表达马立克氏病病毒gI基因的重组鸡痘病毒的构建

以马立克氏病病毒 (MDV) 648株基因组DNA为模板 ,用PCR方法扩增 gI基因 ,将其插入到鸡痘病毒转移载体pFG1 1 75 1 ,通过脂质体方法转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用蓝斑筛选方法纯化 4次 ,得到重组FPV ,用PCR方法证实 gI已插入到FPV基因组中 ,以间接免疫荧光试验鉴定重组FPV在CEF中表达了 gI基因 ,重组FPV命名为rFPVMDV648gI。

伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建

对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通过PCR扩增约 0 .3kb的SV40Poly(A)片段 ,并将其克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1的NotI和PstI位点 ,利用pFastBac1的BamHI和PstI将含有 9个酶切位点以及SV40Poly(A)的片段亚克隆到pUSK(E)的相应位点 ,在插入的同时导致gG基因 5’端编码区约 40 0bp的缺失 ,构建了由gG启动子驱动gG部分编码区缺失的通用转移载体pgG Uni。序列分析进一步证实 :有 7个单一酶切位点可供外源基因直接插入。

肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原CS6和霍乱毒素B亚基在人伤寒沙门菌中的共表达及其免疫学效果观察

目的 :构建表达肠毒素性大肠杆菌菌毛抗原基因CS6和霍乱毒素B亚基 (CTB)基因的细菌性腹泻基因工程多价疫苗。方法 :以基因工程减毒的人伤寒沙门菌为抗原载体 ,利用基于asd基因功能互补的宿主染色体_质粒平衡致死表达系统 ,实现了在没有抗生素选择压力的条件下 ,CS6和CTB在人伤寒沙门菌中的稳定表达。结果与结论 :检测结果表明 ,CS6和CTB的表达虽对宿主菌的生长有一定影响 ,但经过一段时间的培养 ,重组菌株仍可达到高密度生长。动物免疫结果显示 ,重组菌株在家兔体内均可诱生相应抗体 ,但从诱生的抗体效价、抗体持续时间方面评价 ,单独表达CS6与CTB的重组菌株的免疫学效果均好于两者共表达的重组菌株 ,提示在以后的疫苗研究实践中 ,可以考虑将分别表达CS6与CTB的重组菌株按一定比例混合 ,组成联合疫苗 ,用于细菌性腹泻的免疫预防。本研究结果对于细菌性腹泻基因工程多价疫苗的构建有指导意义。