基因工程腺病毒H101逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药性的实验研究

背景及目的:耐药性产生是化疗失败的主要原因之一,克服耐药性的方法之一是使用逆转剂。目前尚无一种理想的、可应用于临床的顺铂(DDP)耐药逆转剂。本研究探讨基因工程腺病毒H101对DDP耐药性的逆转作用及其机制。方法:体外利用人肺腺癌细胞株A549的DDP耐药模型A549/DDP,采用MTT法检测H101对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用。用流式细胞仪(FCM)测定细胞多药耐药蛋白1(multidrugresistantprotein1,MRP1)、谷胱甘肽鄄S鄄转移酶(GST)及TOPO鄄Ⅱ蛋白表达量,荧光鄄考马斯亮蓝法检测细胞内GSH含量,原子吸收法测定细胞内铂浓度。结果:A549/DDP细胞对DDP的耐药指数为14.3。加入H101后,DDP对A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)由352.4μmol/L降至61.6μmol/L,逆转倍数为5.7倍。FCM检测结果显示,A549/DDP细胞的GST和TOPO鄄Ⅱ蛋白水平均较A549细胞高,而两种细胞内均未检测到MRP1的表达,经H101处理后的A549/DDP细胞胞内GST蛋白和TOPO鄄Ⅱ蛋白水平均明显下降。A549/DDP胞内GSH含量比A549高2倍多;H101感染A549/DDP细胞后,胞内的GSH含量下降,随着H101剂量的增加,胞内GSH含量逐渐下降,达A549细胞内GSH水平。原子吸收法测定细胞内铂含量的结果显示,A549细胞内铂含量是A549/DDP细胞内铂含量的3倍,加入H101后,A549细胞内铂的含量无明显变化,但A549/DDP细胞内铂的含量明显增加。结论:H101能逆转A549/DDP对DDP的耐药性,H101逆转DDP耐药性的机制可能是减少A549/DDP细胞内GSH和TOPOⅡ蛋白的水平,增加了A549/DDP细胞内铂的蓄积。

CEA基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞的影响

目的:研究癌胚抗原(CEA)特异性基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,以探讨影响H101敏感性的内在因素。方法:利用RNA干扰技术,构建针对人食管癌EC9706细胞的CEA siRNA载体,通过基因转染,在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系(干扰1组及干扰2组),并以空载体转染和未进行转染的EC9706细胞作对照,用H101在体外进行细胞毒性实验。结果:在此实验任何病毒浓度下,干扰2组与空载体组和对照组比较,生存率明显下降,有统计学意义(P<0.05);而干扰1组在低病毒浓度(≤1vp/cell)下,与空载体组和对照组比较,生存率下降,有统计学意义(P<0.05),当病毒浓度>1vp/cell时,无统计学意义(P>0.05)。结论:提示CEA在H1001感染并杀伤肿瘤细胞过程中可能起一定作用,为进一步从基因水平探讨CEA的作用机制和提高溶瘤腺病毒的治疗效果打下基础。

植物抗病毒基因工程的研究进展

自１９８６ 年首次成功获得转基因抗病毒植物以来，植物抗病毒基因工程的研究与应用在世界各地蓬勃发展。本文综述了国内外在这方面的研究进展及最新成就，以及此领域的存在问题和前景展望。

基因工程改造腺病毒治疗头颈部-食管鳞癌Ⅲ期临床研究

目的探讨基因工程改造腺病毒(H101)局部注射治疗头颈部-食管鳞癌的疗效和安全性。方法分治疗组(A1,A2)和对照组(B1,B2),A1组:H101+PF;B1组:PF;A2组:H101+AF;B2组:AF。结果A1组共8例,CR1例,PR6例,SD1例;B1组共6例,CR1例,PR1例,MR1例,SD3例;A2组共2例,均为SD;B2组共2例,MR1例,SD1例。结论H101对头颈部肿瘤有较好的疗效,且毒副反应较低,易为病人接受。

兰花病毒病分子生物学及抗病毒基因工程研究进展

建兰花叶病毒(CymMV)、齿兰环斑病毒(ORSV)和建兰环斑病毒(CyRSV)是危害兰花的主要病毒。文章综述这几种重要兰花病毒的病毒分子结构、分子检测、卫星RNA、DI RNA、SiRNA及其转基因研究进展,并就今后的研究重点和方向作了展望。

植物抗病毒基因工程研究进展及存在的问题

将近年来植物抗病毒基因工程的方法策略总结归纳为3个方面进行了综述,即:利用来源于病毒的基因、利用植物自身的抗病毒基因和采用多基因策略。并就当前存在的问题及其发展趋势进行了探讨。

抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病。在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件。在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护。在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体。这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播。

论我国烟草抗病毒基因工程

本文介绍了植物抗病毒基因工程的研究与发展，对我国烟草抗病毒基因工程研究现状。

我国马铃薯抗病毒基因工程研究进展

10年来我国已合成克隆了PVX、PVY、PLRV的外壳蛋白基因 ,复制酶基因 ,蛋白酶基因 ,基因调控序列 ,核酶cDNA及其他各种基因并进行了序列分析。建立了完善的致瘤农杆菌介导的马铃薯转化技术。通过外壳蛋白基因介导 ,复制酶基因介导 ,表达基因调控序列和核酶等基因工程途径 ,获得了一批不同程度上抗PVX、PVY、PVX和PVY ,PVY和PLRV ,PLRY及高抗PSTVd的转基因马铃薯栽培种。这些转基因马铃薯多数已进入田间试验。不久一批抗病毒的优质高产的马铃薯栽培种 ,经过进一步发育 ,必将在生产中推广应用。抗病毒转基因马铃薯培育成功 ,为我国马铃薯病毒病害防治开辟了一条崭新的途径 。

