qRT-PCR法分析甲状腺乳头状癌FEZ1/LZTS1基因异常表达研究

目的:采用qRT-PCR法检测甲状腺乳头状癌(PTC)FEZ1/LZTS1基因的异常表达,分析异常表达与临床特点之间的关系。方法:用试剂盒提取42例甲状腺乳头状癌及癌旁正常组织标本RNA,采用实时荧光定量PCR扩增FEZ1/LZTS1基因并进行分析,判断基因异常表达。结果:42例PTC中,34例FEZ1/LZTS1基因与内参照基因相比,拷贝数量比值明显低于癌旁组织,显示为异常表达,且与民族、年龄、性别及肿瘤大小无相关性;临床Ⅰ、Ⅱ期的异常表达率高于Ⅲ、Ⅳ期,差异具有统计学意义。结论:FEZ1/LZTS1基因的异常表达可能与PTC的发生发展相关,qRT-PCR技术能够快速分析FEZ1/LZTS1基因的异常表达,对PTC的诊断可能具有辅助作用。

肺腺癌酪氨酸激酶信号传导通路中基因异常表达的复杂性

目的 探讨肺腺癌患者酪氨酸激酶信号传导通路的紊乱情况。方法 抽提 10例肺腺癌标本及其癌旁组织的总RNA ,标记荧光 ,与含 13 82 4个基因的基因芯片进行杂交 ,经洗片、扫描 ,计算机分析比较两种组织的差异表达基因。每次实验重复两次 ,结果取平均值 ,共进行 2 0次杂交 ,最后统计分析酪氨酸激酶信号传导通路中各种组分的表达情况。结果 在酪氨酸激酶信号传导通路中 ,5例以上标本差异表达的基因共 67个 ,其中上调基因 3 1个 ,下调基因 3 6个 ,涉及配体、受体、相关酶类、转录因子及调控基因等。结论 肺腺癌患者酪氨酸激酶信号传导通路的异常是多个环节的 ,多种组分在转录水平上发生了不同程度的改变 ;生长因子与酪氨酸激酶介导的信号传导有不同程度的激活 ,而抗增殖和免疫防御的信号传导受到不同程度的抑制 。

肺癌中多癌基因异常表达的临床研究

目的 :通过 76例肺癌切除标本进行免疫组化染色来探索癌相关基因 c- erb B- 2、ras p2 1和 p5 3与肺癌的组织分型和 TNM分期之间的关系。方法 :随机选取 76例肺癌手术切除标本 ,其中鳞癌 35例 ,腺癌 2 2例 ,小细胞癌10例 ,大细胞癌 4例 ,腺鳞癌 5例。TNM 期 8例 , 期 35例 , 期 33例。均按文献方法进行免疫组化染色后按阳性表达率进行统计分析。结果 :c- erb B- 2和 p5 3的总阳性表达率分别为 6 4.5 %及 5 2 .6 % ,且在小细胞癌中分别高达 10 0 %和 90 .0 % ,明显超过 ras p2 1(P<0 .0 1) ,但 ras p2 1在腺癌中的表达率 (72 .3% )高于 c- erb B- 2和 p5 3。同时 ,c- erb B- 2在 TNM 期中 87.9%的表达率也高于 、 期和 ras p2 1、p5 3在 期的表达率 (P<0 .0 5 )。结论 :c-erb B- 2过度表达与预后差 ,恶性度高 ,病程长或晚期肺癌有关联 ;ras p2 1可能参与腺癌的发生 ;p5 3则可能与恶性度高 ,预后差的小细胞癌的发生和转归有关。

