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急性白血病患者WT1基因异构体的研究 被引量:12
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作者 姚利 王玲 +3 位作者 王玮 傅建新 岑建农 陈子兴 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期601-602,共2页
关键词 急性白血病 WT1基因异构体 研究
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正常人骨髓不同细胞群中WT1基因表达及其异构体比例研究 被引量:5
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作者 徐菁 王宏伟 +5 位作者 李晓红 朱镭 张丽 张帆 覃艳红 杨涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期603-606,共4页
本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT... 本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT1(+17AA)及WT1(+KTS)的表达。结果表明:与K562细胞相比,CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中均存在WT1基因的低表达,且依次逐渐降低;在CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中未检测到WT1基因表达。在分化程度较低的CD34+CD38-和CD34+CD38+细胞群中以+17AA,+KTS及WT1(+/+)异构体为主,而较成熟的CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中以-17AA、-KTS及WT1(-/-)异构体为主。结论:在正常人骨髓细胞中WT1基因的表达随着细胞分化程度提高而降低,造血细胞可能通过其4种异构体比例的调整而发挥抑制或促进分化的作用。 展开更多
关键词 骨髓 WT1基因 WT1基因异构体 基因表达
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RASSF1A基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖凋亡、体内成瘤能力的影响观察
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作者 李一 黄婷 +1 位作者 杨麟瀚 吴池华 《山东医药》 CAS 2019年第36期17-21,共5页
目的观察Ras相关区域家族1异构体A(RASSF1A)基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖、凋亡、体内成瘤能力的影响,并探讨其作用的可能机制。方法取MCF-7细胞,分别感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A和空白载体慢病毒vector,记为o... 目的观察Ras相关区域家族1异构体A(RASSF1A)基因在人乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及对细胞增殖、凋亡、体内成瘤能力的影响,并探讨其作用的可能机制。方法取MCF-7细胞,分别感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A和空白载体慢病毒vector,记为oe-RASSF1A组和vector组。两组细胞继续培养72 h,采用qRT-PCR法检测两组细胞中的RASSF1A mRNA。两组细胞在培养24、48、72、96 h时,采用MTS法观察两组细胞增殖能力(以OD值表示细胞增殖能力)。两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算各细胞周期比例。两组细胞继续培养72 h,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率。两组细胞继续培养72 h,取1×10~7个细胞重悬于100μL PBS中,分别注射入10只4周龄雌性裸鼠右侧腋下,常规饲养4周后处死,解剖瘤体并称重,以瘤体重表示体内成瘤能力。两组细胞继续培养72 h,采用Western Blotting法检测两组细胞中的RASSF1A、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(pPI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(pAKT)蛋白。结果oe-RASSF1A组细胞中RASSF1A mRNA相对表达量为13.25±3.20,vector组为1.00±0.03,两组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞在培养24、48、72、96 h时的OD值分别为0.36±0.02、0.53±0.06、0.74±0.13、0.91±0.07,vector组分别为0.35±0.03、0.62±0.14、0.95±0.08、1.34±0.21,在培养72、96 h时两组的OD值相比,P均<0.05。oe-RASSF1A组细胞处于G0/G1期、S期、G2/M期的比例分别为60.02%±3.21%、18.30%±2.31%、22.11%±1.03%,vector组分别为63.67%±4.16%、21.04%±2.65%、15.32%±2.52%,oe-RASSF1A组细胞处于G2/M期的比例与vector组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞凋亡率为24.38%±5.80%,vector组为4.25%±0.92%,两组相比,P<0.05。注射oe-RASSF1A组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(63.29±14.03)mg,注射vector组细胞的裸鼠成瘤的瘤体重为(104.58±17.52)mg,两组相比,P<0.05。oe-RASSF1A组细胞RASSF1A、PI3K、pPI3K、AKT、pAKT蛋白相对表达量分别为8.67±1.32、0.86±0.21、0.26±0.15、0.91±0.11、0.30±0.07,vector组分别为1.05±0.04、1.00±0.00、1.01±0.01、1.04±0.04、1.00±0.00,两组细胞RASSF1A、pPI3K、pAKT蛋白相对表达量相比,P均<0.05。结论感染RASSF1A过表达慢病毒oe-RASSF1A的MCF-7细胞RASSF1A mRNA升高;过表达RASSF1A可抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞周期阻滞在G2/M期、促进细胞凋亡、抑制细胞体内成瘤能力,其机制可能与RASSF1A抑制PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 Ras相关区域家族1异构体A基因 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 PI3K/AKT信号通路 乳腺肿瘤 乳腺癌
