宏基因捕获法二代测序技术在感染性胰腺坏死病原学诊断中的价值

背景与目的:早期病原学精准诊断是改善感染性胰腺坏死(IPN)患者预后的突破口之一,但目前临床上缺乏早期精准识别IPN的高效方法。本研究探讨基于宏基因捕获法(MetaCAP)的二代测序技术在IPN病原学诊断中的应用价值。方法:采用前瞻性研究方法,选取2024年1月—7月中南大学湘雅医院29例疑似急性坏死性胰腺炎患者进行血MetaCAP检测和常规病原学培养。将胰周积液病原学培养结果作为金标准,比较两种检测方法的诊断效能。结果:由于3例未获胰周积液培养结果,纳入最终分析的病例总数为26例。全组病死率为23.1%(6/26)。住院期间,确诊IPN的病例为9例(34.6%)。MetaCAP诊断IPN的敏感度和阴性预测值均明显高于常规病原学培养(77.8%vs.11.1%,P=0.031;86.7%vs.65.2%,P=0.032),而两种方法的特异度(76.5%vs.88.2%,P=0.689)和阳性预测值(63.6%vs.33.3%,P=0.347)差异无统计学意义。MetaCAP的平均检测耗时33(20~49)h,微生物培养耗时125(45~142)h,差异有统计学意义(P<0.001)。血MetaCAP检测的平均费用为2500元/例,但MetaCAP检测仅占平均住院费用的1.19%。结论:MetaCAP在IPN的早期病原学诊断中具有重要价值,且耗时较短,有较好的检验效能和卫生经济学价值,具有良好的临床应用前景。

第二代基因杂交捕获法与液基薄层细胞技术在宫颈癌早期筛查中的应用

目的探讨液基薄层细胞检测(thin-layer preparation cytologic test,TCT)、第二代基因杂交捕获法(hybrid capture 2,HC2)、阴道镜病理组织学检查对宫颈癌的预防与早期诊疗的意义。方法选取2013年8月—2016年8月在赣州市人民医院妇科门诊就诊的TCT阳性患者共15 200例,进一步采用HC2-HPV和病理组织学诊断方法检测,并以病理组织学诊断结果为金标准。结果单纯TCT检查与组织病理学的诊断符合率为77.51%(11 782/15 200),单纯HC2-HPV检测HPV阳性与组织病理学的诊断符合率为83.24%(12 652/15 200),而TCT联合HC2-HPV检查与组织病理学的诊断符合率为95.16%(11 212/11 782),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TCT、HC2-HPV检测联合阴道镜组织病理学检查可以提高对宫颈癌及癌前病变诊断的准确率,值得临床上进一步推广。

第二代基因杂交捕获法检测高危型HPV-DNA在宫颈癌前病变筛查中的应用研究

目的探讨第二代基因杂交捕获(HC2)法检测人乳头瘤病毒(HPV)分型基因对宫颈癌前病变的诊断作用及意义。方法选择北京市顺义区妇幼保健院2009年1月～2012年1月不同年龄妇女宫颈脱落细胞标本2400例,采用HC2法检测高危型HPV-DNA,并与液基薄层细胞检测(TCT)进行对比,异常患者行病理组织学检查,以病理结果为金标准,比较HC2法与TCT的诊断效果。结果罹患宫颈癌及癌前病变的女性以青中年为主。TCT检查、HPV检测与病理的符合率是随病理级别的上升而上升。CINⅢ及宫颈癌与高危型HPV感染密切相关,其中以HPV16、18、58为主。结论高危HPV感染是宫颈癌及癌前病变发病的主要致病因子,HPV16型感染易导致宫颈高度病变;HPV-DNA联合TCT能最大程度地发现宫颈异常细胞并及时发现宫颈癌的诱因。

第二代基因杂交捕获法检测高危型人乳头瘤病毒在宫颈癌及癌前病变中的临床研究

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率较高,位居女性恶性肿瘤第二位[1]。研究[2]证实持续高危型人乳头瘤病毒（HPV-DNA）感染是宫颈癌前病变和宫颈癌主要病因,多数妇女仅为HPV短暂感染,一般8~10个月左右消失,仅有少数会持续感染最终发展成为子宫颈癌。早期诊断和治疗癌前病变可有效预防和控制宫颈癌发生,进行合理有效的宫颈癌筛查可降低宫颈癌的发病率。

