无需干扰素共同给药的基因型4丙肝治疗药物——Technivie

Technivie由美国AbbVie制药公司研发,2014年FDA授予其突破性药物资格,并通过优先审查程序进行了审批,于2015年7月24日上市。该药由ombitasvir、paritaprevir、ritonavir复配而成,可直接口服给药。Technivie与利巴韦林合用是世界上首个无需使用干扰素的基因型4丙型肝炎治疗方案,它的出现使临床上基因型4丙肝的治疗产生了重大变化。笔者就Technivie的基本性质、作用机制、药动学、药效学、临床试验及应用等研发动态作一综述,以期能为医院临床用药起到指导作用。

肾移植患者的CYP3A4基因型与体内环孢素浓度相关性评价

目的:评价肾移植患者的CYP3A4基因型与体内环孢素浓度相关性.方法:采用特异性荧光偏振免疫法,测定肾移植患者677例(7个民族)次术后不同时间点的体内全血环孢素浓度,利用CYP3A4芯片检测387例患者的CYP3A4酶的基因型,分组(移植术后时间0～1,1～2,2～3,3～4,4～5,5年以上)计算每次用药剂量及血药浓度均值和标准差.结果:12例(汉族)的CYP3A4基因型为突变型,突变率为3.1%.其中8例突变型患者(基因位点13989A→G*4,15820C→15820 G*5)的每公斤体重用药剂量显著高于野生型的患者(P＜0.05);4例基因位点-444T→G*1C和21973C→21973T*11发生改变的突变型患者用药剂量与野生型患者的用药剂量无显著差异.结论:CYP3A4基因位点突变13989A→G*4,15820C→15820 G*5的肾移植患者服用环孢素的剂量应加大.

玉米C_4型全长pepc基因导入普通小麦的研究

为了获得具有类似C4光合途径的转pepc（磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶）基因小麦材料,采用基因枪法将玉米C4型全长pepc基因导入小麦材料01H186-20-24,经在含4 mg.L-1L-PPT（L-phosphinothricin,草丁膦）的培养基上筛选,获得抗性再生植株,经PCR检测获得118株T0代阳性植株;进一步利用PCR对T1代植株进行筛选,T2代在隔离条件下种植于大田,Southern blot、SDS-PAGE检测表明,外源pepc基因在小麦基因组中得以整合和表达。测定了40个转基因T2代植株和受体对照的净光合速率（Pn）、PEPC活性,结果表明,在大田自然条件下,82.5%的转基因小麦的Pn增加,最大提高18.57%,达到了28.1μmol CO2.m-2.s-1,转基因植株中PEPC活性为对照的1.5~1.98倍。

产IMP-4型金属β-内酰胺酶多药耐药产酸克雷伯菌耐药基因分析

目的了解产IMP-4型获得性金属β-内酰胺酶产酸克雷伯菌耐药基因存在的状况。方法分别采用K-B法、双纸片增效法、Etest法、聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法检测其产金属β-内酰胺酶(MBLs)表型及相关的耐药基因。结果多药耐药产酸克雷伯菌除对阿米卡星、多黏菌素B敏感外,对碳青酶烯类、三代、四代头孢菌素、头孢西丁、氟喹诺酮类、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、利福平等均耐药;金属β-内酰胺酶基因型别为IMP-4型(blaIMP-4)、intⅠ1、qacEΔ1-sul1、aadA1、AmpC(blaADC)、CTX-M-14基因阳性。结论产酸克雷伯菌的多药耐药与整合子相关,且携带有多种耐药基因。

G蛋白耦联的内向整流型钾通道4基因多态性与新疆维吾尔族人群血脂异常的相关性

目的研究G蛋白耦联的内向整流型钾通道4(GIRK4)基因多态性与新疆维吾尔族血脂异常的相关性。方法采用TaqmanPCR方法,对GIRK4基因rs2604204、rs4937391、rs6590357、rs11221497多态性在维吾尔族自然人群中进行基因分型,按常规方法测定血脂水平并进行比较分析。结果 50岁以下人群中,三酰甘油异常组和正常组rs6590357位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.005),总胆固醇异常组和正常组rs11221497位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.011)。采用Logistic回归方法校正性别、肥胖等因素后,50岁以下人群中rs6590357位点与TG异常、rs11221497位点与TC异常仍然为阳性关联。rs6590357位点CT+TT基因型组中TG水平明显高于CC组(P=0.014),rs11221497位点CC基因型组中TC水平明显高于CG+GG组(P=0.006)。对其进行单体型分析后发现,H3单体型频率在TG异常组与正常组间差异有统计学意义(P=0.007)。结论 GIRK4基因rs11221497和rs6590357位点多态性可能与新疆维吾尔族血脂异常相关。