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脓疱型银屑病的易感基因研究进展
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作者 崔梓榆 韩建文 《医学综述》 2019年第5期833-838,844,共7页
脓疱型银屑病(PP)是较少见的具有生命威胁的银屑病类型,PP与遗传因素关系密切。编码白细胞介素36受体拮抗剂(IL36RN)基因、衔接蛋白复合体1-σ3亚单位异构体(AP1S3)基因和细胞凋亡募集结构域家族成员14(CARD14)基因等与PP的发病相关,其... 脓疱型银屑病(PP)是较少见的具有生命威胁的银屑病类型,PP与遗传因素关系密切。编码白细胞介素36受体拮抗剂(IL36RN)基因、衔接蛋白复合体1-σ3亚单位异构体(AP1S3)基因和细胞凋亡募集结构域家族成员14(CARD14)基因等与PP的发病相关,其中IL36RN基因突变主要与单独型泛发型脓疱型银屑病(GPP)有关;AP1S3基因缺陷将破坏Toll样受体3向核内体易位并导致下游信号转导异常; CARD14基因突变主要与寻常型银屑病(PV)伴发GPP关系密切。基因突变位点和突变发生率随地域、种族以及是否伴发PV而不同。 展开更多
关键词 脓疱型银屑病 泛发型脓疱型银屑病 白细胞介素36受体拮抗剂基因 细胞凋亡募集结构域家族成员14基因 衔接蛋白复合体1-σ3亚单位异构体基因
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急性早幼粒细胞白血病预后的临床与实验研究 被引量:4
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作者 柳金 齐振华 +2 位作者 曹萍 陈方平 杨光彩 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期7-8,共2页
急性早幼粒白血病 (APL)患者染色体易位t(15 ;17) ,导致产生该病特异的融合基因PML -RARa ,由于PML外显子的使用差异而产生了融合基因异构体。该研究用生物素标记的cDNA探针原位杂交 ,分别检测PML -RARa异构体L型与S型患者骨髓细胞bcl- ... 急性早幼粒白血病 (APL)患者染色体易位t(15 ;17) ,导致产生该病特异的融合基因PML -RARa ,由于PML外显子的使用差异而产生了融合基因异构体。该研究用生物素标记的cDNA探针原位杂交 ,分别检测PML -RARa异构体L型与S型患者骨髓细胞bcl- 2基因表达水平 ,同时比较临床特征及治疗相关预后 ,结果提示 ,PML-RARa二种转录本之间 ,在bcl- 2基因表达、临床特征、诱导缓解时间、复发方面均无显著差异。 展开更多
关键词 原位杂交 急性 白血病 融合基因异构体 预后
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两种色型黄粉虫抗冻蛋白cDNA克隆、序列分析与表达分析 被引量:2
6
作者 黄琼 胡杰 +3 位作者 周定刚 王勤 杨伟 朱天辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期659-667,共9页
产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分... 产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分析了其基因序列及所编码的氨基酸序列,并检测了其在这两种色型间的mRNA水平差异。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫克隆出的Tm-afp cDNA全长分别为579bp和588bp,它们包含一个20bp的5'端非翻译区、一个402bp的开放阅读框和一个变异较大的3'端非翻译区,其碱基序列一致性为95%。由于这两个抗冻蛋白基因编码的蛋白成熟肽存在两个氨基酸差异:第35位(D→E)和130位(T→S),因此将其判定为黄粉虫抗冻蛋白基因Tm-afp的两个异构体,并分别命名为Tm-afp-1和Tm-afp-2。Tm-afp-1和Tm-afp-2编码的抗冻蛋白异构体(分别为Tm-afp-1和Tm-afp-2)信号肽之间有3个氨基酸差异:第2位(G→A)、9位(S→T)和27位(Y→N);其成熟肽的第一个氨基酸为谷氨酰胺,含8个高度保守的12aa短串联重复序列,每个重复序列的第2位和第8位为半胱氨酸。此外,Tm-afp-1和Tm-afp-2均属富含苏氨酸和半胱氨酸的昆虫抗冻蛋白,其二级结构均由大量的β-折叠和无规则卷曲组成,三级结构为8个特殊的右手β-螺旋,每一圈螺旋由12个氨基酸组成;在β-螺旋的一个侧面规则排列着由保守XCT形成的β折叠片层。同时,低温可以诱导黄、黑两种色型黄粉虫Tm-afp的表达,但长时间低温诱导下黑色型黄粉虫幼虫的Tm-afp表达量显著高于黄色型黄粉虫幼虫Tm-afp表达量。结果提示,黄粉虫种内不同色型间,抗冻蛋白基因Tm-afp可能存在多种异构体,并且黑色型黄粉虫Tm-afp比黄色型黄粉虫Tm-afp对低温的应答更强烈。这一研究结果为进一步探索黄粉虫的耐寒性机理提供了有益参考。 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 抗冻蛋白 基因异构体 序列分析 MRNA表达
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两种色型黄粉虫酚氧化酶原的cDNA克隆、生物信息学分析及表达水平检测 被引量:3
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作者 黄琼 胡杰 王勤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期594-604,共11页
酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶,通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考,本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo,对其cDNA序... 酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶,通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考,本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo,对其cDNA序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测其在两种色型黄粉虫不同发育阶段mRNA表达水平上的动态变化。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫中克隆出的两个Tm-ppocDNA序列全长均为2199bp,碱基序列一致性为99%,包含一个2055bp的开放阅读框,编码684个氨基酸,它们的编码蛋白有3个氨基酸差异:第176位(P→A)、256位(V→A)和648位(I→M)。