基因工程戊型肝炎疫苗进入Ⅰ／Ⅱ期临床

由福建省医学分子病毒学研究中心研发的我国第一种拥有核心自主知识产权的基因工程疫苗——重组戊型肝炎疫苗，正式获准进入Ⅰ／Ⅱ期临床试验。该疫苗也有望成为世界上继乙肝疫苗之后第二个基因工程病毒疫苗，为病毒性肝炎的防治揭开了崭新的一页，对于我国生物制药产业具有里程碑式的意义。

我国首个基因工程戊型肝炎疫苗进入临床试验

据医学空间网1月12日报道，我国首个拥有核心自主知识产权的基因工程疫苗-戊型肝炎疫苗，日前正式获准进入Ⅰ／Ⅱ期临床试验，该疫苗有望成为世界上继乙肝疫苗之后的第二个基因工程病毒疫苗。

ASDP/ASDE3作为乙型肝炎基因工程疫苗新型复合佐剂的效果及安全性

以中药当归[Angelica sincnsis(Oliv) Diels]研制的新型复合免疫佐剂——ASDP/ASDE3与哺乳动物细胞系表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)合用,经动物试验表明,其免疫佐剂效果明显优于现用的氢氧化铝胶佐剂,免疫动物血清抗-HBs水平及阳转率均比后者高,且疫苗的ED50可降低3～4倍。动物多途径局部及整体给药的急性毒性试验均显示毒性很小,说明ASDP/ASDE3是一种值得深入研究的新型免疫佐剂。

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗免疫小鼠的初步研究

本研究将含ＨＥＶＯＲＦ３ｃＤＮＡ的真核表达质粒作为基因疫苗直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨胳肌内，引发了实验小鼠特异性抗－ＨＥＶＩｇＧ反应。小鼠经２次基因疫苗接种或１次基因疫苗，然后用ＨＥＶ重组蛋白加强免疫后，血清抗－ＨＥＶＩｇＧ滴度较接种１次基因疫苗组明显升高。

戊型肝炎流行病学特征及疫苗研发进展

[背景]戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(HEV)感染导致的急性传染病,是全球重要的公共卫生问题之一,全球每年约2000万人感染HEV.而接种疫苗是预防控制戊型肝炎最有效的途径.2012年由厦门大学联合厦门万泰沧海生物技术有限公司生产的全球首个HEV疫苗益可宁在中国上市,目前陆续已有多种不同类型HEV疫苗进入临床.[进展]本文主要系统梳理近年来国内外HEV的流行病学特征,其中在发展中国家HEV-1和HEV-2为优势基因型,在发达国家以HEV-3为主,少量HEV-4感染.针对HEV的基因组学以及蛋白结构特征进行系统回顾,并对处于临床阶段的两款HEV重组疫苗以及已上市的HEV疫苗益可宁的免疫原设计、临床结果进行系统分析比较.[展望]针对戊型肝炎全球流行暴发情况、HEV作用受体和致病机制、HEV疫苗接种后的卫生经济学效益等相关方向开展深入研究,将为科学防控戊型肝炎以及新一代HEV疫苗的研发提供重要依据.

戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗的初步研究

目的 构建含戊型肝炎病毒 (HEV)开放读码框架 (ORF2 )和ORF3嵌合基因的重组质粒 ,并探讨其作为DNA疫苗的可能性。方法 利用PCR方法获得约 0 8kb的戊型肝炎ORF2片段和ORF3的完整片段 ,同时将 2段片段克隆到同一真核表达载体 pcDNA3中 ,构建出含有ORF2和ORF3嵌合基因的质粒 pcHEV2 3;该重组质粒作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,观察其在小鼠体内诱发的体液免疫应答和细胞免疫应答。结果 质粒DpcHEV2 3免疫组小鼠特异性抗体水平明显高于对照组。T细胞增殖反应显著强于空质粒对照组 (P <0 0 5 ) ,与生理盐水对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 重组质粒 pcHEV2 3可诱发小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答 ,可为戊型肝炎DNA疫苗的研制提供依据。

