hnRNPA2B1基因抑制剂治疗对淋巴瘤的影响

目的探讨不均一型核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)基因抑制剂对淋巴瘤的影响,为临床治疗提供参考。方法将196例淋巴瘤患者随机分为两组,各98例。对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上给予hnRNPA2B1基因抑制剂治疗。治疗10周后,对比两组临床效果。结果观察组淋巴瘤增生(2.1±0.3)cm,小于对照组的(3.4±0.5)cm(P<0.01);观察组淋巴瘤转移率与复发率均低于对照组(P<0.05)。结论 hnRNPA2B1基因抑制剂治疗淋巴瘤效果确切,可有效降低淋巴瘤转移率与复发率,减轻患者痛苦。

EZH2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及PD1/PD-L1表达的作用机制

目的探究Zeste基因增强子同源物(EZH)2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及程序性死亡(PD)1/PD1配体(PD-L1)表达的作用机制。方法取对数生长恶性淋巴瘤放疗抵抗细胞株将其分为恶性淋巴瘤(A)组、多柔比星(B)组、EZH2抑制剂(C)组、EZH2抑制剂联合PD1/PD-L1抑制剂(D)组,酶联免疫吸附试验(ELISA)及流式细胞仪检测Th细胞分化相关因子,Western印迹检测PD1/PD-L1蛋白表达,Hoechst33258染色法、噻唑蓝(MTT)法及小室法检测恶性淋巴瘤细胞活性。结果与A组相比,B、C、D组细胞凋亡率、干扰素(INF)-γ水平明显升高,细胞增殖率、侵袭数量、白细胞介素(IL)-4水平、PD1、PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),且C组比B组变化更明显,D组比C组变化更明显(P<0.05)。结论EZH2抑制剂可显著抑制恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗,有效调控Th细胞分化,并抑制PD1/PD-L1蛋白表达。

PTEN抑制剂BPV通过下调细胞焦亡水平改善LPS诱导的急性肺损伤

目的:探究第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)抑制剂过氧化氢氧化矾酸钾(BPV)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及作用机制。方法:将60只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、BPV组、LPS组和BPV+LPS组,其中又将LPS组分为LPS刺激后6 h、12 h、24 h、48 h组;Western blot检测LPS各组小鼠肺组织中PTEN蛋白表达变化;检测小鼠肺组织湿/干重(W/D),分析Sham组,BPV组、LPS组及BPV+LPS组小鼠肺组织水肿情况;HE染色观察4组小鼠肺组织病理学改变;ELISA和流式细胞术分别检测4组小鼠肺组织灌洗液(BALF)中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平及巨噬细胞数量变化;组织免疫荧光染色检测各组小鼠肺泡巨噬细胞中pyrin结构域NLRP3表达;Western blot检测4组小鼠肺组织中NLRP3介导的焦亡途径中NLRP3、caspase-1 p10、ASC和GSDMD p30蛋白表达及PTEN/Akt/NF-κB信号通路中PTEN蛋白、Akt^(s473)的磷酸化水平及TLR4和NF-κB p65的蛋白表达。结果:与Sham组相比,LPS能以时间依赖性刺激小鼠肺组织中PTEN表达,且作用24 h的促进效果最为显著(P<0.01),并诱导小鼠肺组织损伤(P<0.05),促进BALF中巨噬细胞比例及炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α表达(P<0.05或P<0.01),同时肺组织巨噬细胞中NLRP3表达明显增加(P<0.05);与LPS组相比,BPV+LPS组小鼠肺组织损伤明显减轻(P<0.05),BALF中上述炎症因子表达水平显著降低(P<0.05),肺泡巨噬细胞中NLRP3表达亦明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与Sham组相比,LPS组和LPS+BPV组中NL-RP3、caspase-1 p10、ASC和GSDMD p30、PTEN蛋白及Akt^(s473)的磷酸化水平及TLR4和NF-κB p65表达均显著升高(P<0.05或P<0.01);与LPS组相比,除Akt^(s473)的磷酸化水平明显升高外(P<0.05),其他蛋白水平均明显降低(P<0.05)。结论:PTEN抑制剂BPV可能通过Akt/NF-κB信号通路抑制肺组织中NLRP3介导的细胞焦亡,改善LPS诱导的小鼠ALI症状。

