HBV亚基因型B和C体外重组中间体的检测(英文)

目的:检测HBV亚基因型B和C的体外重组中间体。方法:将基因型B和C序列插入载体P lenti6/V5-D-topo-X后,共转染HepG2细胞,克隆,测定转染后HBV的核酸序列,而后用软件包RDP3Beta40进行序列比对。结果:发现存在3种重组中间体,重组中间体的重组位置为1 740-1 838至2 443-2 485。R1重组中间体的重组位置为nt2 170-2 172(CAC变成TGT)和nt2 188-2 189(GA变成AC);R2重组中间体的重组位置为nt1 740(A变成T),nt1 753(C变成T)和nt1 838(G变成A);R3重组中间体的重组位置为nt2 443(C变成T),nt2 425(A变成G),nt2 480(T变成C)和nt2 483(C变成T)。结论:HBV基因型B和C共感染可以产生重组,且重组位置在基因型B和C的前核心区和核心区。

奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效研究

目的探讨应用奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者的疗效。方法2020年1月~2022年1月我院收治的106例基因1b型CHC患者,其中观察组53例接受奥比帕利联合达塞布韦治疗,对照组53例接受达塞布韦单药治疗,两组治疗持续12周。采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清HCV RNA载量,考核超快速病毒学应答(SRVR)、快速病毒学应答(RVR)、治疗结束病毒学应答(ETVR)和随访12周时持续病毒学应答(SVR)。结果观察组SRVR、RVR、ETVR和SVR分别为88.7%、94.3%、100.0%和100.0%,显著高于对照组(67.9%、75.4%、83.0%和90.5%,P<0.05);在治疗12周结束时,观察组血清ALT和AST水平分别为(30.8±4.6)U/L和(29.7±2.4)U/L,均显著低于对照组【分别为(52.2±5.1)U/L和(48.1±3.6)U/L,P<0.05】;在治疗期间,观察组不良反应发生率为18.7%,显著高于对照组的9.4%(P<0.05)。结论应用奥比帕利联合达塞布韦治疗基因1b型CHC患者疗效确切,可有效改善肝功能,提高血清HCV RNA转阴率,且安全性尚可。

接受达拉他韦和阿舒瑞韦治疗的初治基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效评价

目的观察应用达拉他韦(DCV)联合阿舒瑞韦(ASV)治疗初治的基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者的临床疗效。方法2019年10月~2021年10月我院诊治的初治的基因1b型CHC患者53例,均接受DCV和ASV联合治疗24周,随访24周。采用RT-PCR法检测血清HCV RNA载量,采用测序法分析HCV NS5A耐药相关突变(RAS),采用放射免疫分析法检测血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(Pc-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-c)和层粘连蛋白(LN)水平。结果在治疗1周、2周、4周、8周、12周、24周和随访时,53例CHC患者血清HCV RNA转阴率分别为3.7%、9.4%、43.3%、69.8%、83.0%、94.3%和94.3%,血清HCV RNA载量分别为(5.8±0.1)lg IU/ml、(5.3±0.6)lg IU/ml、(3.5±0.5)lg IU/ml、(2.2±0.6)lg IU/ml、(1.0±0.2)lg IU/ml、(0.7±0.5)lg IU/ml和(0.7±0.4)lg IU/ml,均显著低于基线水平【(6.1±0.4)lg IU/ml,P<0.05】;在治疗24周和随访时,血清AST水平分别为(22.7±11.4)U/L和(20.9±9.9)U/L,显著低于基线水平【(63.5±6.6)U/L,P<0.05】,血清ALT水平分别为(19.3±10.7)U/L和(19.2±8.5)U/L,均显著低于基线水平【(80.2±65.3)U/L,P<0.05】;在治疗过程中,估算的肾小球滤过率(eGFP)和血常规指标无显著性变化;在治疗结束和随访时,血清Pc-Ⅲ、HA和Ⅳ-c水平均显著低于基线水平(P<0.05);3例(5.6%)患者出现NS5A耐药位点突变,其中1例(1.8%)患者同时存在L31Y和Y93H位点突变,2例(3.7%)患者存在Y93H突变。结论DAC联合ASV治疗初治治疗的基因1b型感染的CHC患者近期疗效良好,无肾功能损伤表现。个别病例出现的NS5A耐药位点突变的意义还需要进一步研究。

