 ,共测得 132个核苷酸序列 ,经GenBank网上同源性比较 ,发现该序列与M2 96 95相比有 2个位点改变。 结论 国内临床上分离的Pa产aac(6’) Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因 。

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb基因分型研究

目的了解临床连续分离的大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类饰酶aac(6′)-Ib基因及亚型存在状况。方法测定临床分离的60株ECO菌对19种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ib基因。结果60株ECO菌连续分离株中aac(6′)-Ib基因阳性11株(18.3%),经DNA测序,2株为aac(6′)-Ib经典型,6株为aac(6′)-Ib-Cr型,另有2株为新亚型。结论检出氨基糖苷修饰酶aac(6′)-Ib基因新亚型,在一家医院ECO菌中同时检出aac(6′)-Ib型和aac(6′)-Ib-Cr型及新亚型三种亚型为国内首次报道。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因与耐药表型的研究

目的探讨临床分离的22株铜绿假单胞菌(Pa)氨基糖苷类修饰酶(AMES)基因与耐药表型的关系。方法对22株铜绿假单胞菌采用稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、妥布霉素4种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),并用聚合酶链反应(PCR)法检测6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果本组22株Pa菌庆大霉素耐药15株(68.2%)、阿米卡星耐药3株(13.6%)、奈替米星14株(63.6%)、妥布霉素15株(68.2%),检出aac(3)-阳性14株(63.6%)、aac(6′)-阳性5株(22.7%)、aac(6′)-阳性3株(13.6%)、ant(3″)-阳性1株(4.5%)和ant(2″)-阳性7株(31.8%),aac(3)-为阴性。共有18株检出氨基糖苷类修饰酶基因(81.8%)。结论分离自临床的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因检出率高,且与耐药表型一致。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌(ECO)新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法对34株分离自患者的ECO进行aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性8株(23.5%)、aac(3)-Ⅱ阳性27株(39.4%)、ant(3″)-Ⅰ阳性3株(8.8%),其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率(85.3%)有关;在同一所医院的ECO中同时检出aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr两种亚型,为国内外首次报道。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学研究

目的 研究铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学。方法 用 PCR方法对 35 株铜绿假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因 aac(3) Ⅰ、aac(3) Ⅱ、aac(3) Ⅲ、aac(3) Ⅳ、aac(6′) Ⅰ、aac(6′) Ⅱ、aph(3′) Ⅵ、ant(3″) Ⅰ和ant(2″) Ⅰ等9种基因进行了检测与分析。结果 35株中20株检出氨基糖苷类修饰酶基因(57 1%);9种基因由高到低的检出率分别为 aac(6′) Ⅱ(34 2%)、ant(2″) Ⅰ(28 6%)、aac(3) Ⅱ(17 1%)、aac(6′) Ⅰ(17 1%)、ant(3″) Ⅰ(14 3%) 、aac(3) Ⅰ(0)、aac(3) Ⅲ(0)、aac(3) Ⅳ(0)、aph(3′) Ⅵ(0)。结论 本研究表明,湖北襄樊地区铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类药物,主要机制为产氨基糖苷类修饰酶(57 1%),本组铜绿假单胞菌中另有15株表型为氨基糖苷类药物不敏感但 9 种基因检测为阴性,可能存在其他修饰酶基因,或者存在16S rRNA基因突变。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在情况。方法根据美国CLSI/NCCLS2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-I阳性23株(85.2%)、aac(6′)-Ⅰ阳性18株(66.7%)、ant(3")-Ⅰ阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。

20株多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)氨基糖苷类修饰酶基因存在情况。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行了aac(6′)-Ⅰad、aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果20株MDR-ABA中aac(3)-Ⅰ阳性12株(60%)、aac(6′)-Ⅰb阳性15株(75%)、ant(3″)-Ⅰ阳性18株(90%),aac(6′)-Ⅰad基因阴性;本组20株MDR-ABA中未发现AAC新亚型aac(6′)-Ⅰad基因。结论20株MDR-ABA中均检出氨基糖苷类修饰酶基因;基因型与氨基糖苷类耐药表型相符,可导致克隆传播医院感染,对鲍氏不动杆菌进行aac(6′)-Ⅰad基因研究为国内首次。