慢性戊型肝炎的诊治进展

据世界卫生组织估计,戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)每年全球约有2000万例的新发感染,可能导致超过300万例急性肝炎。我国是戊型病毒性肝炎(戊肝)高流行区,近年来戊肝发病人数已超过甲型病毒性肝炎(甲肝)。戊肝发病率从2010年的1.77/10万上升至2019年的2.02/10万。我国HEV感染途径主要为食源性感染。慢性HEV感染是指患者感染HEV后,血或粪便中病毒核酸持续阳性3个月以上,其多发生于免疫低下人群,并可能导致患者出现肝纤维化和肝硬化的快速进展。我国以HEV 4型感染为主,因此我国慢性戊肝患者感染的病毒也主要为HEV 4型。HEV感染诊断主要依据特异性HEV抗体或病原学指标。HEV感染筛查应着重关注基础肝病患者、育龄期妇女和老年人及免疫缺陷患者(如器官移植患者、血液肿瘤患者、HIV感染者)等。戊肝诊治中仍然存在很多问题,包括慢性戊肝患者肝纤维化快速进展的危险因素尚未明确;老年男性和孕妇感染HEV后易出现重症的机制有待研究;抗HEV药物筛选多为体外细胞模型的结果,治疗药物仍处于临床前研究阶段。今后应聚焦戊肝的发病机制研究,推动基础研究和临床研究的交叉、融合与转化,为慢性戊肝诊治的药物治疗提供更多有效方案。

CYP3A4*1G基因型酶活性及多态性对椎管内分娩镇痛中舒芬太尼镇痛效果的影响

目的探究CYP3A4*1G基因型酶活性及多态性对椎管内分娩镇痛中舒芬太尼镇痛效果的影响。方法本研究选取30只10周龄雌性SD大鼠,根据CYP3A4*1G基因型不同分为GG基因型大鼠组、GA基因型大鼠组和AA基因型大鼠组,每组各10只。另选取2018年1—3月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院且经产科医师评估可经阴道分娩的100例足月(≥37周)孕妇为研究对象,所有孕妇在最后1次产检时抽取外周静脉血2ml,检测其CYP3A4*1G基因型。根据CYP3A4*1G基因型不同将研究对象分为GG基因型孕妇组(57例)、GA基因型孕妇组(33例)和AA基因型孕妇组(10例)。比较分析不同基因型大鼠的CYP3A4*1G酶活性以及本研究中孕妇与东亚人群中的CYP3A4*1G基因型频率。比较分析各组孕妇不同时间点的舒芬太尼血药浓度,各组均采用随机数字表法抽取5例孕妇,采用高效液相色谱法检测蛛网膜下隙注入舒芬太尼后10min、15min和20min的血药浓度。比较分析各组孕妇于蛛网膜下隙注入舒芬太尼后0h、0.5h、1h和2h的视觉模拟评分法(visual analog score,VAS)评分。记录各组孕妇蛛网膜下隙注入舒芬太尼后1h内的不良反应发生情况。结果与GG基因型大鼠组比较,GA基因型大鼠组和AA基因型大鼠组的CYP3A4*1G酶活性均显著降低(P<0.05)。本研究中的等位基因频率和基因型频率与1000Genomes数据库和gnomAD数据库中的东亚人群比较差异均无显著性(P>0.05)。蛛网膜下隙注入舒芬太尼后10min,三组患者的舒芬太尼血药浓度比较差异均无显著性(P>0.05);蛛网膜下隙注入舒芬太尼后15min和20min,与GG基因型孕妇组比较,GA基因型孕妇组和AA基因型孕妇组的舒芬太尼血药浓度均显著升高(P<0.05)。由于AA基因型孕妇组的例数较少,达不到统计检验效能的要求,因此将AA基因型孕妇组(10例)和GA基因型孕妇组(33例)合并为突变组(43例)进行后续分析。在蛛网膜下隙注入舒芬太尼后的0.5h、1h和2h,突变组的VAS评分均显著低于GG基因型孕妇组(P<0.05)。蛛网膜下隙注入舒芬太尼后1h内,突变组恶心、呕吐、瘙痒和胎心监护异常的不良反应发生率显著高于GG基因型孕妇组(P<0.05)。结论CYP3A4*1G的GA亚型、AA亚型的酶活性显著低于GG亚型,且CYP3A4*1G的突变型均可增加椎管内分娩镇痛中舒芬太尼的血药浓度,从而加强舒芬太尼的镇痛效果,但同时不良反应发生率更高。