直接抗病毒药物治疗基因1b型慢性丙型肝炎合并2型糖尿病患者疗效及对血糖控制的影响

目的 评价应用直接抗病毒药物(DAAs)治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)合并2型糖尿病(T2DM)患者疗效及其对血糖控制的影响。方法 2018年5月~2022年1月我院诊治的基因1b型CHC合并T2DM患者62例,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,各31例,在常规降糖治疗的基础上,分别给予索磷布韦维帕他韦或聚乙二醇干扰素-α联合利巴韦林片方案治疗,均连续治疗观察24周,随访24周。疗效判定包括早期病毒学应答(EVR)、治疗结束时病毒学应答(ETVR)和持续病毒学应答(SVR)。检测肝功能、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素和空腹C肽,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果 观察组EVR、ETVR和SVR分别为87.1%、100.0%和96.8%,均显著高于对照组(分别为58.1%、71.0%和64.5%,P<0.05);在治疗24 w末,观察组血清ALT、AST和GGT水平分别为35(23,47)U/L、31(19,47)U/L和62(38,81)U/L,均显著低于对照组【分别为39(36,57)U/L、42(34,64)U/L和80(47,104)U/L,P<0.05】;观察组FPG、HbA1c、HOMA-IR和空腹C肽水平分别为6.1(5.0,7.9)mmol/L、7.1(6.0,9.2)%、2.2(1.8,3.1)和1.6(1.2,2.2)ng/ml,均显著低于对照组【分别为7.1(5.5,9.4)mmol/L、7.8(6.4,9.4)%、2.8(2.1,3.4)和2.2(1.6,2.4)ng/ml,P<0.05】。结论 应用索磷布韦联合维帕他韦治疗基因1b型CHC合并T2DM患者疗效确切,同时血糖控制也较为理想。

艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒基因1b型初治患者的疗效观察

目的:探索艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒(HCV)基因1b型初治患者的临床疗效和安全性,为临床提供参考。方法:选取2019年1月—2020年8月内江市第二人民医院感染科诊治的134例HCV基因1b型初治患者为研究对象,予以艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗12周。根据是否有肝硬化分为肝硬化组和非肝硬化组,予艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗12周,采用泰普生物科学(中国)有限公司多重PCR法检测血清HCV RNA及病毒基因型,并监测肝肾功能,了解快速病毒学应答(RVR)、完全早期病毒学应答(cEVR)和持续病毒学应答(SVR)。结果:治疗结束、停药12周与基线相比,两组患者ALT、AST、总胆红素明显降低,白蛋白明显升高,差异有统计学意义(t=6.573、6.686、6.573、6.686、2.494、2.719、-3.685、-4.014,P<0.05)。无肝硬化患者RVR达82.30%,cEVR、SVR分别为99.11%、98.23%,代偿期肝硬化患者RVR高达80.95%,cEVR、SVR均为100.00%。在治疗初期出现头痛6例,食欲下降5例,关节疼痛1例,未经特殊处理,上述症状数日后逐渐消失,在治疗观察中未发现肝功能损害明显加重病例,总的不良反应发生率为8.96%。结论:艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗丙型肝炎病毒基因1b型初治患者,疗效显著,并具有较好的安全性和耐受性。

艾尔巴韦格拉瑞韦片治疗基因1b型丙型肝炎的临床效果

目的 观察艾尔巴韦格拉瑞韦片治疗基因1b型丙型肝炎的临床效果。方法 纳入2019年1月—2021年3月江苏省东海县人民医院收治的基因1b型丙型肝炎患者29例,患者均接受艾尔巴韦格拉瑞韦片治疗,疗程12周。观察患者治疗前后丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)载量、应答情况、肝功能指标、HCV-RNA转阴及不良反应。结果 29例患者治疗前HCV病毒载量为(5.89±0.43)×10^(7)U/ml,治疗后4、8、12周,HCV-RNA为未检测出。29例患者中,总应答29例,应答率为100.00%;治疗前、治疗12周后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、血清白蛋白(Alb)比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗12周后,29例患者中HCV-RNA转阴29例,转阴率为100.00%;治疗过程中,发生失眠1例、白细胞减少1例,不良反应总发生率为6.90%。结论 艾尔巴韦格拉瑞韦片治疗基因1b型丙型肝炎的效果较好,早期应答水平高,患者肝功能改善效果好,且安全性高,值得临床推广应用。