CEA特异性RNAi增强基因工程腺病毒H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤

目的研究癌胚抗原(CEA)特异性基因沉默对基因工程腺病毒H101杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,以探讨影响H101敏感性的内在因素。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对人食管癌EC9706细胞的CEAsiRNA载体,通过基因转染,在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系,并以空载体转染和未进行转染的EC9706细胞作对照,建立人食管癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,H101瘤内注射。用RealTimePCR和免疫组化法检测CEA在移植瘤中的表达,测量肿瘤体积。结果降低CEA在mRNA和蛋白质水平的表达,对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤成瘤时间和大小无明显影响,H101瘤内注射后,干扰组肿瘤体积显著小于空载体组和对照组(P<0·05)。结论抑制食管癌EC9706细胞中CEA的表达,能增强H101的敏感性。

抗传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

前言 1925年鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害.疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施.目前,国内外用于预防ILT的都是中强毒力的活疫苗,这些疫苗毒力普遍偏强,接种后反应大.这些疫苗与强毒株一样也能导致持续感染,在鸡体间传播可使毒力返强,使免疫鸡群有可能成为潜在的传染源.而且疫苗免疫后没有一个有效的诊断方法以区别免疫鸡和自然感染鸡,因此,这些疫苗只能限于在传染性喉气管炎流行地区使用.

1日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究

将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产生较强免疫力,能够抵抗传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株强毒和鸡痘病毒(FPV)102株的攻击。以上结果显示,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同途径免疫1日龄雏鸡,具有良好的安全性和有效性。

鸡基因工程复合抗病毒制剂冻干保护剂的筛选

采用不同高压灭菌条件处理的不同比例的脱脂奶粉、蔗糖、海藻糖以及维生素C组成的保护剂配方对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行冻干,冻干后通过外观检查、p H值检测、复水性检测及效价测定比较筛选出了理想的冻干保护剂,之后将普通水剂型和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂分别置于4℃、-20℃、-70℃条件下进行保存期试验,结果表明采用脱脂奶粉+蔗糖、脱脂奶粉+蔗糖+海藻糖+维生素C两种配方对鸡基因工程复合抗病毒制剂的保护效果最好,冻干后效价仍为220;普通水剂和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂在-70℃保存条件下保存360天内效价均未降低,普通水剂分别于90天、180天后效价开始明显下降,而冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂的效价均无明显降低,稳定性良好。本研究初步筛选出了鸡基因工程抗病毒制剂的冻干配方,显著延长了其保存期,为鸡基因工程抗病毒制剂规模化生产和推广应用奠定了基础。

TSA联合基因工程腺病毒H101治疗食管癌皮下移植瘤的研究

目的研究曲古霉素A(TSA)对基因工程腺病毒H101杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性和作用机制。方法 1)先成瘤后治疗组,构建裸鼠食管癌移植瘤模型,待肿瘤长至肉眼可见的肿块(约8 mm×7 mm)后分组。TSA治疗组:每只每次瘤内注射1.0μmol/L TSA;H101治疗组:瘤内注射50×108vp/d H101;TSA联合H101治疗组:即先注射TSA,第2天注射H101,注射剂量同上。另设空白对照组,以上治疗持续2周,治疗结束取瘤组织检测;2)先处理后成瘤组:分别采用浓度为4.0μmol/L TSA体外处理EC9706细胞48 h,浓度200×108vp/d H101处理EC9706细胞48 h及两者联合处理EC9706细胞48 h,同样设置不做处理的空白对照组,将处理后的细胞种植于裸鼠左上肢腋下构建裸鼠食管癌移植瘤模型。待肿瘤长至肉眼可见的肿块(约8 mm×7 mm)后,取瘤组织用RT-PCR、W estern b lot和免疫组化法检测柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在移植瘤中的表达,测量肿瘤体积。结果无论是先处理后成瘤组还是先成瘤后治疗组,TSA组和TSA联合H101组均可上调裸鼠食管癌移植瘤组织中CAR蛋白的表达,与空白对照组和H101组比较差异均有统计学意义(P<0.05),但TSA组和TSA联合H101组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。而TSA联合H101组对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤大小影响与TSA、H101组比较差异均有统计学意义(P<0.05),TSA与H101组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各治疗组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TSA能增强H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤,其作用机制之一是TSA上调了食管癌CAR蛋白的表达。

植物抗病毒基因工程研究进展

简要讨论了近年来植物抗病毒基因工程的方法策略,主要有:植物自身的抗病毒基因策略、来源于病毒的抗性基因策略、干扰素、核酶等抗性策略;并分析了其存在问题及发展趋势。

伪狂犬病病毒基因工程苗研究现状

用疫苗免疫接种是防制伪狂犬病病毒(PRV)感染的重要途径。以往使用的疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗,这些疫苗用于初发地区的猪场效果较好,但免疫接种猪虽能减轻临床症状,却不能控制病毒的传染和排毒,也无法用血清学方法区别免疫接种猪和野毒感染猪,给该病的净化带来了困难。为此,各国在发展和改进现有疫苗的同时,探索研究并推广了基因工程苗,这种疫苗不仅安全有效。