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基于CRISPR/Cas9点突变技术构建HIV-1基因型耐药检测质控品
1
作者
丁梦君
张鑫
+2 位作者
王宇
姚均
金聪
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
2024年第3期231-238,共8页
目的人外周血淋巴细胞株8E5可分泌无感染性HIV-1病毒颗粒,靶向于8E5细胞株基因组整合的HIV-1前病毒基因POL区,基于CRISPR/Cas9点突变技术构建含有POL区耐药突变位点的单克隆细胞株,可用于制备一种安全稳定的新型HIV-1基因型耐药检测质...
目的人外周血淋巴细胞株8E5可分泌无感染性HIV-1病毒颗粒,靶向于8E5细胞株基因组整合的HIV-1前病毒基因POL区,基于CRISPR/Cas9点突变技术构建含有POL区耐药突变位点的单克隆细胞株,可用于制备一种安全稳定的新型HIV-1基因型耐药检测质控品。方法设计构建小向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9共表达载体以及携带有目标突变位点的供体单链寡核苷酸(donor single-stranded oligonucleotides,Donor ssODN)共转染8E5细胞,通过流式微孔板分选获得转染成功的阳性单克隆细胞株,通过Sanger测序确认定点突变的编辑效果。对定点突变编辑成功的单克隆细胞株培养至第3代、5代和7代的细胞及细胞分泌到上清中的HIV病毒颗粒进行Sanger测序,验证定点突变的编辑效果。结果成功构建双sgRNA和Cas9共表达载体,与携带有耐药突变位点Q151M的Donor ssODN共转染8E5细胞株的效果良好。对分选获得的共转染阳性单克隆细胞株进行靶位点测序,结果显示成功构建了携带有定点突变Q151M的纯合子单克隆细胞株8E5Q151M。细胞株8E5Q151M多次传代后的细胞及细胞分泌的无感染性HIV-1病毒颗粒可被持续检测出Q151M突变位点。结论利用CRISPR/Cas9点突变技术成功构建稳定携带有Q151M耐药突变位点的细胞株8E5Q151M,为制备HIV-1基因型耐药检测质控品提供新的技术平台。
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关键词
CRISPR/Cas9点突变技术
8E5细胞株
hiv-
1
基因
型
耐药检测
质控品
原文传递
中国发现国内艾滋病耐药毒株
2
《医学信息(药品营销采购)》
2003年第1期63-63,共1页
关键词
基因型hiv-1
耐药性
中国
国内艾滋病耐药毒株
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9点突变技术构建HIV-1基因型耐药检测质控品
1
作者
丁梦君
张鑫
王宇
姚均
金聪
机构
中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心
出处
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
2024年第3期231-238,共8页
基金
国家重点研发计划(2022YFC2305202)。
文摘
目的人外周血淋巴细胞株8E5可分泌无感染性HIV-1病毒颗粒,靶向于8E5细胞株基因组整合的HIV-1前病毒基因POL区,基于CRISPR/Cas9点突变技术构建含有POL区耐药突变位点的单克隆细胞株,可用于制备一种安全稳定的新型HIV-1基因型耐药检测质控品。方法设计构建小向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9共表达载体以及携带有目标突变位点的供体单链寡核苷酸(donor single-stranded oligonucleotides,Donor ssODN)共转染8E5细胞,通过流式微孔板分选获得转染成功的阳性单克隆细胞株,通过Sanger测序确认定点突变的编辑效果。对定点突变编辑成功的单克隆细胞株培养至第3代、5代和7代的细胞及细胞分泌到上清中的HIV病毒颗粒进行Sanger测序,验证定点突变的编辑效果。结果成功构建双sgRNA和Cas9共表达载体,与携带有耐药突变位点Q151M的Donor ssODN共转染8E5细胞株的效果良好。对分选获得的共转染阳性单克隆细胞株进行靶位点测序,结果显示成功构建了携带有定点突变Q151M的纯合子单克隆细胞株8E5Q151M。细胞株8E5Q151M多次传代后的细胞及细胞分泌的无感染性HIV-1病毒颗粒可被持续检测出Q151M突变位点。结论利用CRISPR/Cas9点突变技术成功构建稳定携带有Q151M耐药突变位点的细胞株8E5Q151M,为制备HIV-1基因型耐药检测质控品提供新的技术平台。
关键词
CRISPR/Cas9点突变技术
8E5细胞株
hiv-
1
基因
型
耐药检测
质控品
Keywords
CRISPR/Cas9 point mutation technology
8E5 cell line
hiv-
1
genotypic drug resistance test
Quality control materials
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
中国发现国内艾滋病耐药毒株
2
出处
《医学信息(药品营销采购)》
2003年第1期63-63,共1页
关键词
基因型hiv-1
耐药性
中国
国内艾滋病耐药毒株
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR/Cas9点突变技术构建HIV-1基因型耐药检测质控品
丁梦君
张鑫
王宇
姚均
金聪
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
2024
原文传递
2
中国发现国内艾滋病耐药毒株
《医学信息(药品营销采购)》
2003
0
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