SDS在HCV基因工程抗原包被中的应用研究

在间接EL ISA法检测HCV抗体过程中,通过使用含有十二烷基硫酸钠(SDS)的包被液对HCV基因工程抗原固相化,发现使用SDS提高了HCV间接EL ISA法诊断试剂检测的阳性标本和阴性标本的偏比,改善了反应模式,为改善HCV-EL ISA法诊断试剂的质量提供了有效途径.

胰蛋白胨对HCV基因工程抗原的稳定作用

在间接ELISA法检测HCV抗体过程中,当HCV基因工程抗原通过包被过程固相化后,用两种不同的封闭液分别封闭聚苯乙烯微孔酶标板,比较封闭后的酶标板在37℃放置3d和6d后的相对稳定性数据.结果表明:在封闭液中使用胰蛋白胨可显著提高基因工程抗原的稳定性.

麻疹病毒血凝素基因工程抗原及其抗原性检测(英文)

将麻疹病毒 (Nepal株 )的血凝素 (hemagglutinin)基因插入真核表达载体pIRES EGFP ,并在HeLa细胞中表达 .因其较低的表达量 ,所以将其截短 ,去除跨膜区 .使这个截短的HA基因与绿色荧光蛋白基因融合 ,并克隆至原核表达载体pET 2 8b中 .将重组质粒转入大肠杆菌中表达 ,产生了分子量约为 90kD的融合蛋白 .通过ELISA和Western印迹来检测这个基因工程蛋白的抗原性 .在检测一系列的血凝素阳性或阴性的人血清中 ,这个融合蛋白的阳性检出率为 90 % ,阴性检出率为 10 0 % (与市售麻疹病毒诊断试剂盒相比较 ) .由于此HA蛋白是原核表达产物 ,回避了真核表达系统复杂的操作过程和昂贵的费用 ,所以 ,这个麻疹病毒血凝素基因工程抗原有望成为一种新型。

伯氏疏螺旋体基因工程抗原ELISA法检测莱姆病特异IgG抗体

目的 :利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原P39建立间接ELISA法检测莱姆病特异性抗体IgG。方法 :基因工程抗原P39的包被浓度和酶二抗所用浓度及血清稀释倍数 ,均由棋盘试验确定 ,并进行了精密度 ,特异性试验 ,阻断试验 ,免疫复合物溶解试验 ,干扰试验。结果 :基因工程抗原P39最佳浓度为 2 0 0ng·ml- 1,用ELISA法鉴定 ,P39蛋白与两株P39单克隆抗体均发生特异性反应。测定 90例血清 ,其中 50例阳性 ,4 0例阴性 ,与进口试剂盒比较 ,两方法符合率 93.3% ,结论 :该方法特异性强 ,敏感性高 ,实验结果可靠 。

应用基因工程表达抗原建立检测HP感染的ELISA诊断

应用基因工程表达的经过纯化的CagA和Hsp - 5 8二种抗原作为诊断抗原建立的酶联免疫吸附实验 (ELISA) ,对 87份不同型胃病及 2 0 0份正常人血清中抗幽门螺杆菌 (HP)抗体进行检测。结果证明 :在慢性胃炎和消化性溃疡病中HP感染占 76 %以上 ,尤其肠化生伴随萎缩胃炎HP感染占 10 0 %。所以该法特异性强 ,敏感性高 ,无创伤 ,检测时间短 ,操作简单 ,尤其适用于初筛非溃疡性消化不良和慢性胃炎中HP抗体的检测并可以指导药物治疗及效果的观察和流行病学调查 ,是一项简便、可靠。

MUC1嵌合抗原受体-基因工程NK细胞治疗难治/复发恶性实体肿瘤患者的护理

总结了MUC1 CAR-NK细胞治疗难治/复发恶性实体肿瘤患者临床效果与整体护理措施。12例难治/复发恶性实体肿瘤患者接受MUC1 CAR-NK细胞治疗,制定并实施相应的整套护理流程,着重加强对患者预处理的护理,细胞回输的护理,肿瘤溶解综合征(TLS)的观察与护理,同时采取心理护理等措施。12例难治/复发恶性实体肿瘤患者中,6例发热,其中短暂发热1例,发热伴畏寒寒颤5例;另外6例患者无明显症状,无严重不良反应。11例患者顺利出院,1例患者因疾病原因消化道大出血抢救无效死亡。通过对接受MUC1 CAR-NK细胞治疗的12例难治/复发恶性实体肿瘤患者的精心医治及整体护理,避免了TLS的发生,帮助患者克服了恐惧心理,特别是对其可能产生的各种并发症的系统护理,使MUC1 CAR-NK细胞治疗的风险降低到最小化,值得临床推广应用。