直接抗病毒药物联合利巴韦林对老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者疗效及安全性分析

目的评估直接抗病毒药物联合利巴韦林对老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者的疗效及安全性。方法选取我院2021年4月—2022年4月安康市中医医院收治的老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者120例,给予直接抗病毒药物联合利巴韦林干预,观察患者丙型肝炎病毒(HCV)RNA转阴率、病毒学应答情况、肝功能指标及不良反应,探讨直接抗病毒药物联合利巴韦林的疗效及安全性。结果HCV RNA转阴率(66.7%、82.5%、93.3%)随着治疗时间的延长而逐渐升高(P<0.05)。随着治疗结束时间的延长,持续病毒学反应获得率(93.3%、89.2%、86.7%)逐渐降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。相较于治疗前的总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平[(21.6±3.2)μmol/L、(128.7±14.6)U/L、(83.6±9.3)U/L],治疗后均明显降低[(17.1±2.4)μmol/L、(34.2±5.8)U/L、(26.4±4.7)U/L](P<0.05)。部分患者治疗期间伴有不良反应,头晕乏力者10例,占比为8.3%;血压异常、血糖升高者各5例,占比为4.2%;胃肠道反应者4例,占比为3.3%,上述不良反应经对症治疗后全部恢复正常,患者均可耐受。结论老年基因1b型慢性丙型肝炎代偿期肝硬化患者应用直接抗病毒药物联合利巴韦林治疗具有良好疗效,能够促进HCV RNA转阴,获得持续病毒学反应,并改善肝功能指标水平,临床应用安全性较高。

聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林治疗基因型1b及6a慢性丙型肝炎的血液系统不良反应对比

目的对比两种聚乙二醇化干扰素(PEG-IFN)分别联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的血液系统不良反应。方法共收集171例慢性丙型肝炎患者,其中140例采用PEG-IFN-2b(佩乐能)治疗,1.5 g/kg皮下注射,1次/周;31例采用PEG-IFN-2a(派罗欣)治疗,180 g皮下注射,1次/周。两组均联合利巴韦林治疗,剂量:PEG-IFN-2b组≥10.6 mg.kg-1.d-1,PEG-IFN-2a组为800～1 200 mg/d,口服,总疗程为48周。定期随访,观察药物不良反应,尤其对血液系统的影响。结果 171例患者均完成治疗,联合治疗后血液系统明显的不良反应/骨髓抑制的发生情况:中性粒细胞≤0.75×109/L发生率为12.87%,血红蛋白≤10 g/L发生率为16.96%;血小板≤50×109/L发生率为12.28%,经调整用药方案后血象均改善,患者均能坚持完成疗程。PEG-IFN-2b组和PEG-IFN-2a组的不良反应发生率:中性粒细胞≤0.75×109/L为12.06%vs.12.90%(P=1.000);血红蛋白≤10 g/L为17.02%vs.16.12%(P=0.892);血小板≤50×109/L为11.35%vs.16.12%(P=0.544)。HCV基因1b和6a不良反应发生率:中性粒细胞≤0.75×109/L为12.41%vs.15.38%(P=0.750);血红蛋白≤10 g/L为16.56%vs.19.23%(P=0.137);血小板≤50×109/L为11.72%vs.15.38%(P=1.000)。结论 PEG-IFN-2b与PEG-IFN-2a联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎,不良反应发生率两种PEG-IFN比较无明显差异,基因型1b和6a间不良反应发生率也无明显差异,患者均可以耐受。

