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海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:4
1
作者 张稚兰 刘静雯 +2 位作者 董双林 苏国成 张彦锋 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页
在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量... 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 病毒主要外壳蛋白(MCP) 基因克隆序列分析
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金银花莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶(LjHCT)基因克隆与序列分析 被引量:7
2
作者 何柳 徐晓兰 +4 位作者 王振中 毕宇安 萧伟 罗红梅 孙超 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2014年第2期263-268,共6页
莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶(HCT)是金银花中绿原酸合成途径的关键酶。本研究利用已经获得的金银花(Lonicera japonica Thunb.)大量表达序列标签(EST)数据,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得8条可能的HCT基因cDNA全长序列。通过序... 莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶(HCT)是金银花中绿原酸合成途径的关键酶。本研究利用已经获得的金银花(Lonicera japonica Thunb.)大量表达序列标签(EST)数据,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得8条可能的HCT基因cDNA全长序列。通过序列相似性比较、蛋白质理化性质和保守结构域分析确定其中1个基因为金银花HCT(LjHCT)基因。该基因全长1 275个碱基,蛋白质分子量约为47kDa,为进一步研究HCT在绿原酸合成过程中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶 金银花 绿原酸 基因克隆序列
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血红密孔菌(Pycnoporussanguineus)漆酶基因的克隆与序列分析 被引量:7
3
作者 赵敏 宋小双 +2 位作者 杨谦 刘桂丰 王玉成 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期815-820,共6页
为克隆血红密孔菌 (Pycnoporussanguineus)漆酶基因 ,根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计了 1对简并引物 .以血红密孔菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增出长 12 2 7bp的漆酶基因片段 .以此序列为基础 ,通过 5′及 3′RACE技术克隆出漆酶全长cDN... 为克隆血红密孔菌 (Pycnoporussanguineus)漆酶基因 ,根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计了 1对简并引物 .以血红密孔菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增出长 12 2 7bp的漆酶基因片段 .以此序列为基础 ,通过 5′及 3′RACE技术克隆出漆酶全长cDNA序列 ,序列长为 190 2bp ,其 5′端和 3′端非编码区长分别为 5 1bp和 2 97bp ,开放阅读框长 15 5 4bp ,编码 5 18个氨基酸的蛋白 .该蛋白具有 4个铜离子结合区域 ,预测其相对分子量为 5 6 313 2 ,等电点为 5 5 9,其氨基酸序列与Pycnoporuscinnabarinus漆酶 (lcc3 2 )的同源性最高 ,为 96 % .以该cDNA编码区的两端序列为引物 ,PCR扩增得到漆酶的长度为 2 15 4bp的全长DNA序列 ,序列中包括 10个内含子序列 ,长为 5 2~ 展开更多
关键词 血红密孔菌 漆酶 基因克隆 序列分析
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一个属于Aux/IAA基因家族的毛白杨PtIAA1的克隆和序列分析(英文) 被引量:3
4
作者 董秀春 樊金会 +1 位作者 于学宁 束怀瑞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第4期565-571,共7页
基于NCBI数据库中的序列信息,我们利用PCR技术克隆到一个毛白杨(Populustomentosa)PtI-AA1基因。序列分析表明PtIAA1cDNA长度为946个碱基,编码一个由258个氨基酸组成的蛋白,该蛋白与PtIAA1、NtIAA28和AtIAA16蛋白的同源性分别高达97%、... 基于NCBI数据库中的序列信息,我们利用PCR技术克隆到一个毛白杨(Populustomentosa)PtI-AA1基因。序列分析表明PtIAA1cDNA长度为946个碱基,编码一个由258个氨基酸组成的蛋白,该蛋白与PtIAA1、NtIAA28和AtIAA16蛋白的同源性分别高达97%、75%和74%。系统进化分析表明PtIAA1基因可能属于Aux/IAA基因家族中组的成员。与大多数的Aux/IAA基因家族中的基因一样,PtIAA1蛋白是一个短命核蛋白,拥有4个高度保守的区域。 展开更多
关键词 毛白杨(Populus tomentosa) PtIAA1 Aux/IAA基因家族 克隆序列分析
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棉蚜para钠通道cDNA和基因组DNA片段的克隆和序列分析 被引量:3
5
作者 李飞 韩召军 《武夷科学》 2002年第1期86-92,共7页
