基因工程酵母产植酸酶的酶学性质研究

对重组基因工程酵母 (PP NP 1)进行诱导培养 ,然后对诱导表达物进行饱和硫酸铵分级沉淀 ,再对沉淀进行Western印迹 ,证实其为特异的植酸酶 ;再对基因工程菌所产植酸酶进行纯化 ,并对其酶学性质进行了研究。研究结果 :测得其分子量为 70 2kD ;酶作用最适温度为 5 5℃ ;在 pH 2 5～ 5 6范围内植酸酶均具较高的酶活性 ,最适pH为 4 6 ;另外Ca2 + 、牛血清白蛋白、Mn2 + 、Mg2 + 对酶有激活作用 ,而HPO42 、SDS、Cu2 + 、Fe2 + 对酶有抑制作用。

基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化

目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。

基因工程酵母产木聚糖酶(xylA)的性质初探

将高效分泌表达木聚糖酶的基因工程酵母S2接种于FA、FB诱导培养基 ,2 0 0r/min ,30℃发酵培养 4d ,研究其分泌的木聚糖酶性质。结果表明 ,该基因工程菌产木聚糖酶分子量约为34.4kDa ,最适作用pH值为 4 .0 ,最适作用温度为 37℃。镁、亚铁、镍、锌、钙等金属离子对木聚糖酶活性有不同程度的促进作用 ,汞、银、锰、铜、铁、碘等金属离子对木聚糖酶有显著的抑制作用 ,EDTA对木聚糖酶的活性没有显著的影响 ,但 5mM的SDS几乎使木聚糖酶完全失活。

不稳定的基因工程酵母生长动力学研究

应用数学模型方法描述重组质粒由于拷贝数的增加以及基因表达产物——乙型肝炎表面抗原在受体细胞内积累造成对Leu^+表型细胞生长的阻遏作用。模拟丢失重组质粒的细胞生长规律,给出其形成后可能的年龄-时间分布。根据这两类不同表型细胞同时生长的轨迹,得到重组质粒丢失频率与Leu^-表型细胞生长的关系。因此,可把发酵过程中基因工程酵母丧现出重组质粒的不稳定归于两种作用:重要的是Leu^+表型细胞分裂时具有不对称的质粒分配,其次是在丰富培养基中这两类不同表型细胞具有不同的生长速率。

基因工程酵母产植酸酶的应用性质研究

本文详细介绍了基因工程酵母产植酸酶的应用特性 ,包括对酸碱。

毕赤酵母植酸酶基因工程菌高密度培养及诱导表达

研究了毕赤酵母基因工程菌高密度发酵培养方式和植酸酶基因高效表达策略。采用逐步增加流加方式进行高密度培养,结果发酵液中细胞干重达到64 g/L。通过在线检测细胞消耗甲醇的MSUR,估算细胞在单位时间内对甲醇需求量,从而确定甲醇流加速率,采用此种方法可使重组毕赤酵母高水平表达植酸酶,最终发酵上清液中总蛋白量为8.58 g/L,植酸酶活力达到853 U/mL。

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。

ST酿酒酵母基因工程菌对大鼠肠道菌群的影响

为了研究ST酿酒酵母基因工程菌对大鼠肠道菌群的影响,试验将90只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、工程菌组及酵母菌组,分别灌服生理盐水、工程菌菌液、酿酒酵母菌菌液,持续21 d后连续3 d灌服大肠杆菌H10407菌液,分别收集灌胃7,14,21天及攻毒后的各组大鼠粪便,提取粪便细菌DNA,利用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)、实时荧光定量PCR检测了ST酿酒酵母基因工程菌对肠道菌群微生物可操作单元(OTU)和肠道5种重要细菌(类杆菌、梭菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌)数量的变化,并测定了肠道菌群pH值。结果表明:在灌胃期间,工程菌组及酵母菌组的OTU值和双歧杆菌、梭菌数量极显著高于空白对照组(P<0.01),其他细菌数量均不同程度升高。各组pH值均呈现下降趋势,第21天时,工程菌组及酵母菌组pH值极显著低于空白对照组(P<0.01)。攻毒产肠毒素大肠杆菌后,工程菌OTU值和类杆菌、乳杆菌、双歧杆菌数量均极显著高于其他两组(P<0.01),pH值极显著高于空白对照组(P<0.01)。与灌服前相比,工程菌组的OTU值、细菌数量及pH值均变化幅度最小。说明ST酿酒酵母基因工程菌能够改善肠道菌群结构,丰富肠道菌群多态性,降低pH值,增加有益菌群的数量。当动物机体受到产肠毒素大肠杆菌感染时,ST酿酒酵母基因工程菌能够有效降低产肠毒素大肠杆菌对肠道菌群的破坏,发挥预防保护作用,维持肠道内菌群稳定。

