兰州地区乙型及丙型病毒性肝炎基因型分布研究

目的探讨兰州地区乙型肝炎病毒(HBV)与丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特点。方法采用PCR-荧光探针法对2018年1月至2023年8月在该院就诊的1130例HBV感染者、1781例HCV感染者进行基因型检测。采用SPSS26.0统计学软件进行数据分析。结果HBV感染者基因型分布以C型最多,为925例(82.0%),其次为B型124例(11.0%);B、C、D基因型间患者性别分布比较,差异无统计学意义(χ^(2)=3.66,P=0.09),而在各年龄段患者中比较,差异有统计学意义(χ^(2)=33.88,P=0.01)。HCV感染者基因型分布主要为2a型930例(52.2%),其次为1b型737例(41.4%);各基因型间患者性别分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=46.31,P=0.01);各年龄段患者1b、2a基因型分布比较,差异有统计学意义(χ^(2)=18.36,P=0.01)。结论在兰州地区病毒性肝炎患者中,HBV C型与HCV 2a型为主要感染基因型;HBV B、C、D型分布与年龄有关;HCV各基因型分布与性别有关,HCV 1b、2a型分布因年龄不同而有差异。

奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效研究

目的探讨应用奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者的疗效。方法2020年1月~2022年1月我院收治的106例基因1b型CHC患者,其中观察组53例接受奥比帕利联合达塞布韦治疗,对照组53例接受达塞布韦单药治疗,两组治疗持续12周。采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清HCV RNA载量,考核超快速病毒学应答(SRVR)、快速病毒学应答(RVR)、治疗结束病毒学应答(ETVR)和随访12周时持续病毒学应答(SVR)。结果观察组SRVR、RVR、ETVR和SVR分别为88.7%、94.3%、100.0%和100.0%,显著高于对照组(67.9%、75.4%、83.0%和90.5%,P<0.05);在治疗12周结束时,观察组血清ALT和AST水平分别为(30.8±4.6)U/L和(29.7±2.4)U/L,均显著低于对照组【分别为(52.2±5.1)U/L和(48.1±3.6)U/L,P<0.05】;在治疗期间,观察组不良反应发生率为18.7%,显著高于对照组的9.4%(P<0.05)。结论应用奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型CHC患者疗效确切,可有效改善肝功能,提高血清HCV RNA转阴率,且安全性尚可。

直接抗病毒药物治疗基因1b型慢性丙型肝炎合并2型糖尿病患者疗效及对血糖控制的影响

目的 评价应用直接抗病毒药物(DAAs)治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)合并2型糖尿病(T2DM)患者疗效及其对血糖控制的影响。方法 2018年5月~2022年1月我院诊治的基因1b型CHC合并T2DM患者62例,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,各31例,在常规降糖治疗的基础上,分别给予索磷布韦维帕他韦或聚乙二醇干扰素-α联合利巴韦林片方案治疗,均连续治疗观察24周,随访24周。疗效判定包括早期病毒学应答(EVR)、治疗结束时病毒学应答(ETVR)和持续病毒学应答(SVR)。检测肝功能、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素和空腹C肽,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果 观察组EVR、ETVR和SVR分别为87.1%、100.0%和96.8%,均显著高于对照组(分别为58.1%、71.0%和64.5%,P<0.05);在治疗24 w末,观察组血清ALT、AST和GGT水平分别为35(23,47)U/L、31(19,47)U/L和62(38,81)U/L,均显著低于对照组【分别为39(36,57)U/L、42(34,64)U/L和80(47,104)U/L,P<0.05】;观察组FPG、HbA1c、HOMA-IR和空腹C肽水平分别为6.1(5.0,7.9)mmol/L、7.1(6.0,9.2)%、2.2(1.8,3.1)和1.6(1.2,2.2)ng/ml,均显著低于对照组【分别为7.1(5.5,9.4)mmol/L、7.8(6.4,9.4)%、2.8(2.1,3.4)和2.2(1.6,2.4)ng/ml,P<0.05】。结论 应用索磷布韦联合维帕他韦治疗基因1b型CHC合并T2DM患者疗效确切,同时血糖控制也较为理想。

丙型肝炎病毒基因分型的相关研究进展

丙型病毒性肝炎(丙肝)是常见的慢性传染病之一,是造成全球重大健康和经济负担的原因。丙型肝炎病毒基因分型是疾病严重程度和发病机制以及患者对抗病毒治疗反应的重要决定因素,基因分型的研究对了解丙肝流行病学特征、制定抗病毒治疗的个体化方案均有重要的临床参考价值,将有助于更好地为丙肝防治管理策略提供信息。

艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒基因1b型初治患者的疗效观察

目的:探索艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒(HCV)基因1b型初治患者的临床疗效和安全性,为临床提供参考。方法:选取2019年1月—2020年8月内江市第二人民医院感染科诊治的134例HCV基因1b型初治患者为研究对象,予以艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗12周。根据是否有肝硬化分为肝硬化组和非肝硬化组,予艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗12周,采用泰普生物科学(中国)有限公司多重PCR法检测血清HCV RNA及病毒基因型,并监测肝肾功能,了解快速病毒学应答(RVR)、完全早期病毒学应答(cEVR)和持续病毒学应答(SVR)。结果:治疗结束、停药12周与基线相比,两组患者ALT、AST、总胆红素明显降低,白蛋白明显升高,差异有统计学意义(t=6.573、6.686、6.573、6.686、2.494、2.719、-3.685、-4.014,P<0.05)。无肝硬化患者RVR达82.30%,cEVR、SVR分别为99.11%、98.23%,代偿期肝硬化患者RVR高达80.95%,cEVR、SVR均为100.00%。在治疗初期出现头痛6例,食欲下降5例,关节疼痛1例,未经特殊处理,上述症状数日后逐渐消失,在治疗观察中未发现肝功能损害明显加重病例,总的不良反应发生率为8.96%。结论:艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒基因1b型初治患者,疗效显著,并具有较好的安全性和耐受性。

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4的克隆化研究

目的 探索丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白反式激活作用的新的靶基因 ,以有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 应用表达谱芯片分析等分子生物学技术 ,结合生物信息学 (bioinformatics)技术 ,筛选、克隆HCV核心蛋白反式激活作用的新的靶基因。结果 构建了真核表达载体pcDNA3 core ,经过限制性内切酶作图分析和核苷酸序列分析证实正确无误。以pcDNA3 core转染HepG2后提取总RNA ,逆转录后进行表达谱基因芯片技术分析。应用分子克隆技术结合生物信息学技术克隆核心蛋白反式激活的新型靶基因 ,命名为HCTP4,新基因的编码基因序列全长为 2 2 44个核苷酸 (nt) ,编码产物由 748个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCV核心蛋白是具有反式激活作用的蛋白。DNA微矩阵技术 (DNAmicroarray)是分析基因表达谱变化的有效和高通量技术。发现了HCV核心蛋白反式激活作用的新的靶基因 。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法 以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论 成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。

Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立

目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。

延边地区341例慢性丙型肝炎病毒基因分型的检测临床观察

[背景]观察延边地区慢性丙型肝炎病毒（HCV）基因分型情况.[病例报告]采用荧光PCR法检测HCV RNA含量,并对含量≥104 U/mL的341例标本进行HCV基因分型检测.结果见,慢性HCV基因Ⅰ型阳性的朝鲜族和汉族分别为48,68例,阳性率分别为37.2%,32.1%,两者间差异无统计学意义（χ~2=0.942,P〉0.05）;慢性HCV基因Ⅰ型阳性的男性和女性分别为97,19例,阳性率分别为36.7%,24.7%,两者间差异有统计学意义（χ~2=3.867,P〈0.05）.[讨论]延边地区朝鲜族和汉族慢性HCV基因Ⅰ型感染阳性率间无明显差异,但性别间有显著差异.

直接抗病毒药物联合利巴韦林对老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者疗效及安全性分析

目的评估直接抗病毒药物联合利巴韦林对老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者的疗效及安全性。方法选取我院2021年4月—2022年4月安康市中医医院收治的老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者120例,给予直接抗病毒药物联合利巴韦林干预,观察患者丙型肝炎病毒(HCV)RNA转阴率、病毒学应答情况、肝功能指标及不良反应,探讨直接抗病毒药物联合利巴韦林的疗效及安全性。结果HCV RNA转阴率(66.7%、82.5%、93.3%)随着治疗时间的延长而逐渐升高(P<0.05)。随着治疗结束时间的延长,持续病毒学反应获得率(93.3%、89.2%、86.7%)逐渐降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。相较于治疗前的总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平[(21.6±3.2)μmol/L、(128.7±14.6)U/L、(83.6±9.3)U/L],治疗后均明显降低[(17.1±2.4)μmol/L、(34.2±5.8)U/L、(26.4±4.7)U/L](P<0.05)。部分患者治疗期间伴有不良反应,头晕乏力者10例,占比为8.3%;血压异常、血糖升高者各5例,占比为4.2%;胃肠道反应者4例,占比为3.3%,上述不良反应经对症治疗后全部恢复正常,患者均可耐受。结论老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者应用直接抗病毒药物联合利巴韦林治疗具有良好疗效,能够促进HCV RNA转阴,获得持续病毒学反应,并改善肝功能指标水平,临床应用安全性较高。