采用降落 PCR技术 ,根据昆虫 para型钠通道 区 S4至 S6及 与 连接区的保守区域设计简并引物 ,成功地克隆了棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段 (Gene Bank登录号分别为 :AF4 114 5 5、AF4 475 74 ) ,其中 c DNA片段为 6 5 ... 采用降落 PCR技术 ,根据昆虫 para型钠通道 区 S4至 S6及 与 连接区的保守区域设计简并引物 ,成功地克隆了棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段 (Gene Bank登录号分别为 :AF4 114 5 5、AF4 475 74 ) ,其中 c DNA片段为 6 5 9bp,编码 2 2 0个氨基酸。利用 c DNA片段设计特异性引物克隆获的基因组DNA片段为 132 8bp,共有 2个内含子。Blast序列分析表明 ,PCR扩增获得的棉蚜 para型钠离子通道 c DNA片段所编码的氨基酸与其他昆虫的 para型钠通道氨基酸具有很高的同源相似性 ,与马铃薯甲虫、德国小蠊、果蝇和家蝇的同源性分别为 6 5 %、6 3%、6 3%、5 9%。棉蚜 para型钠离子通道 c DNA和基因组 DNA片段的克隆对于农药分子设计与害虫抗性机制 ,特别是靶标抗性分子监测具有重要意义。 展开更多
关键词 棉蚜 para型钠通道基因 基因克隆 序列分析
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黑曲霉NRRL3135 bgl基因的克隆及序列分析
6
作者 陈俊 杨之帆 +1 位作者 刘晓黎 方登科 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期208-215,共8页
利用RT-PCR技术从黑曲霉菌株NRRL3135中扩增了β-葡萄糖苷酶(BGL)基因的全长cDNA序列,被命名为bgl3135(GenBank登录号:FN430671)。对该基因编码的BGL进行了同源性分析并预测了其三维构象。试验结果表明,bgl3135的全长cDNA为2598bp,含有... 利用RT-PCR技术从黑曲霉菌株NRRL3135中扩增了β-葡萄糖苷酶(BGL)基因的全长cDNA序列,被命名为bgl3135(GenBank登录号:FN430671)。对该基因编码的BGL进行了同源性分析并预测了其三维构象。试验结果表明,bgl3135的全长cDNA为2598bp,含有一个2583bp的开放阅读框(ORF),编码一个长度为860个氨基酸残基的蛋白质。同源性分析表明,该基因编码的蛋白与来自黑曲霉As3.350和CBS513.88的BGL(GenBank登录号分别为DQ655704和XM_001398779)的相似性最高,其氨基酸序列同源性分别达99%。参照已发表的β-葡萄糖苷酶(BGL)的氨基酸保守序列,判断本研究所克隆的bgl基因属于糖苷水解酶基因家族3的成员。三维结构预测表明,该BGL的立体构象中存在20个α-螺旋和15个β-折叠,对构成和维持酶的底物识别和催化活性位点可能起着重要作用。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶基因 RT—PCR 基因克隆序列分析
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球毛壳菌(Chaetomium globosum)过氧化物膜蛋白过敏原基因克隆、序列分析及原核表达
7
作者 刘志华 杨谦 杨力明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期40-45,共6页
以球毛壳菌cDNA文库中获得过氧化物膜蛋白(pero)基因片段(GenBank Accn: BP099709)为基础,用RACE技术获得该基因的全长cDNA序列。序列长747bp,由412bp的3’ RACE产物和508bp的5’RACE产物拼接而成。开放阅读框501bp,编码166个氨基酸,蛋... 以球毛壳菌cDNA文库中获得过氧化物膜蛋白(pero)基因片段(GenBank Accn: BP099709)为基础,用RACE技术获得该基因的全长cDNA序列。序列长747bp,由412bp的3’ RACE产物和508bp的5’RACE产物拼接而成。开放阅读框501bp,编码166个氨基酸,蛋白分子量为17.5kDa,理论等电点为5.75。利用cDNA两侧非编码区序列作引物克隆出该基因的DNA 序列,序列分析表明该基因由2个内含子和3个外显子组成。ClustalX多序列比对表明:该基因与粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)的过氧化物膜蛋白过敏原同源性最高(83%)。将pero基因编码区克隆到原核表达载体pET28a中,构建成表达质粒pET28a-pero并转化大肠杆菌BL21,IPTG 诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现在21kDa处有一特异性融合蛋白带,大小与预期相符, 说明该基因已经在大肠杆菌中表达。克隆的cDNA序列、DNA序列及推测的氨基酸序列在 GenBank登录(登录号分别为AY555771,AY584753,AAS66898)。 展开更多
关键词 球毛壳菌过氧化物膜蛋白 过敏原基因克隆序列分析原核表达
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苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的克隆与原核表达
8
作者 周夏 郭博智 +2 位作者 高艳玲 赵奎军 樊东 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期144-150,共7页
促前胸腺激素(Prothoracicotropic hormone,PTTH)是一类重要的昆虫激素,它对昆虫生长、蜕皮、变态、滞育具有重要调控作用。以苜蓿夜蛾5龄幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的cDNA序列,该序... 促前胸腺激素(Prothoracicotropic hormone,PTTH)是一类重要的昆虫激素,它对昆虫生长、蜕皮、变态、滞育具有重要调控作用。以苜蓿夜蛾5龄幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术,扩增得到苜蓿夜蛾促前胸腺激素基因的cDNA序列,该序列含有823个碱基,包括1个681个碱基的开放阅读框,编码1个含226个氨基酸的蛋白,分子量约为26.3 kD,等电点为8.51。序列分析表明,苜蓿夜蛾PTTH的氨基酸序列与其他昆虫,尤其是鳞翅目夜蛾科昆虫的PTTH高度同源。获得的基因已登录GenBank,登录号为JF731347。利用原核表达载体pET21b在大肠杆菌中成功表达了苜蓿夜蛾PTTH基因,并用Ni-NTA亲和层析柱将带His-tag的目的蛋白进行纯化。 展开更多
关键词 苜蓿夜蛾 促前胸腺激素 基因序列克隆 原核表达