中国安徽地区肝癌组织中HBV基因型的分布研究

目的研究中国安徽地区肝癌组织中HBV基因型的分布状况。方法应用基因型特异性引物PCR法对96份肝细胞癌组织和90份HBV携带者血清进行HBV基因型检测。结果在65份分型的肝癌组织标本中,B基因型23份(35.4%),C基因型28份(43.1%),B+C混合基因型8例(12.3%),B+D混合基因型6例(9.2%)。在90份HBV携带者血清中,B基因型39份(43.3%),C基因型35份(38.9%),B+C混合基因型12例(13.3%),B+D混合基因型4例(4.4%)。C基因型在肝癌组织中占优势,而HBV携带者血清以B基因型为主。结论中国安徽地区肝细胞癌组织中存在基因型B、C及混合基因型B+C与B+D,以C基因型为主,其次为B基因型。

巨细胞病毒糖蛋白B基因型与新生儿感染关系研究

目的:探讨感染新生儿人巨细胞病毒(HCMV)糖蛋白B(gB)基因型分布,研究不同HCMV gB基因型致病性的差异。方法:采用巢式聚合酶链反应(nested PCR),限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术等测定88例感染患儿尿中HCMV gB基因型,并分析gB基因型与不同临床症状的关系。结果:感染新生儿HCMV 4个gB基因型分布为gB1型占48%,gB2型占27%,gB3型占18%,gB4型占7%。不同gB基因型HCMV感染的临床表现存在差异。结论:4个gB基因型HCMV均能引起新生儿感染,以gB1型为主。不同HCMV gB型感染可导致不同的临床结果。

猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用

根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。

慢性丙型肝炎患者病毒基因型与IL-28B基因型分布

目的了解慢性丙型肝炎患者白细胞介素-28B(IL-28B)基因型多态性分布的特点及其临床意义。方法在27例慢性丙型肝炎患者,分离外周血细胞DNA,采用IPLEX Gold法检测宿主IL-28B基因多态性;分析患者IL-28B基因型与血清丙型肝炎病毒(HCV)基因型、HCV RNA载量和肝功能指标的相关性。结果在27例慢性丙型肝炎患者中,感染HCV基因1型1例(3.7%),1b基因型7例(25.9%),其它基因型19例(19/27,70.4%);在IL-28B基因型中,rs12979860 CC基因型、rs12980275 AA基因型及rs8099917 TT基因型共24例(88.9%),而IL28B rs12979860 CT基因型、rs12980275 GA基因型和rs8099917 GT基因型共3例(11.1%);在HCV基因1型或1b型感染者中,IL28B rs12979860 CC基因型、rs12980275 AA基因型和rs8099917 TT基因型占62.5%(5/8),而HCV其他基因型感染者IL28B rs12979860 CC基因型、rs12980275 AA基因型和rs8099917 TT基因型占100%(19/19);HCV基因1型或1b型感染者与HCV其他基因型感染者比,其IL28B rs12979860位点、rs12980275位点和rs8099917位点基因型分布有显著性差异(P<0.01);IL-28B基因多态性分布与患者血清HCV RNA载量或肝功能指标的变化无显著性相关。结论本组慢性丙型肝炎患者HCV基因型大多为非1型;大多数感染者IL-28B基因为rs12979860 CC、rs12980275 AA和rs8099917 TT基因型。

艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效研究

目的探讨应用艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者的疗效。方法2018年6月~2020年12月我院收治的68例基因1b型CHC患者,被随机分为观察组34例和对照组34例,分别给予艾尔巴韦/格拉瑞韦或利巴韦林联合聚乙二醇干扰素α-2a治疗24 w,随访24 w。采用ELISA法检测血清L-选择素、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果观察组快速病毒学应答、早期病毒学应答、治疗结束病毒学应答和持续病毒学应答率分别为70.6%、91.2%、97.1%和94.1%,显著高于对照组的41.2%、55.9%、64.7%和55.9%(P<0.05);在治疗4 w、12 w、24 w和随访24 w时,观察组血清HCV RNA水平分别为(1.5±0.9)lgIU/mL、(1.6±0.7)lgIU/mL、(1.2±0.6)lgIU/mL和(1.2±0.4)lgIU/mL,显著低于对照组【分别为(4.3±0.8)lgIU/mL、(4.7±0.9)lgIU/mL、(3.2±0.5)lgIU/mL和(3.2±0.5)lgIU/mL,P<0.05】;在治疗24 w结束时,观察组血清L-选择素、CRP、IL-6和TNF-α水平分别为(816.3±161.4)ng/mL、(13.7±1.9)ng/L、(84.4±18.8)pg/mL和(1.2±0.3)ng/mL,显著低于对照组【分别为(1157.4±192.3)ng/mL、(16.3±2.0)ng/L、(115.9±20.5)pg/mL和(1.6±0.3)ng/mL,P<0.05】;观察组外周血白细胞计数、血小板计数和血红蛋白水平分别为(5.4±1.1)×10^(9)/L、(101.3±17.3)×10^(9)/L和(120.8±19.5)g/L,显著高于对照组【分别为(3.2±0.8)×10^(9)/L、(86.9±16.6)×10^(9)/L和(101.6±16.2)g/L,P<0.05】。结论应用艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗基因1b型CHC患者疗效好,副作用少,可能与抑制了机体炎症反应有关。