基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。

固定化“双功能”酵母基因工程菌在酒精工业生产中的应用

应用基因克隆技术将黑曲霉产糖化酶基因cDNA转入经优化的受体菌(酿酒酵母京龙JL108号),获得多株具有产糖化酶能力的酿酒酵母,再经反复筛分、驯化获得JL1(YIp128D.17N),采用变性PVA固定化增殖活细胞包埋技术,将JL1制成具有糖化酒化“双功能”的固定化酵母,大幅度提高细胞数,增强了大生产基因工程菌的糖化、酒化能力,载体产酶能力在10u/g·h以上,酒精发酵醪液中酶活达20u/ml以上,在年产5000t的富川县酒精厂进行工业性生产应用试验,技术指标完全达到并超过传统工艺的生产水平,淀粉出酒率达55%以上。

酿酒酵母基因工程菌的构建及应用的研究

酿酒酵母是发酵工业的重要微生物,主要用于酒精、啤酒和面包工业。传统的酿酒酵母选育改良方法主要为自然筛选、诱变育种和杂交育种,但这些方法专一性不强。基因工程技术提高了选育及改良酿酒酵母方法的特异性。随着1996年酿酒酵母全基因组测序工作的完成,利用基因工程技术构建酿酒酵母基因工程菌已经成为当前的主流。科学家们也为酿酒酵母相应地构建了多种有效的质粒载体,并探索出相应的基因转化方法。

工程酵母显著提高异丁醇产量

近日麻省理工学院（MIT）的化学工程师和生物学家构建了一种工程酵母，可以显著提高异丁醇产量。在基因工程酵母中，异丁醇的合成完全在线粒体中进行。线粒体不仅是能量产生的细胞组织，并且包含着许多生物合成途径。通过这种方法，异丁醇的产量提高了260％。

DNA技术在酵母与发酵过程中的应用

[前言]本文是根据1999年5月11日作者在伯明翰举行的“酵母研究最新进展”研讨会上的发言整理而成的。也许是普通出版物中有关基因工程方面的内容比较多,许多人认为所谓的DNA技术就是遗传操纵或制造基因工程生物。其实基因工程生物只不过是DNA技术的一部分,许多新的方法以及在物种染色体结构与功能方面获得的新知识都推动着DNA技术的发展。本文将探讨DNA技术在酿造领域的应用与发展前景,尤其是不属于基因工程的内容。本文简述了如何通过分子生物学的相关知识与研究进展更好地了解发酵过程的生物学本质;如何发展更好的控制系统,并为生产筛选出性能更好的酵母培养物(而不是对酵母进行基因改造)。据本人所知,还没有生产厂家计划使用基因工程生物进行啤酒生产。本文的主要论题包括: -DNA技术在酵母和生产发展中的应用,包括选择和改良天然酵母培养物; -验证用基因改造技术已经成功地用于酿造酵母菌株; -酵母菌株的发展应符合工业生产的需要; -酵母基因技术的起源及需要进一步研究的课题; -新技术的应用和前景展望。

毕赤酵母基因工程菌产植酸酶发酵条件的研究

该试验对毕赤酵母基因工程菌产植酸酶的发酵条件作了初步的研究,分别对接菌量、接菌种龄、诱导发酵pH及甲醇添加量进行了研究与分析。

酿酒酵母及EtpA酿酒酵母基因工程菌对大鼠小肠黏膜结构的影响

为了调查酿酒酵母及Etp A酿酒酵母基因工程菌对大鼠小肠黏膜生长发育状况的影响,120只健康断奶SD大鼠,随机分为空白对照组、酿酒酵母菌组、Etp A酿酒酵母基因工程菌组,分别灌胃生理盐水、酿酒酵母菌液、Etp A酿酒酵母基因工程菌液2 m L/只,持续28 d后连续3 d灌胃大肠杆菌菌液。分别取7、14、21和28 d及灌胃大肠杆菌后大鼠的十二指肠、空肠、回肠制作石蜡切片,HE染色,显微镜下观察,记录各段小肠绒毛的宽度、长度、隐窝深度及绒毛长度/隐窝深度比值(V/C)。结果显示:1)与空白对照组相比,酿酒酵母菌组及Etp A酿酒酵母基因工程菌组的十二指肠绒毛长度、V/C在第21和28天时均显著升高(P<0.05);空肠绒毛长度、V/C在第28天均极显著升高(P<0.01)同时隐窝深度显著下降(P<0.05);回肠V/C在第28天显著升高(P<0.05);各肠段绒毛宽度均无显著差异(P>0.05)。2)灌胃大肠杆菌后,与Etp A酿酒酵母基因工程菌组相比,空白对照组及酿酒酵母菌组的空肠绒毛长度、V/C均极显著下降(P<0.01);回肠V/C均显著下降(P<0.05)。结果表明:酿酒酵母和Etp A酿酒酵母基因工程菌均可以促进肠道黏膜发育,提高消化吸收能力;Etp A酿酒酵母基因工程菌对肠道黏膜的保护作用更显著。