基因干预后胶质瘤A172细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的观察体外基因干预后HIF-1α和VEGF表达的变化,从而探讨HIF-1α在胶质瘤血管新生调控中所起的作用。方法CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,反转录聚合酶链式反应(qPCR)、免疫荧光法、Westernblot法和ELISA双抗体夹心法比较基因干预HIF-1α前后,胶质瘤A172细胞相关mRNA和蛋白表达量变化。结果缺氧环境下HIF-1αmRNA表达未见明显变化,VEGFmRNA表达明显增多;缺氧培养8、16、24h,HIF-1α及VEGF蛋白表达依次增多。基因干预成功后缺氧培育24h,HIF-1α及VEGF蛋白表达明显减少,与未转染组比较,转染抑制率分别是86.3%和78.9%,VEGFmRNA表达抑制率是81.5%。结论siRNA干预抑制HIF-1α表达后VEGF表达明显减少。缺氧促使A172细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,HIF-1α通过转录激活VEGF促进胶质瘤缺氧状态下的血管新生。

变应性鼻炎造模及基因干预方法

变应性鼻炎(AR)作为近年来的常见疾病,具有病情反复、发病机制复杂、治疗手段局限等特点。在AR的基础研究中,对于疾病发展进程的探索动物疾病模型的建立必不可少,AR动物模型主要通过卵清蛋白、屋尘螨、细胞因子等作为变应原进行腹腔注射和(或)滴鼻等方式建立,虽众多研究人员均成功建立动物模型,但目前最佳造模方式尚无定论。同时基因干预措施作为分子组学研究的重要组成部分,亦有举足轻重的作用。动物AR模型的构建及干预方式多样,缺少规范统一的客观指标评价,但其从源头上决定后续所有实验的成败。因此,应对现有造模方式进行充分了解,以最大限度地避免实验失败,确保后续实验顺利进行,缩短实验周期。

人体基因干预技术的伦理挑战及出路

近几年,基因技术在医学领域获得极大地发展,提高了人类对生命的主动干预能力。但人体基因干预技术的进步也带来诸多伦理挑战,如何及时有效应对这些挑战是当前基因伦理研究的紧迫任务。人体基因干预技术的伦理挑战主要有侵犯人的基本权利、破坏传统家庭关系、挑战社会公平正义等。究其原因在于技术本身的特点、人对技术的运用、社会环境等因素。应对基因干预技术的伦理挑战应当协调工具理性和价值理性、发展和统一相关伦理原则、完善相关法律,从而实现基因技术的良性发展。

基因干预:从道德哲学的观点看

无论在生物学上还是在伦理学上,基因编辑都是非常重要的事件,需要我们进行理性的反思。从道德哲学的观点反思基因干预,我们应该追问三个问题:这种基因干预是对的还是错的?它是一件好事还是坏事?它是正义的还是不正义的?我们要想回答这样三个问题,就需要某种评判的标准。基于"权利"的标准,我们认为这种基因干预是正确的,起码不是错误的。基于"帕累托改善"的标准,我们认为这种基因干预是一件好事,而不是坏事。基于"机会平等"的标准,我们主张这种基因干预是正义的。也就是说,我们有充分的道德理由支持基因干预。

生命伦理如何为后人类时代的道德辩护——以“人类基因干预技术”的伦理为例进行的讨论

人类基因干预技术所展现的生命伦理境域,激起了后人类时代的道德论辩或道德辩护。它既是技术革命,同时也是引发人们伦理观变革的哲学革命。哲学形而上学对"第一因"的本体预设,在现代技术的"强求"和"座架"之统治中得到了实现,它同时表征"第一因的消解"及其精神魅力的丧失。基因干预技术是这种"精神"祛魅的集中体现,它表明现代技术的"随缘构境"所展现的世界区分与伦理境域必然关涉到世俗人类因素,并引发生命伦理学论域中的诸种道德合理性辩护。生命伦理学介入后人类时代的道德合理性论辩的关键在于:如何在干预中守护人的自由生命本质。

从传统伦理到境遇伦理:人类基因干预技术伦理的思维转向

以功利主义和道义论为代表的传统伦理学难以应对人类基因干预技术的技术风险和伦理风险。与之相比,境遇伦理学具有全局性道德思维、强调伦理共同体的价值诉求、突出道德选择的权衡性以及承担自由决断的道德责任等理论特征,能够有效应对人类基因干预技术带来的风险挑战。境遇伦理学既注重伦理规范的普遍性原则,又强调原则适用的具体情境,从而实现了伦理规则与技术境遇的融通,为人类基因干预技术的发展提供了切实的伦理引导。