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植物雄性育性相关基因的克隆方法 被引量:3
9
作者 李强 张辉 +4 位作者 斯钦巴特尔 高凤云 贾霄云 郭树春 陈强 《内蒙古农业科技》 2008年第3期21-24,共4页
文章基于植物分子生物学的研究成果,介绍了几种克隆植物雄性育性相关基因的方法,其中包括mRNA差异显示技术、染色体步行法(Chromosome walking)、基因标签法(Gene tagging)、基因序列同源克隆法等。
关键词 植物雄性不育 MRNA差异显示技术 染色体步行 基因标签 基因序列同源克隆
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暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps1的克隆及表达分析 被引量:7
10
作者 乌木提·巴合提别克 唐玉倩 +2 位作者 王淑婷 李亚伟 邹莉 《森林工程》 北大核心 2021年第4期33-39,46,共8页
倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨... 倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为48.17 ku。SDS-PAGE分析结果表明,在相对分子质量69.17 ku(包含21 ku标签蛋白)附近出现与预期大小一致的蛋白条带。系统发育进化树分析表明,暴马桑黄SbTps1蛋白和嗜蓝孢孔菌Tps蛋白同源性最高;荧光定量分析结果表明,SbTps1基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在菌丝发酵培养第14天时SbTps1基因转录水平达到最高状态,该结果与鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii)倍半萜合酶基因的转录水平变化趋势相似,因此可以推测SbTps1与倍半萜合成有关,初步鉴定该基因为倍半萜合酶基因,为后续暴马桑黄倍半萜合酶基因功能的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 暴马桑黄 倍半萜 倍半萜合酶基因 基因克隆序列分析 原核表达 荧光定量
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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因特性分析 被引量:7
11
作者 蔡启良 刘子铎 喻子牛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期598-603,共6页
营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率... 营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率为 5 6 5 % (13 2 3) .同时对随机选择的 3个不同亚种菌株进行基因克隆和序列分析 ,表明其基因具有相当高的同源性 .运用生物信息技术 ,对营养期杀虫蛋白多肽进行了功能结构域比对分析 ,发现这 789多肽蛋白的N端 31至 15 0残基之间存在一种趋化信号传导因子相似序列 ,C端 5 36至 6 6 6残基之间则存在着纤维素结合结构域相似肽 .上述结果提示 ,营养期杀虫蛋白基因在苏云金芽胞杆菌天然菌株中高度保守并较为广泛分布 ,其编码蛋白的特殊结构提示了营养期杀虫蛋白潜在的功能特性 ,为进一步研究营养期杀虫蛋白奠定了基础 . 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 营养期杀虫蛋白 基因克隆序列分析
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长穗偃麦草HKT1;4基因片段的克隆及序列分析 被引量:13
12
作者 张琳 郭强 +3 位作者 毛培春 李杉杉 孟林 许庆方 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期869-874,共6页
根据已报道的其他植物高亲和钾离子转运蛋白(HKT1;4)基因的保守序列设计一对简并性引物,以长穗偃麦草幼根总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出长穗偃麦草HKT1;4,基因命名为EeHKT1;4。结果表明:该基因片段长度为614 bp,编码204个氨基酸,所... 根据已报道的其他植物高亲和钾离子转运蛋白(HKT1;4)基因的保守序列设计一对简并性引物,以长穗偃麦草幼根总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出长穗偃麦草HKT1;4,基因命名为EeHKT1;4。结果表明:该基因片段长度为614 bp,编码204个氨基酸,所得序列与其他植物氨基酸序列同源性均在80%以上,特别是和一粒小麦TmHKT1;4氨基酸同源性高达92%。这为长穗偃麦草HKT1;4全长基因的克隆及其耐盐分子机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 长穗偃麦草 HKT1 4基因 同源克隆 序列分析
原文传递
人参多向耐药性转运蛋白基因保守区序列的克隆及分析 被引量:2
13
作者 张儒 黄景嘉 +3 位作者 谢小雷 陈湘晖 张变玲 罗志勇 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1590-1594,共5页
目的对人参多向耐药性(PDR)转运蛋白基因进行克隆及序列分析。方法利用其他植物PDR基因的保守区域设计简并引物,以人参根总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增人参PDR基因片段并连接至pGEM-T Easy载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果得到... 目的对人参多向耐药性(PDR)转运蛋白基因进行克隆及序列分析。方法利用其他植物PDR基因的保守区域设计简并引物,以人参根总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增人参PDR基因片段并连接至pGEM-T Easy载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果得到一段长693 bp的基因序列,序列分析表明,该片段编码231个氨基酸,与植物PDR基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别在76%和80%以上。分析表明该序列属于PDR转运蛋白的核苷酸结合域,具有PDR转运蛋白的C端Walker A、ABC标签模体和C端walker B 3个保守功能域。结论首次从人参中克隆出PDR转运蛋白基因,为研究人参次生代谢产物的转运和积累机制奠定了基础。 展开更多