这两个基因分别被命名为Tm-ppo-1和Tm-ppo-2(GenBank登录号分别为JX987235和JX987234)。Tm-ppo-1和Tm-ppo-2编码的酚氧化酶原异构体蛋白(分别为Tm-PPO-1和Tm-PPO-2)存在一个可能的酚氧化酶原水解活化位点(R50~F51残基之间)和一个双铜结合中心(第196~239位残基和第344~411位残基);同时含有一个类似巯基酯区域的序列(第579~588位残基)及一个C-末端保守基序(第634~645位残基);但它们无氨基端疏水信号肽序列,也不存在跨膜区域。Tm-PPO-1和Tm-PPO-2的二级结构由大量的α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成;三级结构分为前导域(第16~66位残基)、不相邻的功能域Ⅰ(第3~15位残基和第67~181位残基)、功能域Ⅱ(第182~419位残基)和功能域Ⅲ(第420~679位残基)4部分。此外,Tm-ppo-1和Tm-ppo-2在黄、黑两种色型黄粉虫的各发育期均有表达,并且不同发育阶段的mRNA表达水平呈现明显的变化规律:幼虫期﹥成虫期﹥蛹期。同时,环境温度对Tm-ppo-1和Tm-ppo-2的mRNA表达具有显著影响:与常温对照组(25~30℃)相比,42℃暴露24h和48h的两种色型黄粉虫幼虫、蛹和成虫的mRNA表达量明显下调。相同试验条件下,黑色型黄粉虫幼虫和成虫的Tm-ppo-2mRNA表达量明显高于黄色型幼虫和成虫的Tm-ppo-1mRNA表达量,但两种色型黄粉虫蛹的Tm-ppo异构体表达量无显著差异。本研究为进一步探讨黄粉虫的遗传分化和免疫防御提供了有益参考。 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 酚氧化酶原 基因异构体 生物信息学 MRNA表达
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Analysis of Genetic Variation and Population Structure of Starch Synthesis-related Genes in Indica Rice Cultivars
8
作者 赵春芳 胡庆峰 +7 位作者 强新涛 赵凌 赵庆勇 陈涛 周丽慧 姚姝 梁文化 王才林 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2016年第9期1993-1999,共7页
In this study, 34 molecular markers of starch synthesis-related genes were used to evaluate the genetic variation and population structure of 87 indica rice cultivars from different countries and regions. The results ... In this study, 34 molecular markers of starch synthesis-related genes were used to evaluate the genetic variation and population structure of 87 indica rice cultivars from different countries and regions. The results showed that a total of 80 alleles were amplified using 34 primer pairs, with an average of 2.5 alleles per locus. The allele number varied from 2 to 6 among various cultivars. Shannon's diversity index of molecular markers varied from 0.303 to 0.796, with an average of 0.539. Polymorphism information content (PIC) varied from 0.084 to 0.658, with an average of 0.295. The genetic similarity coefficients of 87 indica rice cultivars ranged from 0.265 to 0.990, indicating significant genetic differences of starch synthesis-related genes among different cultivars, but the variation frequency of alleles varied among different cultivars. Population structure analysis showed that these 87 indica rice cultivars were divided into three categories. Genetic differences were small within the same category but great among different categories. Moreover, indica rice cultivars with simple genetic components accounted for 39.1% and those with complex genetic background accounted for 60.9%. This study may not only provide theoretical basis for genetic improvement of rice starch quality, but also lay a solid foundation for subsequent association analysis of rice quality-related traits. 展开更多
关键词 Indica rice Starch synthesis-related gene Genetic variation Population structure
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Structural Variation Analysis of Mutated Nannochloropsis oceanica Caused by Zeocin Through Genome Re-Sequencing 被引量:3
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作者 LIN Genmei ZHANG Zhongyi +2 位作者 GUO Li DING Haiyan YANG Guanpin 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期1225-1230,共6页