EML4-ALK融合基因抑制剂耐药机制的研究进展

随着对肿瘤发病机制认识的不断深入，近年来肺癌的分子靶向治疗已经成为全世界的研究热点之一。2003年，美国食品及药物管理局（FDA）首先确立了表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors，EGFR—TKI）在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中的治疗地位；2004年，EGFR敏感突变相继被发现，

ALK基因抑制剂治疗非小细胞肺癌脑转移的研究进展

间变性淋巴瘤激酶（ALK）重排是非小细胞肺癌（NSCLC）强有力的致癌驱动基因之一，伴ALK重排的NSCLC患者应用第一代ALK抑制剂如克唑替尼的治疗疗效要远远优于化疗。同时越来越多的研究报道了ALK抑制剂在伴有脑转移的NSCLC患者中的颅内有效率。然而尽管第一代ALK抑制剂治疗ALK阳性NSCLC脑转移有初步的临床数据，但在获得性耐药后，肿瘤出现不同程度的复发，给肿瘤患者的后续治疗带来新的挑战。新一代ALK抑制剂如艾乐替尼、色瑞替尼、AP26113和PF-06463922的相继出现解决了这一问题。

转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因抗虫甘蓝植株的获得

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入甘蓝(Brassica oleracea var.capitata L.)栽培品种“京丰”和“迎春”,并分别获得了转基因再生植株。对NPTⅡ的ELISA检测表明,标记基因NPTⅡ已在再生植株中得到有效表达。对转化植株进行Southern blot分子杂交实验进一步证明CpTI基因已整合到甘蓝的基因组。实验室内的叶片离体饲虫及盆栽饲虫试验表明,转基因甘蓝对菜青虫具有一定抗性。实验中还观察到,采用愈伤组织分化途径可以获得较高的转化频率,但嵌合体较多;而直接分芽的途径转化率低,但嵌合体较少。

根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种

研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。

茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文)

对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,分别扩增出3'端和5'端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627 bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062 KDa.该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%～77%.

新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆

利用 RT- PCR的方法 ,从豇豆种子、子叶及成熟叶片中分别提取 RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行 PCR扩增 ,PCR产物与 p UCm- T载体连接进行克隆 ,蓝白筛选重组子 ,经测序 ,其核苷酸同源性高达 1 0 0 % ,蛋白质同源性达 91 %。本试验同时对该基因的表达时期差异进行了大致检测 ,结果是种子的表达量最高 ,子叶其次 。

水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转化桑树获得转基因植株的初报

利用基因枪法将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 (OC)导入桑树组织 ,经抗性筛选和组织培养获得再生植株 ,通过对转基因植株的PCR Southern杂交及RNA点杂交等检测 ,证实OC基因转化桑树成功 ,为选育抗虫性桑树品种奠定了基础。

用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株

采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。

植物蛋白酶抑制剂基因结构、调控及其控制害虫的策略

各种不同类型的植物蛋白酶抑制剂基因已被分离 ,它们的特异产物 (单基因或多基因组合 ) ,对昆虫体内各种生化和生理过程会产生不同程度的影响 ,在对昆虫和病原体防御体系中起重要作用。多种蛋白酶抑制剂重组 ,协同保护植物的方法 ,已成为害虫综合防治计划的一部分。尽管它们近期内尚不能代替化学杀虫剂 ,但可作为有效的替补。目前 ,大多数抑制剂的作用和机理正在详尽地研究中 ,该文综述了植物蛋白酶抑制剂的基因结构、调控与表达并讨论了培育转基因作物控制害虫的策略。