非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因1型的表达研究

目的:检测广西非小细胞肺癌癌组织中EML4-ALK融合基因1型的表达水平并探讨其临床意义。方法:运用两步法RT-PCR技术。检测来自于我院81例非小细胞肺癌癌组织和17例支气管扩张或肺大疱等手术切除的非癌肺组织中EML4-ALK融合基因1型的表达水平。结果:81例非小细胞肺癌癌组织和17例非癌肺组织中分别检测出26例(32.10%)和14例(82.35%)EML4基因表达阳性,全部标本中EML4-ALK融合基因1型表达阴性。结论:在广西非小细胞肺癌患者癌组织标本中未检测出EML4-ALK融合基因1型的表达,可能是EML4-ALK融合基因1型在非小细胞肺癌中的表达具有区域异质性。

加味四君子汤对lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子-1α基因CXC型趋化因子受体4基因及D-木糖的影响

目的探讨加味四君子汤对肺癌小鼠可能作用机制及肺癌对小鼠消化系统的影响。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,模型成功建立后,加味四君子汤灌胃14 d,第15天脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织采用Realtime PCR方法检测缺氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)、CXC型趋化因子受体4基因(CXCR4)的表达;取血清采用间苯三酚法检测D-木糖。结果加味四君子汤干预lewis肺癌小鼠后,肺癌健脾组与肺癌组的HIF-1α、CXCR4mRNA有统计学意义(P<0.01);肺癌组和肺癌健脾组与正常组相比均有统计学意义(P<0.01)。结论加味四君子汤对肺癌有抑制作用,肺癌能降低小鼠消化吸收功能。

探讨胰岛素及胰岛素抵抗在不同ApoE基因型轻中度阿尔茨海默病中的作用

目的探讨胰岛素及胰岛素抵抗在不同ApoE基因型轻中度阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中的作用。方法纳入92例轻中度AD患者和84名健康对照者,分别记录研究者性别、年龄、教育年限、血压和体重指数(BMI),检测ApoE4基因型、血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fast serum insulin,FINS)和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR),分析AD患者以及ApoE4基因携带者AD和非携带者AD胰岛素抵抗情况。结果轻中度AD患者FINS和HOMA-IR高于对照组(P<0.05),非ApoE4基因携带轻中度AD的FINS和HOMA-IR仍高于非ApoE4基因携带对照组(P<0.05),而ApoE4基因携带轻中度AD的FINS、HOMA-IR和ApoE4基因携带对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论轻中度AD患者和非ApoE4基因携带AD的FINS、HOMA-IR指数均较正常人群升高,推测胰岛素抵抗参与了轻中度AD和非ApoE4基因携带者AD的发病,可能是未来AD预防和治疗新靶点。

广州地区婴幼儿感染Noro病毒基因型的初步研究

目的 探讨广州地区婴幼儿腹泻中感染Noro病毒的基因型。方法 用Clustal W比对GⅡ组Noro病毒后，设计处于ORF1与ORF2连接点两旁两对简并引物，进行巢式RT—PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，对ORF1与ORF2连接点两旁序列和衣壳蛋白N／S区用Clustal W进行同源性分析，用phylip 3．65软件、邻接法构建进化树。结果 标本NVgz100、NVgz10成功扩增出ORF1与ORF2连接点两旁1208bp片段（相对于Hawaii virus，U07611位置为4476—5683），包含ORF1的3’端RdRp的大部分基因和ORF2基因的5’端的S区。对标本NVgz100、NVgz10与另一实验NVgz01（DQ369797）的1208bp进行同源性分析发现，3份标本与GⅠ组同源性为58％～61％，与GⅡ组同源性为74％～92％；将这3份标本与GⅠ、GⅡ组构建进化树，可发现NVgz100、NVgz10和NVgz01与GⅡ组Bristol等病毒密切相关，将NVgz100、NVgz10和NVgz01的衣壳蛋白N／S区与GⅡ组各基酬型进行同源性比较，发现3份标本与GⅡ4基因型Camberwell、Bristolt Grimsby同源性较高（92％～96％），与其他基因型同源性为70％～73％，以N／S区构建进化树可发现3份标本与Camberwell、Bristol、Grimsby、Lordsdale处于同一簇中。结论 本实验结果表明Noro病毒株以GⅡ组为主，病毒流行的基因型为与Camberwell、Bristol、Grimsby和Lordsdale等密切相关的GⅡ-4基因型。