禽腺病毒4型GZ-B1毒株的Hexon基因序列分析

为了解禽腺病毒4型(FAdV-4)GZ-B1株的遗传进化情况,试验设计合成FAdV-4 Hexon基因的特异引物,对GZ-B1株Hexon基因进行PCR扩增并克隆至pMD-19T载体,基因测序和遗传进化分析。结果:扩增的Hexon基因长度为327 bp,与预期相符。GZ-B1株与国内外13株FAdV参考毒株中的7株FAdV-C毒株同源性较高(95.8%~98.5%),其中与国内强毒株GDMZ、LC1611、SDSG、SDXL同源性最高(均为98.5%),与基因型A、B、D、E的6株参考毒株同源性较低(73.0%~77.5%)。遗传进化树显示,GZ-B1株与基因型A、B、D、E毒株处于不同进化分支,与国内外C基因型毒株处于同一进化分支,表明该毒株与C基因型毒株遗传差异较小,其中与国内C型强毒株LC1611的遗传差异最小,亲缘关系最近。结论:FAdV-4 GZ-B1株属于C基因型、血清4型,与国内流行株FAdV-4 LC1611亲缘关系最近,同源性最高。

南京地区2007-2014年丙型肝炎病毒基因型变化分析

目的：了解南京地区2007～2014年丙型肝炎病毒（HCV）基因型分布特征以及基因型的变化，并分析其与临床诊断结果的关系。方法：采用丙型肝炎病毒基因分型试剂盒DNA测序法对丙型肝炎1262例抗-HCV阳性血清进行HCV RNA检测和HCV病毒基因分型。结果：1262份抗HCV阳性血清中HCV RNA阳性1208例（95.7%），单一基因型占91.4%，其中1b型占70.4%，2a型占9.3%，3b型占6.3%。混合基因型占4.4%，其中1b＆2a混合型占2.5%，1b＆3b混合型占1.6%，单一基因型和混合基因型分布差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：南京地区HCV基因型以1b型为主，同时有6b和6h新基因型出现，提示今后南京地区会出现多种基因型并存。

甘肃省4个不同民族丙型肝炎病毒感染的基因型特征

目的了解甘肃省4个民族丙型肝炎病毒(HCV)感染的分布特征及变异趋势。方法对甘肃省4个民族HCV感染的患者样本用实时荧光定量PCR进行病毒载量的确定,并对病毒载量大于103的样本用多重PCR进行HCV的基因分型。结果甘肃省汉族、回族、藏族及东乡族HCV感染主要以1b型为主,其次是2a型和2c型;在汉族、回族2个民族中检出3a型,藏族和东乡族中未检出;不同民族间1b型、2a型HCV感染比例比较差异无统计意义(P>0.05);在东乡族和藏族中发现了国内少见的1c型HCV感染。结论甘肃省4个民族HCV呈多基因型分布。

筛选丙型肝炎病毒1b型非结构蛋白4B慢病毒L02稳定株差异表达基因和基因通路

目的:筛选表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b型非结构蛋白4B(nonstructural protein 4B,NS4B)的慢病毒稳定细胞株L02-NS4B差异表达基因和基因通路,为深入研究HCV NS4B在慢性丙型肝炎和肝细胞癌发生中的作用及机制提供依据。方法:将已构建好的2株慢病毒稳定细胞株LO2-NS4B和阴性对照慢病毒稳定细胞株LO2-mkate2复苏扩增;应用Human Gene 1.0ST芯片筛选出LO2-NS4B与LO2-mkate2差异表达基因。基于京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库,利用Fisher精确检验和卡方检验,对差异基因参与的信号转导通路进行显著性分析。应用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,real-time QPCR)方法验证基因芯片中5个表达上调且与凋亡有关的基因,即蛋白激酶Cδ结合蛋白(protein kinase C delta binding protein,PRKCDBP)基因、肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,TP53)基因、v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物1(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 1,AKT1)基因、含3个杆状病毒凋亡蛋白抑制因子重复序列(baculoviral IAP repeat containing 3,BIRC3)基因和B细胞淋巴瘤2样1基因(B-cell lymphoma 2-like1,BCL2L1)的mRNA水平。结果:以LO2-NS4B与LO2-mkate2之间基因荧光强度的比值大于1.2或小于0.8为差异表达基因,在已知的28 869个人类基因中L02-NS4B中有2 682个差异表达基因,包括1 446个基因表达上调和1 236个基因表达下调。上调基因参与的显著性信号转导通路41项,主要有凋亡通路、细胞外基质受体相互作用通路、细胞周期通路、癌症通路和Toll样受体信号通路等;下调基因参与的显著性信号转导通路20项,主要有癌症通路、Wnt信号通路和细胞周期通路等。Real-time QPCR验证5个表达上调基因中有3个基因表达变化与基因芯片结果一致,分别是AKT1,BIRC3和BCL2L1,吻合率为60%。结论:HCV NS4B可以调节LO2细胞中与细胞凋亡、细胞周期和细胞增殖等有关的多种基因表达,主要影响与细胞凋亡、细胞周期和癌症相关的信号转导通路。

筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白4B转染细胞差异表达基因

目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)转染细胞差异表达基因,进一步阐明NS4B蛋白在丙型肝炎慢性化及致细胞发生发展过程中的分子生物学机制方法:根据HCV-H病毒株序列设计、合成HCVNS4B基因序列特异性的引物,以含有HV-H全基因组cDNA的质粒pBRTM3011作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS4B蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的HCVNS4B编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS4B.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系.HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体:pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行.DNA芯片分析.结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.以单链可变区抗体的Westernblot杂交技术证实构建的表达载体转染HepG2细胞之后有NS4B蛋白的表达,提取高质量的mRNA并逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有22个基因表达水平显著上调,34个基因表达水平显著下调.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HCVNS4B转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS4B蛋白致病的分子生物学机制提供依据.

血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化

【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、24、36、48、60、72、84和96 h的细胞样品,通过实时荧光定量PCR技术检测感染病毒后不同时间点IFN-α和IFN-β及ISGs基因在转录水平上表达量的动态变化规律。【结果】LMH细胞感染FAdV-448 h时出现典型的细胞病变;在感染12 h后,FAdV-4快速增殖,60 h时达到峰值;感染病毒后各时间点,与对照组相比,IFN-α基因转录水平表达量均显著下调(P<0.05);与对照组相比,在感染后12和24 h,IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05),在36 h时迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降且趋于稳定,但仍显著高于对照组(P<0.05);ISG 12、IFIT 5及DDIT 4基因在感染前期变化不大,在感染后36 h时迅速上调,在感染后96 h达到峰值(P<0.05);ZFP 313、IFITM 3及Viperin基因在感染前期表达量变化不大,随后在36 h迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降,但仍显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,CD 47、OAS和PKR基因均呈现下调表达。【结论】在FAdV-4感染LMH细胞后,IFN及多种ISGs在转录水平呈现规律性变化,与病毒在LMH细胞中复制存在一定的联系,表明这些天然免疫因子可能在抗FAdV-4反应中发挥着重要作用。

丙型肝炎病毒CS,NS3 NS4区抗原融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

DNA fragments of Core(300bp)and NS4(400bp),encoding the nucleocapsid region(Core)protein CS and nonstructural region(NS4)protein NS4a of HCV,have been obtained from HCV genome by PCR,both of the two fragments were liked with C33c(700bp)and formed a chineric gene C33c-Core-NS4(HCV-CCN).The chimeric gene was recombined with expression vector pET24a(+)and was expressed in Escherichia coli.The expressed protein was purified by Ni(+)NTB affinity chromatography.Its molecular weight was about 58kD.Western blotting analysis showed that the chimerical antigen had good antigenicity,which could play an important role in anti-HCV assay.

2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒基因组非结构4区全长序列的扩增、克隆及分析

目的 获得 2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒 (HCV)基因组全长非结构 (NS) 4区克隆并作序列分析。方法 用限制性片段长度多态性分析 (RFLP)基因分型方法筛选出 2a/Ⅲ型HCV一株。为了获得该毒株全长NS4区基因序列 ,依据代表株序列的NS3区之 3′末端及NS5区之 5′末端相对保守区域合成引物 ,以RT -nested -PCR方法扩增一段 1.3kb的片段cDNA ;将此片段插入pUC19质粒载体。结果 克隆了丙型肝炎基因组非结构NS4区全长基因 ,构建了pUC -NS4重组体 ,对重组体进行酶切鉴定 ,克隆的cDNA与预计的片段大小相符 ,并作序列测定。结论 获得全长NS4区基因克隆 ,经序列分析表明 ,与日本HC -J6有较高的同源性 (92 .1%)。