关键词 人参 多向耐药性PDR转运蛋白 次生代谢产物 基因克隆:序列分析
原文传递
Cloning and Sequence Analysis of Actin Gene from Rehmannia glutinosa 被引量:6
14
作者 孙鹏 郭玉海 +2 位作者 祁建军 周莉丽 李先恩 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第2期42-44,66,共4页
[ Objective ] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [ Method ] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia gluti... [ Objective ] The aim of this study is to clone and analyze the actin gene from Rehmannia glutinosa. [ Method ] Degenerate primers were designed according to the conserved regions of actin sequences of Rehmannia glutinosa and its similar species, RT-PCR was next conducted to amplify the actin gene from Rehmannia glutinosa. [ Result] The amplified fragment is 724 bp and correspondingly 240 amino acids. The BLAST results indicate that the homology between the amplified fragment and other higher plants for aetin gene sequences and amino acid are more than 80% and 90%, respectively, suggesting that the amplified fragment is the actin gene of Rehmannia glutinosa. [ Conclusion] Phylogenetic analysis shows that the actin gene of Rehmannia glutinosa has an intimate genetic relationship with actin7 gene of Nicotiana tabacum. 展开更多
关键词 ACTIN Rehmannia glutinosa Sequence analysis Phylogenetic analysis
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Cloning, Characterization and Chromosome Localization of Two Powdery Mildew Resistance-Related Gene Sequences from Wheat 被引量:4
15
作者 于玲 牛吉山 +3 位作者 马正强 陈佩度 齐莉莉 刘大钧 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第12期1438-1444,共7页
Reverse_transcription Polymerase Chain Reaction (RT_PCR) was performed using cDNAs as templates from wheat_ Haynaldia villosa 6VS/6AL translocation line and 'Yangmai 5' induced with fungus Erysiphe gramin... Reverse_transcription Polymerase Chain Reaction (RT_PCR) was performed using cDNAs as templates from wheat_ Haynaldia villosa 6VS/6AL translocation line and 'Yangmai 5' induced with fungus Erysiphe graminis , and degenerate primers designed based on the conserved amino acid sequences of known plant disease_resistance genes. The cDNA sequences encoding cyclophilin_like and H +_ATPase_like genes were first isolated and characterized in wheat. The putative amino acid sequences of the two clones showed that they were highly homologous to those of cyclophilin proteins and H +_ATPases isolated from other plants. Thus they were designated as Ta_Cyp and Ta_MAH . The obvious expression differences could be observed between wheat_ H. villosa 6VS/6AL translocation line and susceptible wheat cultivar 'Yangmai 5', implying that the two genes may be related with the resistance of wheat_ H. villosa 6VS/6AL translocation line to disease. Southern blot indicated that the wheat genome contained 2-3 copies of Ta_Cyp gene and one copy of the Ta_MAH gene. Chinese Spring nulli_tetrasomic line analysis located the Ta_Cyp homologous genes on wheat chromosome 6A, 6B and 6D. Southern blot using Ta_Cyp clone as a probe showed that the polymorphic bands existed among the H. villosa , amphiploid of Triticum durum _ H. villosa , wheat_ H. villosa 6VS/6AL translocation line and 'Yangmai 5', suggesting that Ta_Cyp homologies exist in wheat genome as well as on the short arm of chromosome 6V in H. villosa . 展开更多