小鼠新基因Ayu17-449的克隆及表达分析(英文)

在利用PU8 捕获载体从小鼠 ES 细胞中寻找有关对发育起重要作用基因时,一阳性ES克隆编号为Ayu17-449 被捕获,经过Southern blotting法证实捕获载体单一整合在Ayu17-449号ES细胞的基因组中。通过用 5′RACE 法得到所捕获基因的一小段cDNA,在EST数据库中比对,得到一5 523 bp cDNA 序列,在Celera数据库中它包含于两个相邻基因,根据这两个基因的 mRNA 设立了一系列的引物进行 RT-PCR 和测序,用这两个基因的不同片段分别作探针进行 Northern blotting 分析,确定这是一个 RNA 约 9 kb 并编码 1 920 个氨基酸的新基因(定名为 Ayu17-449 基因,其 cDNA 序列和编码蛋白序列发表在NCBI数据库,编号为DQ079067)。Northern blotting揭示Ayu17-449基因高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏、肺、肌肉和胃等组织。PU8 捕获载体具有X-gal报告基因,能从蛋白表达水平揭示它所捕获的基因的表达模式。X-gal染色结果显示,Ayu17-449蛋白高度表达在小鼠的脑、肾脏、心脏等组织,与Northern blotting 法的结果高度一致。X-gal染色切片结果进一步证明 Ayu17-449 蛋白主要表达在脑的神经细胞和肾脏近曲小管细胞中。Ayu17-449 基因的编码蛋白在数据库(Scansite, http://scansite.mit.edu/)做功能基团分析后,揭示其编码蛋白的N末端含有Granin基团,大量文献证实Granin基团具有参与激素的分泌的功能,显示Ayu17-449基因可能与激素的分泌有关。

液基薄层细胞学联合第二代基因杂交捕获法在宫颈病变筛查中的应用

目的探讨液基薄层细胞学(LCT)联合第二代基因杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)在宫颈病变筛查中的临床价值。方法选取台州市中心医院门诊就诊患者1 500例,分为LCT组、HPV-DNA组和LCT联合HPV-DNA组,各500例。三组患者分别进行LCT检查、HPV-DNA检测和LCT联合HPV-DNA筛查,同时进行阴道镜下宫颈组织活检或宫颈管诊断性刮宫(ECC)检查。结果 LCT联合HPV-DNA组敏感性和阴性预测值均高于LCT组和HPV-DNA组,假阴性率最低。LCT联合HPV-DNA筛查阳性检出率均高于LCT组、HPV-DNA组(P均<0.05)。结论 HPV-DNA联合LCT进行宫颈病变筛查,可有效准确地提高宫颈癌和癌前病变的检出率。

惠州地区妇女宫颈感染高危型人乳头瘤病毒调查

目的研究高危型HPV-DNA检测负荷量与宫颈病变程度的相关性。方法分析2013年1月至2014年12月就诊于惠州市中心人民医院妇科（门诊和住院）并采用第二代基因杂交捕获法检测高危型HPV-DNA的患者9917例，从中筛选出1209例检测结果为阳性的患者，并同时行液基细胞学检查（TCT）。结果（1）9917例样本中，HPV感染率12．19％，21-50岁年龄段感染率总体高于其他年龄段（P〈0．05）。（2）l209例高危型HPV-DNA阳性患者中，细胞学诊断：未见上皮内病变835例（69．07％），炎性反应细胞改变179例（14．8l％），ASC33例（2．73％）,LSIL59例（4．88％），HSIL103例（8．52％）。将高危型HPV-DNA检测结果阳性负荷量分为1-100、10-300,301-600,601-1000、〉1000pg／mL组，看不同TCT结果的负荷量分布情况，可见每组的比率并不完全随宫颈病变的加重雨呈递增趋势。（3）宫颊细胞学病变程度与HR-HPv-DNA负荷量相关系数r=0．245（P〈0．01）。结论高危型HPV—DNA负荷量与宫颈病变程度并不完全相符，高危型HPV-DNA负荷量并不能作为预测宫颈痛变严重程度的指标。