卵巢癌ras及p16基因异常表达的临床研究

目的：探讨ｒａｓ癌基因及ｐ１６抑癌基因与卵巢癌生物学行为的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组化法及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，检测３６例卵巢癌，２０例卵巢良性肿瘤及１０例正常卵巢ｒａｓ、ｐ１６基因及表达状况。结果：卵巢癌及对照组ｒａｓ癌基因无突变及缺失。卵巢癌ｒａｓ ｐ２１阳性表达８０．６％，卵巢良性肿瘤仅有２５％弱阳性表达，正常卵巢阴性表达，Ｐ＜ ０．０１、Ｐ＜ ０．００１，差异非常显著；卵巢癌及对照组ｐ１６基因无突变，卵巢癌ｐ１６缺失９例占２５％，ｐ１６蛋白阳性表达降低，仅１３．９％，强阳性表达２７．８％，１１例晚期卵巢癌阴性表达占３０．６％；卵巢良性肿瘤ｐ１６蛋白弱阳性表达占４５％，阳性表达降低占４０％，对照组ｐ１６蛋白８０％阳性表达，卵巢癌、卵巢良性肿瘤与正常对照比较阳性表达，Ｐ＜ ０．００１、Ｐ＜ ０．０５，差异显著。结论：本组卵巢上皮癌ｒａｓ癌基因无突变，但ｒａｓ ｐ２１过表达、ｐ１６基因２５％缺失，无突变，ｐ１６蛋白表达降低，ｒａｓ癌基因及ｐ１６抑癌基因异常，与卵巢癌患者临床分期、病理分化密切相关。

粘液表皮样癌细胞中脆性组氨酸三聚体基因异常表达的研究

目的 :检测粘液表皮样癌细胞中FHIT基因的异常表达。方法 :应用逆转录巢式聚合酶链反应 (RT -PCR)及DNA测序技术检测粘液表皮样癌和粘液表皮样癌细胞中FHIT基因表达情况。结果 :粘液表皮样癌细胞系细胞中存在FHIT基因部分缺失 ,产生异常转录本 ,大小约 2 47bp .FHIT基因mRNA异常转录本为多个外显子缺失所致 ,E1-E8全部缺失。结论 :FHIT基因在粘液表皮样癌细胞中的异常表达可能在粘液表皮样癌的发生和发展中起作用。

胃癌p53和nm23基因异常表达的预后意义研究

目的研究胃癌ｐ５３和ｎｍ２３基因异常表达与胃癌生物学行为及病人预后的关系。方法采用链霉素—生物素（ＳＰ）免疫生化技术行ｐ５３和ｎｍ２３免疫组化染色，研究了２０９例胃癌病人的临床病理资料。结果ｐ５３和ｎｍ２３基因的异常表达率分别为４９．７６％和５７．４２％，ｐ５３及ｎｍ２３异常表达与病人性别、年龄、肿瘤部位、大小无关。随着ＴＮＭ分期的进展ｐ５３基因异常表达率升高（Ｐ＝０．００９），Ｂｏｒｍａｎｎ４胃癌ｎｍ２３异常表达率高（Ｐ＝０．０２６），ｐ５３在粘液腺癌低表达（Ｐ＝０．０１８６），ｐ５３及ｎｍ２３与胃癌的淋巴结转移有关（Ｐ＝０．０１８，Ｐ＝０．００２）。ｐ５３及ｎｍ２３与术后生存时间有关。结论ｐ５３及ｎｍ２３基因异常表达能反映胃癌的生物学行为，并与胃癌的预后有关。ｎｍ２３更能提示胃癌转移，但ｐ５３提示预后的能力比ｎｍ２３强。

P^(53)及nm23基因异常表达与肝细胞肝癌临床、病理的关系

用免疫组化方法检测了２７例肝细胞肝癌患者癌组织Ｐ５３及ｎｍ２３基因异常表达，结果Ｐ５３及ｎｍ２３基因异常表达率分别为６６．６７％和５９．２６％。Ｐ５３及ｎｍ２３基因异常表达与患者血清ＡＦＰ阳性有关（Ｐ＞０．０５），与存在门静脉癌栓有关（Ｐ＜０．０５）。提示Ｐ５３及ｎｍ２３基因异常表达与患者预后有关，对肝细胞肝癌患者检测Ｐ５３和ｎｍ２３基因可预测其预后。