用基因工程表达的抗原早期诊断鼻咽癌

目的为了建立鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断方法。方法以基因工程表达的、经纯化的ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）早期抗原（ＥＡ）成分ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ作为诊断抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检查３０例ＮＰＣ病人及４９例正常人血清中的ＥＡ／ＩｇＡ抗体。结果用ＥＬＩＳＡ检测抗体较用细胞涂片免疫酶方法（ＩＥ）敏感。ＥＬＩＳＡ检测ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体，阳性率为１００％，ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价均≥１∶１００。而用ＩＥ法，平行检测３０例ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价，结果６例为阴性（＜１∶１０），抗体阳性率为７０％。ＥＬＩＳＡ明显地提高了ＮＰＣ的检出率。以ｐ１３８（ＥＡ－Ｒ）和ｐ５４（ＥＡ－Ｄ）分别或混合包被，检测对ＥＢＶ特异的ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ的抗体。结论表明在ＮＰＣ病人血清中存在对ＥＡ两种抗原的抗体，对ＥＡ－Ｄ的抗体滴度高于对ＥＡ－Ｒ的抗体。因此，以两种抗原混合包被作为诊断抗原建立的ＥＬＩＳＡ方法，为ＮＰＣ的早期诊断提供更敏感、特异和简便的手段。

ELISA法检测猬迭宫绦虫抗体的研究

目的 探讨研制猬迭宫绦虫特异性诊断方法。 方法 将已克隆的编码猬迭宫绦虫幼虫半胱氨酸酶的基因重组到表达载体内 ,制备高纯度的基因工程抗原 ,以此基因工程抗原制成酶联免疫吸附试剂盒 ,检测 6例裂头蚴病患者血清。 结果与结论 基因工程抗原能与裂头蚴病患者血清发生很强的特异性反应 ,而不能与囊虫病患者血清发生反应。此方法的建立为裂头蚴病的特异性诊断奠定了基础。

检测梅毒螺旋体抗体的纤维膜条方法的建立及其在诊断中的应用

目的:建立以纤维膜为载体的检测梅毒螺旋体抗体的方法,检查病人血清中对梅毒螺旋体多种抗原的抗体,用于梅毒感染的诊断。方法:将基因工程表达及纯化的梅毒螺旋体蛋白tp15、tp17、tp42和tp47分别结合在纤维膜上,用载抗原的纤维膜条检查血清中的抗体,抗体阳性者在相应抗原位置显示出特异条带。结果:梅毒螺旋体感染者血清中存在特异性抗体,在检查的460份临床诊断的患者血清中,对tp15、tp17、tp42和tp47抗原的抗体检出率分别为41.3%、100%、98.7%和51.7%;134份献血员血清抗体阴性。结论:建立的检测梅毒螺旋体感染的方法可同时检查对多种抗原的抗体,以纤维膜条作为诊断条检测血清抗体方法简便,用于临床诊断更特异、更敏感。

乳胶凝集试验检测鸡传染性法氏囊病毒血清抗体的研究

以鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因工程抗原致敏乳胶微粒,用IBDV阳性血清进行方阵滴定,以最佳致敏系件制成乳胶抗源,建立乳胶凝集试验(LAT),用来检测血清中IBD抗体。对467份待测血清分别、同时作LAT和双向琼琼脂免疫扩散试验(DATA)。结果,LAT阳性419份,阴性48份;DAGT阳性425份,阴性42份.试验表明乳胶凝集试验操作简便、快速、敏感性高、特异性强,可用于现场检测,适合基层单位检测IBDV血清抗体。

致力于人类健康事业 阻断疾病传播途径

北京金豪制药有限公司是从事生物技术领域的高新技术企业。1993年成立，公司位于北京经济技术开发区，占地面积6000平方米。自成立以来，公司自行研发了多项基因工程抗原和单克隆抗体，先后成功研制了传染病系列、肿瘤系列、生化系列和血型系列等体外诊断试剂产品。

抗HBeAg不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及其应用

目的建立检测人乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的双单抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂。方法用基因工程HBeAg免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌针对抗原不同位点单抗的杂交瘤细胞株。将构象型位点单抗和线性位点单抗配对做夹心ELISA,选择最匹配的一对建立双单抗夹心HBeAg检测试剂,并与人抗HBeAg多抗包板、单抗标酶的HBeAg检测试剂盒做对比试验。结果建立了89株能稳定分泌小鼠抗HBeAg的杂交瘤细胞株,其中63株单抗针对构象型位点,26株单抗针对线性位点。挑选出最匹配的7E6和e1构建成检测HBeAg的双单抗夹心ELISA检测试剂。与人抗HBeAg多抗包被、单抗酶标检测试剂对比,双单抗试剂具有更高的灵敏度,而其他指标基本一致。结论我们用不同位点的HBe单克隆抗体建立了高灵敏度、高特异性的有实用价值的HBeAg双单抗夹心ELISA检测试剂。

人外周血中SLA-P1抗原特异性T细胞前体频率及其细胞因子分泌格局分析

用基因工程表达并纯化的版纳猪SLAI类P1为抗原 ,经两轮刺激PBMC以3H TdR法检测 1 0名健康人外周血中的特异性T细胞前体频率在 6 67× 1 0 7～ 1 0 8× 1 0 6 之间。用ELISA与RT PCR法进一步分析了抗原特异性细胞的细胞因子分泌特点 ,发现所有抗原阳性孔都呈现IFN γ (+) /IL 4( )的典型Th1型格局。以上结果部分明确了外周血SLA P1特异性T细胞的特征 ,为揭示SLA P1特异性T细胞在猪