2009年昆明地区流行的肠道病毒71型基因特征分析

目的分析2009年昆明地区肠道病毒71型分离株VP1的遗传特征。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出VP1基因,并测序;分别用Mega4.1软件分析其遗传特征。结果中国昆明分离到的6株肠道病毒71型VP1基因的核苷酸和氨基酸同源性为95.4%～97.9%和97.3%～99.7%,与其他C基因型C1、C2、C3和C5的VP1的同源性为87.9%～89.1%和98.3%～99.1%,而与C4基因型的同源型为92.6%～98.5%和97.0%～99.7%,与SHZH98的同源性最低为92.6%和97.0%,与其他基因型的同源性为82.7%～84.6%和96.0%～97.6%。结论 2009年云南昆明流行的肠道病毒71型均为C4基因型;其VP1基因保守性较好。

贵阳地区急性胃肠炎病例中首次检出GⅠ型诺如病毒的基因特征分析

目的了解贵阳地区GⅠ型诺如病毒的基因特征。方法监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,获得1株GⅠ型诺如病毒基因序列,经与国内外流行的GⅠ型诺如病毒的各亚型序列进行系统进化及氨基酸位点的突变分析。结果检测标本426份,7份标本为GⅠ型诺如病毒阳性,测序获得的诺如病毒为GⅠ.4型,核苷酸序列和2007年韩国株及2003年日本株同源型最近,未发生氨基酸独立位点的突变。结论贵阳地区2010年夏秋季急性胃肠炎中存在GⅠ.4型诺如病毒的流行。

5-氮杂胞苷对高表达转玉米C_(4)-PEPC基因水稻耐旱性的影响

为了揭示DNA甲基化在高表达转C4-PEPC基因水稻植株对干旱耐性的作用,以高表达转玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因(C4-PEPC)水稻(PC)和受体Kitaake(WT)为材料,通过发芽、水培和盆栽试验,研究了施用不同浓度的DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azaC)联合干旱处理下,水稻芽期、苗期和生育后期,种子发芽率,苗期叶片的相对含水量、丙二醛、脯氨酸、总可溶性糖及其组分及总可溶性蛋白含量、PEPC酶活性以及C4-PEPC、与蔗糖非发酵1(SNF1)相关蛋白激酶(SNF1-related protein kinase 1s,SnRK1s)基因以及甲基转移酶基因表达的变化、剑叶的光合参数,并最后考察产量构成因子的变化,结果表明:5-azaC对水稻芽期和苗期干旱胁迫作用浓度呈现剂量效应,即低浓度促进,而高浓度抑制,其中作用浓度:芽期<苗期;而对芽期和苗期有促进和抑制的2个浓度外施于水稻生育后期的水稻植株后,则出现恶化的效应,表现为矮化、剑叶的净光合速率和单株产量下降。在缓解干旱抑制的浓度下,PC苗期的缓解效果好于WT,这种差异的表现与其内源蔗糖、SnRK1s基因以及OsMET1b的表达差异同步,而且PC叶片C4-PEPC表达对不同浓度的5-azaC处理也呈现剂量效应。综上,DNA甲基化参与了水稻干旱响应,但不同生育期表现不同,其中糖信号在调节DNA甲基化增强PC干旱耐性起重要作用。

APOE-ε4与血浆中a-β蛋白表达在早期非痴呆型血管性认知障碍(VCIND)中的意义

不符合痴呆标准的血管性认知障碍(VCI)被称为VCI-no dementia(VCIND),其特征为其特点是由脑血管损伤引起的早期或轻度认知障碍(MCI),具有隐匿性。早期诊断和适当的干预可能有助于改善VCIND的预后。如果没有早期发现或正确治疗,VCIND很可能发展为痴呆。研究发现,认知障碍往往伴随着睡眠中断,而睡眠中断又被认为会加剧;然而,有关VCIND睡眠中断的信息仍然有限。VCI是一种由脑血管危险因素或明显或不明显的脑血管疾病引起的综合征。VCI包括VCIND(血管性痴呆)以及混合性痴呆,后者被认为是反映了一个从轻度到重度认知障碍的疾病过程。VCIND由于其潜在的可逆性,已成为深入研究的重点。

轮状病毒非结构蛋白NSP4研究进展

轮状病毒 (rotavirus,RV)是病毒性腹泻的主要病因。NSP4 (nonstructural protein4 )作为轮状病毒的一种非结构蛋白 ,在病毒形态发生和致病性中发挥重要作用 ,近年来日益受到重视。本文就 NSP4的研究进展作一综述。