人类基因干预的三种分配正义原则及其评析

分配正义是关于人类基因干预的重要议题。分配正义原则规范着人类基因干预如何促进社会正义。目前国外学界针对人类基因干预所构建的分配正义原则主要有三种,即基因的适当最小化原则、基因差异原则、充足与优先混合原则。但是,这三种原则均面临着理论困难。在基因的适当最小化原则中,基因的最低界限代表着人的正常功能,但这种正常无法面对文化和价值观念多元化的社会现实。基因差异原则无法确立基因最弱势者的标准,且未能解决其与生育自由的矛盾。充足与优先混合原则试图超越前两种原则,但忽视了基因与环境的相互影响以及基因干预中自由与责任的关系。虽然这些原则存在一定局限性,但对人类基因干预伦理规范的构建仍具有一定启示意义。

肝脏靶向表达大鼠白介素-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制

目的探讨肝脏靶向表达rIL-10基因对猪血清诱导的大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 rIL-10基因通过尾静脉快速大容量注射法转移至大鼠体内,RT-PCR法检测大鼠肝、肾、脾和肺组织rIL-10 mRNA的表达及S-P免疫组化法检测rIL-10蛋白在肝脏中表达。30只体质量100～120 g清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=6)、纤维化模型对照组(n=8)、rIL-10基因干预组(n=8)和空质粒对照组(n=8)。正常对照组与其余3组大鼠腹腔分别注射生理盐水和猪血清,0.5 ml/只,每周2次。第5周开始造模同时,rIL-10基因干预组和空质粒对照组大鼠分别从尾静脉注射pcDNA3-rIL-10和pcDNA3空质粒,每周1次。第8周末处死全部大鼠收集组织和血清备用。HE、天狼星红染色分别检测各组肝组织病理形态学和Ⅰ、Ⅲ胶原的改变,生化检测血清ALT和AST含量。结果 RT-PCR和免疫组化证实rIL-10基因经尾静脉快速大容量注射转染到大鼠体内后主要在肝组织中转录及表达;纤维化模型和空质粒对照组:HE染色显示大鼠肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润,大量胶原沉积形成粗细不等的纤维隔,部分假小叶形成;天狼星红染色显示肝组织中大量Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维沉积;血清中ALT和AST表达水平较正常对照组明显升高(P<0.01)。与对照组比较,rIL-10基因干预组大鼠HE染色显示肝细胞变性坏死程度减轻、炎细胞的浸润减少,胶原沉积明显减少,天狼星红染色显示Ⅰ、Ⅲ型胶沉积面积显著下降(P<0.01),血清中ALT和AST表达水平显著降低(P<0.01)。结论 尾静脉快速大容量注射法可使rIL-10基因在肝组织靶向表达,靶向表达的rIL-10有效抑制猪血清诱导的大鼠肝纤维化形成。

小鼠神经生长因子基因重组腺病毒的构建及其在基底膜上的表达

目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerveg rowth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在耳蜗基底膜上的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mR-NA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(eGFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1pAd-track-CMV-eGFP-mβNGF;在HEK293细胞中包装成为有感染能力的,能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒。用病毒感染原代培养的耳蜗基底膜,激光共聚焦显微镜下观察病毒感染效率,RT-PCR法检测βNGF基因在基底膜上的转录表达,蛋白质免疫印迹法检测βNGF在基底膜上的蛋白表达。结果成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1pAdtrack-CMV-eGFP-mβNGF构建成功。激光共聚焦显微镜下观测到感染病毒的基底膜发出明亮的绿色荧光,分别在mRNA和蛋白质水平证实有外源性βNGF的表达。结论重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导入体外培养的基底膜细胞中,并在基底膜中转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的βNGF对内耳各类细胞的保护作用奠定基础。