国产乙型肝炎基因工程疫苗阻断乙型肝炎母婴传播的研究

观察分别接种地鼠巢细胞（ＣＨＯ）和酵母菌表达的乙型肝炎病毒表面抗原基因工程疫苗的母亲ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ同时阳性新生儿２０例和１２０例。于３月龄时检出婴儿ＨＢｓＡｇ阳性２０例，随访至２４个月，１６例ＨＢｓＡｇ持续阳性成为ＨＢｓＡｇ慢性携带者，保护率８８１５％。抗ＨＢｓ阳性率和抗ＨＢｓ滴度均于婴儿９～１２月龄时达一高峰（１００％，１１２２８）。酵母菌表达的乙肝基因疫苗预防保护率和抗ＨＢｓ阳性率与ＣＨＯ苗无显著性差异。两种疫苗均具有较好的免疫源性和近保护效果。

戊型肝炎基因工程疫苗研究进展

戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus，HEV）经消化道途径传播，是戊型肝炎（Hepatitis E，HE）的致病因子。戊肝最早是1980年在印度发现的。1983年HEV首次被分离到。被病毒的基因组一直到1991年才得以测序。并在1989年东京国际会议上正式命名。

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗的初步实验研究

戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因疫苗的初步实验研究北京医科大学流行病学教研室鲁凤民，庄辉，朱晓洁，李凡基因疫苗是近年来发展起来的一种免疫接种技术，其基本原理是将表达病原体抗原的基因ＤＮＡ直接导入宿主靶组织的细胞中，利用宿主细胞合成该病原体的抗原蛋白，并引发...

乙型肝炎基因工程疫苗免疫原性和免疫效果研究

为了解不同类型乙肝疫苗免疫学特性,提供选择生产路线的依据,对基因工程乙型肝炎疫苗的免疫原性和免疫效果进行了研究。实验结果表明:不同来源乙肝抗原结构不同,诱导的细胞免疫和体液免疫水平也有所不同。无糖基化的酿酒酵母抗原诱导Th1细胞反应能力强于其它种类糖基化抗原,对CHO疫苗进行去糖基化后,细胞免疫水平增强,与单克隆抗体反应的表位密度发生改变。在严格控制抗原量、孕妇的HBeAg水平和检测试剂等条件下,对518名免疫14批乙肝疫苗的新生儿进行母婴传播阻断研究,同时对2291名免疫21批乙肝疫苗的小学生进行1～7年的免疫观察,证明国产乙肝酵母疫苗母婴传播阻断保护率达到80.56％～92.59％,与国外酵母疫苗相同,5μg国产酵母疫苗虽然剂量小,诱导的抗体较低,但保护效果高于其他糖基化疫苗,与血源疫苗30μg相当,说明可能细胞免疫起主要作用。国产酵母疫苗抗体阳转率在免后5年时与Merck疫苗水平相当,但低于10μg Amgen和血源疫苗。建议尽早加强免疫。乙肝疫苗免疫失败与 HBV S抗原变异、孕妇 HBV DNA含量高等因素有关。

哺乳动物细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原基因工程疫苗的研制与试用

乙型肝炎病毒(HBV)感染已成为人类健康的严重威胁。在我国HBV传播广,带毒率高(8.83％,一般认为10％左右),急性、慢性肝炎患者多,晚期并发肝硬变和肝癌(约占肝癌的80％)病死率高。对乙肝病毒感染尚无特效药物,唯独用疫苗接种可以预防感染。目前使用血源疫苗由于产量不足,难供计划免疫之需,并有污染其它病原体的潜在危险,急需研制基因工程第二代疫苗。在疫苗供应充足的条件下。