Zeocin can cause double strand breaks of DNA and thus may be employed as a mutagen. In this study, two strains of Nannochloropsis oceanica, the wild and the Zeocin-tolerant strains, were re-sequenced to verify such fu... Zeocin can cause double strand breaks of DNA and thus may be employed as a mutagen. In this study, two strains of Nannochloropsis oceanica, the wild and the Zeocin-tolerant strains, were re-sequenced to verify such function of Zeocin, The results showed that Zeocin can mutate the N. oceanica genome and cause the structural variation. Zeocin either swept away or selected the alleles of genes functioning in ubiquitin-mediated proteolysis, alpha-linolenic acid metabolism, ascorbate and aldarate metabolism, ribosome biogenesis, and circadian rhythm, indicating that N. oceanica may have adjusted its metabolic performances for protein, carbohydrate, and lipid, and changed its ribosome biosynthesis and living rhythm to survive in Zeocin containing medium. In addition, Zeocin caused mutation may have influenced the expression of a set of tanscription factors. It was concluded that Zeocin effectively caused the structural variation of the genome of N. oceanica, and forced the microalgae to select out the alleles of a set of genes around these variations in order to adapt to Zeocin containing medium. Further studies on the genetic basis of the phenotypic adaptation of this haploid and asexual microalga and the application of Zeocin to its genetic improvement are very important. 展开更多
关键词 Nannochloropsis oceanica Zeocin MUTATION genome re-sequencing structural variation
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WT1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响 被引量:1
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作者 沈慧玲 陈子兴 +3 位作者 王玮 岑建农 胡绍燕 赵晔 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期543-547,共5页
目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆... 目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察,细胞周期动力学检测,NBT还原试验,细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARα、p21、c-myc基因表达的改变。结果ATRA处理细胞48h,对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显,NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84),ATRA作用24h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降,经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。结论增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与PML/RARα、p21、c-myc基因表达上调有关。 展开更多
关键词 基因 WT1 细胞系 NB4 细胞分化 WT1基因异构体 NB4细胞分化 基因表达模式 PML/RARΑ RT-PCR检测 重组真核表达载体 NBT还原试验
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AML1-ET09a异构体在伴有t(8;21)的M2型急性髓系白血病中临床意义的研究 被引量:2
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作者 陈慧 张宏 +4 位作者 陈子兴 岑建农 何军 沈宏杰 姚利 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期272-274,共3页
t(8;21)(q22;q22)是急性髓系白血病中最常见的一种非随机染色体易位,约40%~50%的AML—M2(FAB分型)患者存在此种染色体易位。t(8;21)(q22;q22)形成AML1-ETO融合基因,虽然AML1-ETO融合蛋白能够改变基因的表达及造血细... t(8;21)(q22;q22)是急性髓系白血病中最常见的一种非随机染色体易位,约40%~50%的AML—M2(FAB分型)患者存在此种染色体易位。t(8;21)(q22;q22)形成AML1-ETO融合基因,虽然AML1-ETO融合蛋白能够改变基因的表达及造血细胞的增殖,但它并不能直接导致白血病的发生。Yan等证实了AML1-ETO融合基因异构体AML1-ET09a的存在,并通过建立动物模型研究AML1-ETO及其异构体AML1-ET09a的致白血病作用,其研究同样表明仅有AML1-ETO表达并不足以产生白血病,而AML1-ET09a则与白血病发生的关系更紧密。 展开更多
关键词 M2型急性髓系白血病 融合基因异构体 AML1-ETO融合基因 临床意义 染色体易位 FAB分型 造血细胞 融合蛋白
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