鼻咽癌组织中FHIT基因异常表达的研究

目的 :检测正常鼻咽上皮和鼻咽癌组织中 FHIT基因的异常表达，探讨 FHIT基因与鼻咽癌发病的关系。方法 :采用巢式 RT PCR (nested RT PCR)技术对 28例鼻咽癌组织和 10例正常鼻咽上皮组织进行 FHIT基因检测，并随机选择 2例异常者进行 DNA测序分析。结果 :10例正常鼻咽上皮组织未发现 FHIT转录本异常， 12例 (42.9％ )鼻咽癌组织存在 FHIT异常转录本。 2例经测序分析发现其中 1例缺失外显子 8和外显子 10 5′端的 11bp；另 1例缺失外显子 4～ 7，在外显子 8和 9之间插入一 53 bp的小片段，且密码子 94存在同义点突变。结论 :提示 FHIT基因异常在鼻咽癌的发病中起重要作用，可能是鼻咽癌候选抑癌基因之一。

cyclin D1基因异常表达、多态性与乳腺癌关系

对细胞周期调控机制的研究表明,细胞周期蛋白(cyclin)是细胞周期中短暂出现的基因表达产物,具有严格的顺序性,与特定的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)结合构成复合体,使CDK活化,完成各个时相的转换,然后降解.

ERCC1基因异常表达与宫颈癌化疗耐药关系初步研究

目的探讨 ERCC1基因过度表达与宫颈癌铂类药物化疗耐药之间的关系。方法采集宫颈癌患者术后标本,分为化疗敏感及耐药组。采用 RT-PCR 及 Western Blot 分别从核酸及蛋白水平检测 ERCC1基因的表达。结果与化疗敏感患者相比,耐药患者 ERCC1基因 RNA 及蛋白表达水平明显升高。结论 ERCC1基因的异常表达,可能是宫颈癌铂类药物化疗耐药的原因之一。

热休克对维甲酸导致的基因异常表达影响的实验研究

本研究目的系观察热休克和维甲酸共同作用对胚胎生长发育的影响。用Ｗｉｓｔａｒ种大白鼠ｄ１０Ⅰ期胚胎，应用全胚胎体外培养技术和全胚胎原位杂交——基因表达三维检测技术。结果发现热休克可以降低由维甲酸所致的胚胎畸形发生率以及由维甲酸所致的Ｈｏｍｅｏｂｏｘ２．２基因的异常表达。

舌癌细胞中FHIT基因异常表达的研究

为了检测 FHIT基因舌癌 Tca8113细胞中的表达 ,应用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及 DNA测序技术检测舌癌 Tca8113细胞中 FHIT基因的表达情况。结果发现在舌癌细胞系 Tca8113细胞中存在 FHIT基因部分缺失 ,产生异常转录本 ,大小约 2 4 7bp。FHIT基因 m RNA异常转录本为多个外显子缺失所致 ,E1- E8全部缺失。因此 ,FHIT基因在舌癌 Tca8113细胞中的异常表达可能在舌癌的发生和发展中起着重要的作用。

利用原位杂交分析几种cyclin和CDK基因在人乳腺癌中的异常表达

目的探讨细胞周期调控基因ｃｙｃｌｉｎ和ＣＤＫ的异常与乳腺癌发生的相关性。方法采集２０例乳腺癌外科手术样品，用原位杂交技术分析了ｃｙｃｌｉｎＤ１、Ｄ３、Ｅ、ＣＤＫ２和ＣＤＫ４ｍＲＮＡ的表达。结果在大多数乳腺癌样品中，这些基因有一种或几种出现高表达。ｃｙｃｌｉｎＤ１高表达的样品１７例（８５％），ｃｙｃｌｉｎＤ３有１２例（６０％），ｃｙ－ｃｌｉｎＥ有７例（３５％），ＣＤＫ２有６例（３０％），ＣＫＤ４有１６例（８０％）。ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４显色最强，其次是ｃｙｃｌｉｎＤ３，ｃｙ－ｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２显色较弱，正常乳腺组织为阴性显色。结论推测ｃｙｃｌｉｎ和ＣＤＫ基因，特别是ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４的异常表达与乳腺癌的发生有密切关系。

HER-2原癌基因在乳腺癌中的异常表达

采用分子杂交技术检测２例人原发性乳腺癌ＨＥＲ－２原癌基因ＤＮＡ及ＲＮＡ水平的改变。结果该基因在肿瘤组织未见扩增与重排，但其中１例在ＲＮＡ水平却异常表达，推测这种现象可能与该基因转录调控的失调有关。提示ＨＥＲ－２原癌基因的激活亦可能依赖其转录途径完成。

