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肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析
被引量:
5
1
作者
黄燕颖
张新蔚
+2 位作者
楼永良
严杰
孙爱华
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期424-430,共7页
目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株.采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp...
目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株.采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度(MIC).采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因(stkP)胞外区(EC-StkP)、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段(EC-stkP),T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白(EC-rStkP)表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法(VT-ITC)和表面等离子共振法(Biacore)检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果 肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感(MIC=0.06和0.12 μg/ml),但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药(MIC=16和32 μg/ml).肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关(PASTA)功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论 肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.
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关键词
肺炎链球菌
丝氨酸/苏氨酸激酶
Β-内酰胺类抗生素
结合
基因敲除/耐药
原文传递
题名
肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析
被引量:
5
1
作者
黄燕颖
张新蔚
楼永良
严杰
孙爱华
机构
温州医科大学检验医学院、生命科学学院
杭州医学院
浙江大学医学院病原生物学系
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期424-430,共7页
基金
国家自然科学基金项目(81271893)
浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目(2012-241)
文摘
目的 确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力.方法 采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株.采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度(MIC).采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因(stkP)胞外区(EC-StkP)、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系.采用PCR扩增stkP基因胞外区片段(EC-stkP),T-A克隆后测序.构建EC-stkP原核表达系统,SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白(EC-rStkP)表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP.采用等温滴定量热法(VT-ITC)和表面等离子共振法(Biacore)检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力.结果 肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感(MIC=0.06和0.12 μg/ml),但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药(MIC=16和32 μg/ml).肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区,该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关(PASTA)功能结构域.克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%.构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP.PCN和CTX均能与EC-rStkP结合,但后者结合EC-rStkP能力强于前者.结论 肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关,其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力.
关键词
肺炎链球菌
丝氨酸/苏氨酸激酶
Β-内酰胺类抗生素
结合
基因敲除/耐药
Keywords
Streptococcus pneumoniae
Ser/Thr kinase
β-lactam antibiotics
Binding ability
Gene knockout/drug resistance
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肺炎链球菌StkP激酶与β-内酰胺类抗生素结合能力及耐药相关性分析
黄燕颖
张新蔚
楼永良
严杰
孙爱华
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
5
原文传递
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参考文献
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