宁波镇海区女性健康普查及相应HPV检测分析

目的通过对宁波镇海区女性宫颈液基薄层细胞学(TCT)健康普查及相应二代基因杂交捕获法高危型人乳头状瘤病毒基因检测(HC2-HPV-DNA),探讨两种技术联合应用在宫颈癌筛查中的价值。方法对3 216例女性行宫颈TCT检查及相应HC2-HPV-DNA检测,并与病理活检结果进行对照分析。结果在3 216例女性中,TCT检查异常者630例,阳性率19.6%(630/3216);在630例TCT检查异常者中HC2-HPV-DNA检测阳性者383例,阳性率60.8%(383/630)。TCT检查及HC2-HPVDNA检测均阳性的383例行宫颈活检,病理诊断为CIN符合率为97.1%;TCT检查为阳性,HC2-HPV-DNA检测为阴性的247例行宫颈活检,病理诊断为CIN符合率为66.4%,经比较差异有统计学意义(x^2=9.40,P<0.01)。结论宫颈TCT检查与宫颈HC2-HPV-DNA检测的联合应用对有效筛查宫颈癌尤为重要。

HC2-HPV检测在妇科普查中诊断价值的研究

目的 探讨第二代基因杂交捕获（HC2）法检测人乳头瘤病毒（HPV）基因在妇科普查对宫颈癌前病变的诊断价值及意义。方法 对妇科普查人群1000例和妇科门诊人群500例不同年龄妇女的宫颈脱落细胞标本,采用HC2法检测高危型HPV-DNA,异常者行病理组织学检查,以病理结果为金标准,并对其在不同年龄段感染情况、病理阳性的敏感性及高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）病毒载量的差异进行比较。结果 妇科普查人群的HR-HPV感染率明显低于妇科门诊人群（P〈0.01）。妇科普查人群的感染高峰年龄段为20~25岁和51~55岁。妇科门诊人群的感染高峰年龄段为20~25岁、26~30岁、31~35岁和36~40岁。妇科普查人群的病理阳性敏感性低于妇科门诊人群（P〈0.01）。妇科普查人群感染HR-HPV高病毒载量占比明显低于妇科门诊人群（P〈0.01）。结论 HC2-HPV检测用于宫颈癌筛查能提高诊断符合率,及早发现宫颈癌前病变,以指导临床及早治疗。

HC2在妇科门诊检测HPV的诊断价值分析

目的：探讨第二代基因杂交捕获法（HC2）检测人乳头瘤病毒（HPV）基因对宫颈癌前病变的诊断价值及意义。方法：选择2015年1月至2015年12月我院妇科门诊不同年龄妇女宫颈癌患者500例，采用HC2法检测高危型HPV-DNA，并与多重PCR检测法进行对比，异常患者行病理组织学检查，以病理结果为金标准。结果：500例患者中HC2检测阳性患者为165例，阳性率为33．00％，多重PCR检测阳性患者为206例，阳性率为41．20％。两种方法比较差异有统计学意义（P〈0．05）：两种检测方法与病理符合率有随病理级别的上升而升高趋势，且HC2检测阳性患者敏感度较好。结论：高危HPV感染是癌前病变和宫颈癌发病的主要致病因子，HC2-HPV-DNA检测是目前癌前病变和宫颈癌筛查的最好方法，能提高诊断符合率，及早发现宫颈癌病变，以指导临床早发现、早诊断、早治疗，可以预防和根治宫颈癌。

宫颈上皮病变组织中LIN28B表达与高危型HPV感染的关系及临床意义

目的探讨LIN28B在宫颈上皮病变组织中表达与高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)感染的关系及临床意义。方法应用免疫组化方法检测102例宫颈癌、83例宫颈上皮内瘤变(CIN)及33例宫颈炎组织中LIN28B表达情况,同时于术前采用第二代基因杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测患者HR-HPV感染情况。对随访3年以上宫颈癌患者进行生存分析。结果 LIN28B在宫颈癌中高表达率均高于CIN和宫颈炎(P<0.05)。LIN28B表达与组织学分级、FIGO分期、浸润深度及淋巴结是否转移有关(P<0.05)。HR-HPV在宫颈炎、CIN和宫颈癌中感染率依次升高(P<0.05),但与临床病理参数均无关(P>0.05)。LIN28B表达与HR-HPV感染呈正相关(P<0.05)。LIN28B表达与预后有关(P<0.05),而HR-HPV感染与预后无关(P>0.05)。结论 LIN28B表达和HR-HPV感染可反映宫颈上皮病变的程度,联合检测二者有助于宫颈癌筛查及临床病理因素的判断,LIN28B表达与宫颈癌患者的预后密切相关。