腺病毒介导小鼠神经生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerve growth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在骨髓间充质干细胞中的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mRNA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌BJ5183中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF;在HEK293(人胚肾293细胞)细胞中包装成为有感染能力的、能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒。用病毒感染原代培养的人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem-cells,MSCs),荧光显微镜下观察病毒感染效率,免疫细胞化学法检测细胞中βNGF的蛋白表达,蛋白质免疫印迹法检测培养上清中NGF的分泌。结果成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF构建成功。荧光显微镜下观测到感染病毒的细胞胞体发出明亮的绿色荧光,细胞中βNGF免疫染色阳性,培养上清中检测有NGF分泌。结论重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导入骨髓间充质干细胞中,并能正确转录、翻译和分泌,为骨髓间充质干细胞在内耳基因干预的研究中奠定基础。

SLE相关基因IFIT1免疫调节功能的初步研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)相关基因IFIT1的功能。方法:首先将IFIT1从穿梭表达克隆转入真核表达克隆,然后转导进入Jurkat细胞系,用有限稀释法筛选单克隆;再用CD3和CD28刺激单克隆,检测膜分子的表达、细胞凋亡、增生、细胞因子分泌等免疫生物学指标;最后应用RNAi技术,下调IFIT1的表达,检测细胞因子分泌,比较分析IFIT1的功能。结果:IFIT1的过度表达在T细胞中能诱导白细胞介素IL-4和IL-10的分泌增加,下调IFIT1的转录水平后能部分下调IL-4和IL-10表达,而与细胞膜分子的表达、细胞的增生、凋亡无关。结论:SLE相关新基因IFIT1在细胞因子的产生中起了重要作用,可能与Thl/Th2的失衡有关。

系统性红斑狼疮相关基因功能的实验研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)相关基因IFIT1的功能。方法:首先将IFIT1从穿梭表达克隆转入真核表达克隆,然后转导进入Jurkat细胞系,用有限稀释法筛选单克隆;再用CD3和CD28刺激单克隆,检测膜分子的表达、细胞凋亡、增生、细胞因子分泌等免疫生物学指标;最后应用RNAi技术,下调IFIT1的表达,检测细胞因子分泌,比较分析IFIT1的功能。结果:IFIT1的过度表达在T细胞中能诱导IL-4和IL-10的分泌增加,下调IFIT1的转录水平后能部分下调IL-4和IL-10表达,而与细胞膜分子的表达、细胞的增生、凋亡无关。结论:SLE相关新基因IFIT1在细胞因子的产生中起了重要作用,可能与Thl/Th2的失衡有关。

BLCAP基因干扰表达载体的构建及对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。报告如下。

儿茶酚胺敏感性多形性室速的基因诊治进展

儿茶酚胺敏感性多形性室速(CPVT)是具有较高猝死风险的罕见单基因遗传病.已知多种CPVT基因突变可通过影响肌浆网钙通道蛋白RyR2的功能,破坏细胞内钙稳态,触发室性心律失常,而依靠腺相关病毒载体(AAVs)及CRISPR/Cas9技术进行基因层面的干预有望为CPVT的治疗提供新思路.本文就其遗传特征及基因干预等领域的研究现状作一总结.

基因公义与罕见疾病之健康照护权利

健康照护目前受到许多国家的关注,自2000年开始,在台湾的保健制度中,增加了罕见疾病的支付。这个发展固然有其人道意义,但涉及医疗资源的公平分配问题,需要深入分析。在医疗照护资源分配的公义理论中,最全面和一贯,而又言之成理的莫过于丹尼尔斯(Norman Daniels)发挥罗尔斯(John Rawls)的公义理论而成的医疗照护公义论。有关医疗照护和基因干涉的公义问题,除了分析丹尼尔斯的论述外,将更进一步运用儒家的相关论述,作一响应,和申论这两方面的公义问题,可以有怎样的合理的构想。

肝脏靶向基因治疗的临床研究进展

通过加入异源遗传活性物质对生命单元中的原有遗传物质进行活性改变或补充等可统称为基因干预,应用于临床则称之为基因治疗。基因治疗的目的包括治疗、治愈或预防某种疾病或医学状态。基因治疗可通过多种机制策略实现临床目的,主要包括:用健康版本替代致病版本的基因;使致病基因的不正常功能失活;引入一个新的或改造后的基因。

骨科的基因治疗：一匹黑马

在人们的印象中，骨科学和基因冶疗似乎很难有什么联系，人们通常认为骨骼系统的遗传异常通常是罕见而复杂的。但最新的观点认为，骨科疾病的基因干预治疗，同样也是大有可为。