格卡瑞韦/哌仑他韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效及安全性分析

目的探讨应用格卡瑞韦/哌仑他韦治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者疗效及安全性。方法2019年7月~2020年8月周口市中心医院收治的基因1b型CHC患者138例,采用随机数字表法将患者分为DAA组69例,给予格卡瑞韦/哌仑他韦治疗,和PR组69例,给予聚乙二醇干扰素-α2b注射剂联合利巴韦林治疗,两组均治疗12 w,随访12 w。常规检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HCV RNA及白细胞(WBC)和血小板(PLT)计数。结果在治疗结束时,DAA治疗组血清AST和ALT水平分别为(35.2±6.2)U/L和(30.7±5.4)U/L,均显著低于PR治疗组【分别为(48.4±6.9)U/L和(45.4±6.1)U/L,均P<0.05】;DAA治疗组快速病毒学应答率、治疗结束病毒学应答率和持续病毒学应答率分别为78.3%、95.7%和95.7%,均显著高于PR治疗组的65.2%、76.8%和76.8%(均P<0.05);在治疗过程中,PR治疗组外周血白细胞计数和血小板计数分别为(3.4±1.4)×10^(9)/L和(110.7±30.8)×10^(9)/L,均显著低于DAA治疗组【分别为(6.3±1.3)×10^(9)/L和(208.3±30.2)×10^(9)/L,P<0.05】;在治疗期间,DAA组不良反应发生率为5.8%,显著低于PR组的84.1%(P<0.001)。结论应用格卡瑞韦/哌仑他韦治疗基因1b型CHC患者病毒学应答率高,疗效好,而不良反应小,值得进一步临床观察。

泛基因型与特异基因型DAAs方案精准治疗基因1b型慢性丙型肝炎患者疗效对比分析

目的比较采用泛基因型与特异基因型直接抗病毒药物(DAAs)方案精准治疗基因1b型慢性丙型肝炎(CHC)患者的疗效。方法2018年1月~2020年6月我院诊治的基因1b型CHC患者75例,其中34例对照组患者接受泛基因型DAAs治疗,即19例接受索非布韦/维帕他韦口袋,15例口服索磷布韦/达拉他韦;41例研究组接受特异基因型DAAs治疗,即23例口服艾尔巴韦/格拉瑞韦,18例口服奥比帕利/达塞布韦。两组均持续治疗12周。采用实时荧光定量PCR法检测血清HCV RNA。比较两组超快速病毒学应答(SRVR)、快速病毒学应答(RVR)、早期病毒学应答(EVR)和持续病毒学应答(SVR)。结果在治疗12周末,研究组血清ALT和AST水平分别为(31.9±4.1)U/L和(32.5±4.1)U/L,与对照组[分别为(32.7±4.2)U/L和(31.9±3.7)U/L,P>0.05]比,无显著性差异;研究组SRVR、RVR、EVR和SVR分别为87.8%、97.6%、100.0%和100.0%,与对照组(分别为88.2%、94.1%、100.0%和100.0%)比,差异均无统计学意义(P>0.05);索非布韦/维帕他韦治疗患者SRVR、RVR、EVR和SVR分别为84.2%、100.0%、100.0%和100.0%,索磷布韦/达拉他韦治疗患者分别为86.7%、93.3%、100.0%和100.0%,艾尔巴韦/格拉瑞韦治疗患者分别为91.3%、100.0%、100.0%和100.0%,奥比帕利/达塞布韦治疗患者分别为88.9%、94.4%、100.0%和100.0%,四组所有病毒学应答率均无显著性差异(P>0.05);治疗期间两组不良反应发生率为11.8%对12.2%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论当前应用的无论是泛基因型还是特异基因型DAAs方案治疗基因1b型CHC患者均具有良好的疗效,且安全性良好。是否可以不区分感染病毒基因型选择药物治疗,值得进一步研究。