实验性糖尿病大鼠胰岛素样生长因子-1基因表达异常与神经电生理及外周神经病变(英文)

目的:探讨糖尿病时肝组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达的异常及其与糖尿病外周神经病变的关系。方法:分离解剖出右侧坐骨神经,测定诱发电位出现的波幅(amplitudeofevokedpotentials,AEP)、感觉及运动神经传导速度(sensory/motornerveconductionvelocity,SNCV/MNCV),用四氧嘧啶诱发糖尿病SD大鼠模型。48只糖尿病大鼠按经(胰岛素)控制后血糖水平分成3组:ID-1,2,3组,16只正常大鼠用作对照组。反转录一多聚酶链扩增反应半定量分析坐骨神经IGF-1mRNA含量;酶联免疫吸附法分析组织IGF-1肽含量;诱发肌电图测定坐骨神经电生理指标;观察坐骨神经形态学改变。结果:病程早期(2周,2个月),正常对照组、ID-2组大鼠肝组织IGF-1mRNA含量(1.15±0.090,0.79±0.048,P<0.001;1.17±0.069,0.53±0.023,P<0.001)、肽含量均下降犤(196.66±14.9),(128.2±11.25)μg/g,P<0.001;(196.66±14.9),(74.43±5.33)μg/g,P<0.001犦出现在相应糖尿病组大鼠坐骨神经电生理指标异常之前,程度均随糖尿病控制状态而异,且随病程进一步逐渐下降犤IGF-1mRNA(0.71±0.024)～(0.47±0.021);IGF-1肽(114.35±8.09)～(64.58±3.89)μg/g,P<0.001犦。血清IGF-1呈一致性下降(r=0.99,P<0.001)。其变化与坐骨神经功能改变(感觉神经:r=0.54,P<0.05,

白血病中FHIT基因的异常表达和缺失(英文)

FHIT基因位于染色体 3p14 .2 ,实验室的研究证实FHIT基因具有抑癌基因活性。FHIT基因异常表达或表达缺失出现在多种实体肿瘤和造血系统恶性疾病。为了探讨白血病细胞中FHIT基因的异常表达及意义 ,采用巢式RT PCR法对急性髓性白血病 (AML)、急性淋巴细胞白血病 (ALL)、慢性粒细胞白血病 (CML)以及骨髓增生异常综合症 (MDS)、慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、骨髓瘤 (MM )等不同类型白血病患者FHIT基因转录本进行检测 ,并对FHIT基因转录本进行序列测定。 98份血液系统恶性疾病患者的骨髓或外周血标本中AML 38例 ,ALL16例 ,CML 34例 ,其它恶性血液病 10例。全部患者经骨髓细胞形态检查 ,诊断符合FAB诊断标准。肝素抗凝骨髓或外周血 2 - 3ml,分离单个核细胞 ,取 5× 10 7个细胞 ,用RTIZOL 试剂一步法提取细胞总RNA ,行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。回收目的片段 ,克隆到PGEM T载体 ,进行序列测定。结果表明 :在 5 5 / 98(5 6 % )的被检测病例有FHIT基因的异常表达 ,在AML、ALL和CML异常表达的发生率分别为 2 2 / 38(5 8% ) ,9/ 16(5 6 % )和 19/ 34(5 6 % )。正常骨髓或外周血标本未见有FHIT基因的异常表达。 4 3/ 98(44 % )的患者表达正常转录本 (Ⅰ型 ) ,4 0 / 98(41% )

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞中PACAP基因的异常表达(英文)

Objective: To explore the expression pattern of PACAP gene in patients with myelodysplastic syndrome (MDS). Methods: The expression pattern of PACAP gene in CD34+ cells from MDS patients was determined by microarray, con- firmed in expanding samples by quantitative real-time PCR in bone marrow mononuclear cells. Results: The transcription of PACAP gene was found significantly down-regulated in patients with MDS in comparison with that in control samples, with a means of 220.1 in MDS-RA and 116.8 in MDS-RAEB (P < 0.05 ). Conclusion: PACAP gene is expressed significantly lower in patients with MDS.