星状病毒ORF2基因的克隆及进化树分析

目的 探讨广州地区儿童感染的星状病毒ORF2基因特点和基因类型。方法 参考CenBank上的星状病毒Ⅰ型ORF2基因设计了两对特异性引物，进行巢式PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，用phylip3．65软件、NJ法构建进化树。结果 星状病毒ORF2基因为2316bp，编码771个氨基酸，ClustalW同源性比较发现，Hastv-gz克隆与4型星状病毒氨基酸同源性为最高（93％），与其它基因型的同源性为61％～70％。结论 广州地区儿童腹泻感染的星状病毒Hastv-gz克隆ORF2基因序列为2316bp，Hastv-gz克隆与4型星状病毒同源性为93％，以phylip3．65软件、NJ法构建ORF2基因进化树中，Hastv-gz与4型星状病毒密切相关，确认Hastv-gz是4型星状病毒。

性别对轻度认知功能障碍因素相关性的研究和进展

轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment, MCI)是指患者出现记忆力或其他认知功能减退,但未达到痴呆的诊断标准,是一种介于正常衰老与痴呆之间的认知功能障碍。MCI易转发为痴呆,且发病率随年龄的增长而增高。MCI的危险因素分为不可控性危险因素和可控性危险因素。对MCI相关因素的研究,有利于痴呆的早期干预和治疗,减轻人民、社会及国家负担,具有良好的社会价值和经济效益。本文对轻度认知功能障碍有关流行病学、载脂蛋白E4型基因、影像、危险因素及危险因素的多模态干预的最新相关研究及进展进行阐述。

The complete genomic sequence analysis of genotype 4 human astrovirus HASTVgz01 strain in Guangzhou

To analyze the genomic molecular structure and genotype of human astrovirus isolated from infant in Guangzhou of China, the primers were designed based on the genomic sequence of astrovirus from the GenBank and the target sequence were amplified by RT-PCR. Then the PCR-products were cloned to T vector and sequenced. The genomic nucleotide sequences were analyzed by the programs CLUSTAL W and DNASTAR. It was found that the full genomic length of HASTVgz01 strain was 6721 bp and the ORFs were 6558 bp. The 5' and 3' UTR were 82 and 81 nucleotides. The genome included 3 open reading frames (ORFs): ORF1a, ORF1b and ORF2. The 5'-terminal ORF1a started at nucleotide 83 and extended to nucleotide 2845. ORFlb (nt 2785 to nt 4332) overlaped ORFla by 61 nucleotides. The 3'-terminal ORF2 began at nucleotide 4325 and terminated at nucleotide 6640. ORF2 had 2316 nucleotides. Compared with other astrovirus sequences in GenBank, the homology of the amino acid sequence of ORF2 of HASTVgz01 strain with that of serotype 4 was 93% . Homology with other serotypes ranged from 61% to 70% . The complete nucleotide sequence of astrovirus HASTVgz01 strain isolated from Guangzhou in China was 6721 bp in length, GenBank accession NO. DQ344027. Comparing the ORF2 of astrovirus HASTVgz01 with the known sequences of types 1-8 the highest homology was serotype 4 (93%). Comparative sequence analysis of the HASTVgz01 ORF2 with the reported human astrovirus sequences revealed that the isolated astrovirus belongs to genotype (serotype) 4.

中国境内首次发现输入性D4基因型麻疹病例

本文报道了2009年中国首例输入性D4基因型麻疹病例。使用Vero/SLAM细胞(淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞)对该麻疹病例的咽拭子标本进行麻疹病毒分离,经逆转录聚合酶链反应(Reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)方法扩增出麻疹病毒核蛋白(Nucleoprotein,N)羧基(COOH)端676个核苷酸片段。通过对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,以COOH端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸和氨基酸同源性分析。该麻疹病毒分离株(MVi/Shanxi.CHN/20.09/1)和WHOD4基因型参考株Mont-real.CAN/89在基因亲缘性关系树上同属一个分支,核苷酸同源性为97.3%;与2009年流行于美国、加拿大、印度和俄罗斯的D4基因型麻疹野病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.0%～100%和97.3%～100%。结果表明,在本次输入性麻疹病例中分离到的麻疹病毒属于D4基因型,这对积累我国麻疹分子流行病学基线数据具有很重要的意义,同时也有助于监测和阐明麻疹病毒的传播途径。