IL28B基因型对慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗中干扰素选择的指导

目的检测IL28B的基因分型,并探讨不同IL28B基因型的疗效与干扰素种类的关系。方法检测IL28B基因的rs12979860位点和rs8099917位点,将患者分为优势组和非优势组,并统计普通IFN和聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)联合利巴韦林抗病毒治疗分析RVR率和SVR率。结果优势组应用普通IFN和PEG-IFN后的RVR率分别为82.20%和83.33%,SVR率分别为88.98%和87.50%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05);而非优势型组中,应用普通IFN和PEG-IFN RVR率分别为16.00%和41.40%,SVR率分别为28.00%和55.17%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测宿主IL28B基因优势型患者初始治疗可选择普通IFN;而非优势型患者初始治疗建议选择PEG-IFN,但总体RVR率、SVR率仍不高。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗高病毒载量1b基因型丙型肝炎患者无病毒学应答的预测因素分析

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗高病毒载量1b基因型HCV患者无病毒学应答的预测因素。方法选取于2010年2月至2014年12月我院接受的聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗的HCV基因1b型感染的慢性HCV初治患者72例。治疗3周后检测病毒学应答状态,无应答组患者23例,有应答组患者49例。回顾性统计患者的一般临床资料及相关指标,并做统计学分析。结果有应答组患者HCV病毒RNA水平及HCV病毒核心抗原水平均明显下降,在第1天到第14天的每个时间点上两组比较差异均具有统计学意义(P<0.001)。最高的HCV病毒RNA水平HCV病毒核心抗原水平曲线下面积均在第2周发生。第2周HCV病毒RNA消耗及耗损准确性均最高,其准确性与白细胞介素-28B minor+C区氨基酸70替代突变的准确性一致。结论从治疗开始后2周内的病毒动力学分析,特别是IL-28B基因多态性和病毒突变,2周时的病毒应答情况是最有效的无病毒学应答的预测因素。因此,在2周时病毒下降有可能作为重要的预测指标。

家蚕B型清道夫受体基因的鉴定及系统发生与表达分析

B型清道夫受体(SR-B)是清道夫受体超基因家族成员,参与机体的脂类代谢、动脉粥样硬化形成或保护、宿主免疫损害防御、凋亡细胞清除和细胞粘附等重要生命过程。基于家蚕全基因组数据,利用比较基因组学方法,鉴定获得了14个家蚕B型清道夫受体基因,这些基因分布在至少5条染色体上,其内含子的大小从几十到近万个碱基对。系统发生分析表明,14个家蚕B型清道夫受体基因分布在3个类群:第1类群中分布的9个基因和第3类群中分布的3个基因,分别与类群中其它昆虫的同源基因形成明显的直系同源关系;第2类群中分布有2个基因,此类群中不同昆虫的同源基因之间的进化关系较为复杂。EST数据和芯片数据分析表明,多数家蚕B型清道夫受体基因具有转录活性。RT-PCR检测结果显示,有8个家蚕B型清道夫受体基因在5龄第3天幼虫组织中表达,并具有不同的表达模式,推测这些基因可能行使不同的功能。研究结果为进一步诠释家蚕B型清道夫受体基因的功能奠定了基础。

乙型肝炎病毒B、C基因型全基因组序列的克隆

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型全基因组序列克隆。方法从HBV无症状慢性携带者中筛选B、C基因型,提取病毒核酸,设计引物,应用高保真酶对3 200bp的HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建pGEM-HBV重组质粒,测序后进行序列分析。结果获得HBV B基因型和HBV C基因型重组质粒各1株。结论成功构建HBV B基因型和HBV C基因型的全基因组序列克隆,可为进一步研究HBV分子流行病学和基础研究提供工具。