关键词 CLONING wheat_ Haynaldia villosa 6VS/6AL translocation line cyclophilin gene H +_ATPase gene
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Cloning and Sequencing the Full-length cDNA of Annexin from Strawberry Fruit 被引量:6
16
作者 王关林 杨怀义 +2 位作者 夏然 方宏筠 景士西 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第8期874-876,共3页
采用RACE技术从草莓 (FragariaananassaDuch .)成熟果实中分离克隆了膜联蛋白 (annexin)基因的cDNA 5′_端未知序列 ,并通过测序确定了翻译的起始密码位点、终止密码位点及完整的读码框 ,从而首次获得了草莓果实膜联蛋白基因的cDNA全序... 采用RACE技术从草莓 (FragariaananassaDuch .)成熟果实中分离克隆了膜联蛋白 (annexin)基因的cDNA 5′_端未知序列 ,并通过测序确定了翻译的起始密码位点、终止密码位点及完整的读码框 ,从而首次获得了草莓果实膜联蛋白基因的cDNA全序列 ,命名为annfaf(annexinofFragariaananassafruit)基因。 展开更多
关键词 STRAWBERRY annexin protein of fruit cDNA clone annfaf ( annexin of Fragaria ananassa fruit) gene
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华支睾吸虫cDNA文库的构建 被引量:6
17
作者 吴军 裴福全 +6 位作者 钟肖芬 卫剑文 彭立胜 阮彩文 崔惠儿 方悦怡 潘波 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期91-92,共2页
目的 构建华支睾吸虫cDNA文库。方法 采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0... 目的 构建华支睾吸虫cDNA文库。方法 采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0个克隆进行扩增 ,选择 9个克隆进行DNA序列测定。序列结果与GenBank中相关基因进行比对。结果 获得含有 9 7× 10 5个重组子库容量的华支睾吸虫cDNA文库。其中PC6号克隆基因序列与华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列具有 93%的同源性。结论 已构建成华支睾吸虫cDNA文库。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 CDNA文库 构建 克隆基因序列
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Cloning and Analysis of NBS-LRR Type Resistance Gene Analogues in Sweet Potato (Ipomoea batatas) 被引量:7
18
作者 林巧玲 曾会才 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第2期76-80,共5页
The degenerate primers were designed based on the conserved NBS-LRR motifs among the known disease-resistance genes. A fragment of about 500 bp was amplified from genomic DNA of sweet potato using the specifically des... The degenerate primers were designed based on the conserved NBS-LRR motifs among the known disease-resistance genes. A fragment of about 500 bp was amplified from genomic DNA of sweet potato using the specifically designed degenerate primers. After cloning and sequencing, 20 NBS-LRR type of disease-resistance gene analogue (RGAs) in sweet potato were observed. The deduced amino acid sequence of DNA fragment contains the conserved motifs of NBS-LRR type RGAs, such as P-loop, Kinase-2α, Kinase-3α and GLPL domain. The 20 RGAs could be sorted into two subclasses, namely TIR- NBS-LRR type and non-TIR-NBS-LRR type. Compared with the known resistance genes including N, L6 and M, the percentages of homologous amino acid sequence in 10 TIR-NBS-LRR range between 21% -44%. While other 10 non-TIR-NBS-LRR assume 15% -46% homology with the known resistance genes (Prf, RPM1, RPS2, etc. ). Consequently the RGAs may further be used as molecular marker for screening the candidate disease-resistance genes in sweet potato. 展开更多