慢性戊型肝炎的诊治进展

据世界卫生组织估计,戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)每年全球约有2000万例的新发感染,可能导致超过300万例急性肝炎。我国是戊型病毒性肝炎(戊肝)高流行区,近年来戊肝发病人数已超过甲型病毒性肝炎(甲肝)。戊肝发病率从2010年的1.77/10万上升至2019年的2.02/10万。我国HEV感染途径主要为食源性感染。慢性HEV感染是指患者感染HEV后,血或粪便中病毒核酸持续阳性3个月以上,其多发生于免疫低下人群,并可能导致患者出现肝纤维化和肝硬化的快速进展。我国以HEV 4型感染为主,因此我国慢性戊肝患者感染的病毒也主要为HEV 4型。HEV感染诊断主要依据特异性HEV抗体或病原学指标。HEV感染筛查应着重关注基础肝病患者、育龄期妇女和老年人及免疫缺陷患者(如器官移植患者、血液肿瘤患者、HIV感染者)等。戊肝诊治中仍然存在很多问题,包括慢性戊肝患者肝纤维化快速进展的危险因素尚未明确;老年男性和孕妇感染HEV后易出现重症的机制有待研究;抗HEV药物筛选多为体外细胞模型的结果,治疗药物仍处于临床前研究阶段。今后应聚焦戊肝的发病机制研究,推动基础研究和临床研究的交叉、融合与转化,为慢性戊肝诊治的药物治疗提供更多有效方案。

两种基因工程乙型肝炎疫苗随机化临床比较研究

方法 用酵母乙肝基因疫苗 (A苗 )和含前S2抗原乙肝基因疫苗 (B苗 ) ,接种成人、儿童与HBsAg和HBeAg双阳性母亲的新生儿 ,采用 0、1、6月接种方案 ,于免后 1、6、7个月采血 ,用Abbott MEIA试剂检测。结果 第 7个月时 ,成人、儿童和新生儿抗HBs阳转率和几何均数分别为 (除注明外 ,其余均为 5 μg/针 ) 89 4%、 147 16mIU/ml (成人A ) ;89 6 %、2 92 48mIU/ml(成人B) ;97 8%、831 19mIU/ml(成人B :10 μg/针 ) ;10 0 %、 5 5 1 5 7mIU/ml (儿童A ) ;10 0 %、979 2 6mIU/ml(儿童B) ;90 5 %、2 82 88mIU/ml(新生儿A +HBIG) ;80 8%、2 6 5 5 2mIU/ml(新生儿B +HBIG) ;84 1%、180 0 9mIU/ml(新生儿A)和 71 1%、117 6 3mIU/ml(新生儿B)。分析结果表明 ,两种疫苗在使用剂量和方案相同时 ,免后抗HBs阳转率、几何均数以及新生儿HBsAg阳性率都没有统计学差别。 7个月两种疫苗母婴阻断率分别为 :83 8% (A +HBIG)、89 1% (B +HBIG)、81 9% (A)和 6 7 2 % (B)。结论 上述两种乙肝基因疫苗的安全性、免疫原性和阻断乙肝病毒母婴传播近期效果相似。

基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用

设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为102～104;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为102,参考引物能检出的稀释度为101～102.在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29.4%;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11.8%.E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18.2%;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45.6%.以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物.

戊型肝炎病毒结构区基因在大肠杆菌中的表达及其在诊断中的应用

利用融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二（ＯＲＦ２）和第三读码框（ＯＲＦ３）区的两个抗原表位，并利用ＯＲＦ２表位上游自然存在的限制性内切酶位点和ＯＲＦ３下游通过ＰＣＲ引入的限制性内切酶位点，使两个免疫表位区域形成嵌合。表达的三种抗原均溶于水。可利用商品化的谷胱甘肽－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。经试用发现，基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性。

大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为 1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎 ;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染 ;1 0 μg和 5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。 3个剂量免疫组及对照组另外 3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。另有 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。这些结果表明

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 p16 6MexMcAbs的杂交瘤细胞株 ,然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEVORF2编码蛋白p16 6的免疫反应性。结果 :获得 4株杂交瘤细胞株 ,即分泌抗 p16 6BurMcAbs的 2C2 、2B1 以及分泌抗 p16 6MexMcAbs的D8G1 0 和E5E1 2 ,其中 2B1 分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合 ,而其余 3株分泌的McAbs既能与I、II基因型HEV的p16 6重组蛋白发生反应 ,也能与III、IV基因型的p16 6蛋白反应。结论 :HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。