脊尾白虾丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆及表达分析

采用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因的cDNA序列。该基因全长1 516 bp,开放阅读框1 245 bp,编码414个氨基酸,其预测分子量为45.06 kD,理论等电点为5.694,并含有两个糖基结合位点。同源性分析发现其与斑节对虾(Penaeus monodon)同源性最高,达到49%。组织表达分析表明,serpin基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是肝胰腺和鳃组织,在肌肉中表达量最低。不同盐度胁迫后脊尾白虾的血细胞serpin基因表达量在盐度胁迫8 h时显著高于对照组(P<0.05),肝胰腺组织中serpin基因表达量在盐度胁迫后2 h和24 h出现明显峰值,且显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明,脊尾白虾serpin基因参与了急性盐度胁迫下机体的应激反应。本研究通过克隆脊尾白虾酚氧化酶原激活系统中的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因cDNA全长,分析盐度胁迫后其在血细胞和肝胰腺组织中的表达变化规律,以期为脊尾白虾的健康养殖提供理论基础和参考依据。

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定

用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。

冠心病患者细胞因子信号转导抑制剂1基因多态性的临床意义

目的探讨冠心病患者细胞因子信号转导抑制剂1(SOCS1)基因多态性与心功能及细胞因子的相关性。方法选择冠心病患者256例为研究组,健康自愿者256例为对照组。运用聚合酶链反应(PCR)及单核苷酸多态性(SNP)技术分析2组SOCS1基因多态性,并测定细胞因子和心功能的变化。结果 2组SOCS1基因rs173516427和rs15677380等位基因频率差异有统计学意义(χ2=7.46、8.09,P=0.024、0.014),rs173516427 G等位基因和rs15677380 C等位基因为冠心病的高危因素(OR=1.56、1.71);rs15677380、rs173516427不同基因型LVEF和BNP差异有统计学意义(F=10.9、12.3、9.89、11.5,P<0.05)。结论SOCS1基因与动脉粥样硬化的发生有关,并参与冠心病的发展过程。

大白菜的马铃薯蛋白酶抑制剂基因转化及抗菜青虫性的鉴定

以大白菜(B.campestrtis ssp.pekinensis)‘北京80号’生长3 d无菌苗的带柄子叶为外植体,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的叶盘法导入马铃薯蛋白酶抑制剂基因(pin Ⅱ)。通过抗性株的真叶在不定芽诱导培养基上的再生, 证实了嵌合体的存在,并通过此方法来消除嵌合体。获得的转基因植株经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实,目的基因已经整合入植物基因组中。对菜青虫(Pieris rapae L.) 进行了转基因大白菜叶片的连续离体饲喂,结果表明:受试的转基因大白菜对菜青虫的生长发育有较明显的抑制作用。

刺桐胰蛋白酶抑制剂基因的构建及表达研究

刺桐胰蛋白酶抑制剂是胰蛋白酶、组织型纤溶酶原激活剂及瑞替普酶特异性的抑制剂 ,可作为配基制成亲合填料用于纯化上述酶。通过化学合成和PCR结合法合成了ETI基因 ,经过序列分析后将其克隆到大肠杆菌表达载体质粒pET32a中 ,并在大肠杆菌中进行诱导表达。表达蛋白分子量同理论值一致 ,生物活性检测表明复性后的ETI对胰蛋白酶及瑞替普酶具有特异抑制作用。

转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)抗虫甜椒植株的获得

以 12～ 14d苗龄的甜椒带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入甜椒杂交种“中椒 5号”和常规种“茄门”中 ,在对甜椒转化系统和芽丛诱导茎伸长的条件进行优化研究后 ,获得了卡那霉素抗性植株 ,最高转化频率为 16 .7% .卡那霉素抗性筛选、PCR检测和Southernblot杂交均证实 ,nptII基因和sck基因已整合进甜椒基因组中 .室内离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明 ,转基因植株对棉铃虫 (HeliothisarmigeraHubner)具有一定抗性 .图 4表 2参