关键词 Sweet potato NBS-LRR analogs R genes
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向日葵V-ATPasea3亚基基因的克隆及表达分析 被引量:2
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作者 张艳芳 孙瑞芬 +1 位作者 郭树春 侯建华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期19-27,共9页
采用RACE技术,从向日葵P50中克隆V-ATPase a3亚基基因c DNA全长,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR分析不同浓度、不同时间的Na Cl、ABA和PEG模拟干旱胁迫条件下V-ATPase a3亚基基因的表达特征,以及相同胁迫条件下该基因在向日... 采用RACE技术,从向日葵P50中克隆V-ATPase a3亚基基因c DNA全长,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR分析不同浓度、不同时间的Na Cl、ABA和PEG模拟干旱胁迫条件下V-ATPase a3亚基基因的表达特征,以及相同胁迫条件下该基因在向日葵不同器官的表达特征。序列分析表明,该基因c DNA全长2 873bp,含5'-UTR 109bp、3'-UTR 295bp及编码区2 469bp,编码822个氨基酸,其编码蛋白质的理论分子质量为204.55k Da,等电点为6.29,Gen Bank登录号为KU315054。该基因编码的蛋白质为疏水性的跨膜蛋白,亚细胞定位预测其在质膜上。向日葵V-ATPase a3亚基与已报道的10种植物的V-ATPase a3亚基的同源蛋白有高度相似的保守区域,在进化上与朝鲜蓟的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明,向日葵受到Na Cl、ABA和PEG模拟干旱三种非生物胁迫后,V-ATPase a3亚基基因均上调表达,但表达模式不同,不同器官存在特异性表达差异。研究认为,V-ATPase a3亚基基因响应了向日葵非生物胁迫的应答,为加强对V-ATPase基因的利用奠定基础。 展开更多
关键词 向日葵 V-ATPASE a3亚基基因克隆序列分析基因表达
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Cloning and Expression of Conserved Sequences of cry Gene in E.coli Strain Rosetta(DE3) 被引量:1
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作者 罗翠平 李金华 +1 位作者 谢烨明 曾万勇 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第5期958-961,996,共5页
[Objective] The aim was to clone the conserved sequences of cry gene and express them in Rosetta (DE3). [Method] Specific primers were designed according to NCBI database information and the conserved sequences of c... [Objective] The aim was to clone the conserved sequences of cry gene and express them in Rosetta (DE3). [Method] Specific primers were designed according to NCBI database information and the conserved sequences of cry gene were amplified by PCR from Bt transgenic cotton. Then recombinant plasmids were constructed and expressed in E. coil strain Rosetta (DE3). Finally, the effects of different concentrations and inducing time of IPTG on the expression level of protein were investigated. [Result] Two conserved sequences (304 and 853 bp respectively) of cry gene were amplified. The result of SDS-PAGE confirmed that the recombinant plasmids pGEX-4t-I-304 and pGEX-4t-1-853 could express fusion proteins by IPTG induction and the molecular weight of protein products was 39 and 62.4 kDa respectively, which was in accordance with predicted result. The optimal protein ex- pression conditions were confirmed as induction with 0.15 mmol/L IPTG for 7 h. [Conclusion] This study prepared the ground for the further detection of Bt transgenic crops. 展开更多
关键词 Bt gene Conserved sequence CLONING Prokaryotic expression
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