shox基因杂合性缺失致胎儿骨骼发育异常的产前诊断

目的探讨shox(矮小同源盒)基因杂合性缺失致胎儿骨骼发育异常的产前诊断价值。方法选取2016年1月-2018年1月来我院行产前检查的372例孕妇,全部孕妇均行超声检查,超声诊断胎儿骨骼发育异常12例,12例孕妇接受SNP-array(单核苷酸多态性微阵列芯片)检查,分析检测结果。结果超声诊断胎儿骨骼发育异常者占比3.26%,shox基因杂合性缺失率0.27%;NP-array检测结果提示胎儿X或Y染色体短壁末端局部存在1.063 Mb的杂合性缺失,缺失片段包含shox基因。结论产前SNParray联合超声检查可有效检出shox基因杂合性缺失致胎儿骨骼发育异常病例,为优生优育创造有利条件。

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。

3例SHOX基因杂合性缺失致Leri-Weill软骨生成障碍胎儿的遗传学分析

目的对3例骨骼发育异常胎儿及其父母行比较基因组杂交微阵列(array comparative genomic hybridization,aCGH)分析,探讨遗传学病因。方法超声检出胎儿骨骼发育异常孕妇3例(均为单胎妊娠),于超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水或行脐静脉穿刺术采集脐带血标本,同时采集3例孕妇及配偶外周血标本,进行染色体核型分析和aCGH检测。结果3例孕妇、孕妇配偶及胎儿G显带核型分析结果均未见异常。例1胎儿aCGH结果显示X染色体p22.33区域存在1.39Mb杂合性缺失(chrX:219609-1608358,hg19),胎儿父亲aCGH结果正常,家系验证结果表明胎儿杂合性缺失遗传自母亲。例2胎儿aCGH结果显示X染色体p22.33区域或Y染色体p11.32区域存在0.65Mb杂合性缺失(chrX:464439-1118325或chrY:414439-1068325,hg19),胎儿父母aCGH结果均正常,家系验证结果表明胎儿杂合性缺失为新发突变。例3胎儿aCGH结果显示Xp22.33区域存在0.19Mb杂合性缺失(chrX:550458-735001,hg19),胎儿父母aCGH结果正常,家系验证结果表明胎儿杂合性缺失为新发突变。3例胎儿缺失片段大小不等,均包含与胎儿表型相关的SHOX基因。例1胎儿出生后随访至20月龄,身高77.6cm,前囟门未闭合,无其他异常;例2、例3孕妇选择终止妊娠。结论SHOX基因杂合性缺失导致的Leri-Weill软骨生成障碍是3例胎儿骨骼发育异常的遗传学病因。

神经胶质瘤中9p21-22区微卫星DNA的杂合性缺失研究

目的 :用微卫星确定神经胶质瘤在 9p2 1 -2 2区是否发生基因丢失。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)方法及聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术 ,对 2 9例神经胶质瘤标本进行杂合性缺失(L OH)及微卫星不稳定性 (MSI)检测。结果 :2 9例神经胶质瘤在所选 9p2 1 -2 2区的三个位点中未发现 L OH及 MSI改变。结论 :1 9p2 1 -2 2区除 p1 5、p1 6可能不存在神经胶质瘤的其它肿瘤抑制基因 ;2本研究结果提示

宫颈染色体3p14杂合性缺失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈癌染色体3p14区域D3S1300、D3S1600位点微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSl)及等位基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)频率,为准确定位宫颈癌相关肿瘤抑制基因位点提供实验依据,并探讨LOH及MSI与宫颈癌临床分期、病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点,显微分离提取41例宫颈癌石蜡切片中的正常组织和肿瘤组织,经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色,进行LOH及MSI研究。结果41例样本中有25例至少存在一个位点的LOH,D3S1300位点LOH的频率为35%,D3S1600位点LOH的频率为28%。MSI发生频率相对较低,D3S1300的MSI频率为7.5%,D3S1600的MSI频率为12.8%。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与临床分期、病理分级相关性有显著意义(P<0.05),而MSI与之无显著的差别(P>0.05)。结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH,提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈癌染色体3p14区域LOH与临床分期、病理分级成正相关,提示检测该区域的LOH可作为病程进展及预后的重要参考指标。MSI在本研究中与宫颈癌临床分期、病理分级无明显相关。

非小细胞肺癌3p染色体多区域杂合性缺失检测的研究

背景与目的已有研究表明,3号染色体短臂(3p)等位基因的杂合性缺失(loss of heterozygaity,LOH)是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生中常见且早期发生的分子生物学改变,可以造成该染色体所包含的多种抑癌基因的失活。本研究的目的是探讨人3pLOH在非小细胞肺癌(NSCLC)临床检测中的意义。方法采用荧光定量PCR方法分别对32例非小细胞肺癌肿瘤组织及8例非恶性肿瘤肺组织和外周血有核细胞进行3p位点LOH检测,对试验结果进行非参数检验。结果32例肺癌标本中LOH联合检出率为78.125%,外周血有核细胞LOH联合检出率为65.625%,其中肺癌组织标本各位点LOH检出率分别为43.75%(3p25)、56.25%(3p14)、56.25%(3p21.3),外周血有核细胞检出率分别为18.75%、31.25%、50%,相比对照组结果具有差异,组织及外周血有核细胞联合检出率高于各位点单纯检出率,差别具有统计学意义;同一患者的肺癌肿瘤组织与外周血有核细胞3p基因LOH联合检测结果存在一致性。结论肺癌组织及外周血有核细胞3p基因LOH检测对于肺癌的无创诊断具有较好的临床意义,且多位点联合检测有助于提高检测的敏感性。

原发性肝癌全基因组杂合性缺失的研究

目的 研究肝癌全基因组等位基因杂合性缺失 (LOH)及其临床意义。方法 采用 382对微卫星标志 ,对 6 5例肝癌 2 2条常染色体等位基因LOH进行检测。结果 全组平均杂合子 6 8.1%。LOH >30 %的有 1q、3p、4q、8p、13q、16q和 17p。HBsAg阳性者D4S2 96 4LOH(6 6 % )较HBsAg阴性者(30 % )高 (P <0 .0 5 ) ;D3S36 81和D17S938LOH者术后复发率 (91%、83% )较无LOH者 (5 2 %、6 5 % )高 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ;D17S938LOH者术后 1、2、3年生存率分别为 5 0 %、35 %、2 5 % ,无LOH者则分别为 75 %、6 7%、5 8% ,两者之间的差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 我国肝癌LOH与国外报道有类似之处 ,但 3p高频率缺失属首次报道。HBV感染导致肝硬化、肝癌可能与D4S2 96 4(4q12 13)位点上抑癌基因的丢失有关。D3S36 81(3p12 )和D17S938(17p13)位点上可能存在与肝癌复发及预后有关的肿瘤抑制基因。

应用荧光定量PCR法联合检测NSCLC外周血有核细胞3p基因多区域LOH

目的探讨人3号染色体短臂(3p)等位基因位点杂合性缺失(LOH)多区域联合检测的意义。方法采用实时荧光定量PCR方法分别对32例非小细胞肺癌患者及8例非恶性肿瘤患者外周血有核细胞进行3p位点LOH检测,对试验结果统计学分析。结果32例非小细胞肺癌外周血有核细胞LOH联合检出率为65.625%,各目的基因检出率分别为18.75%(3p25)、31.25%(3p14)、50%(3p21.3),相比对照组检测结果差异具有显著性,联合检出率高于各位点单纯检出率,差别具有显著性。结论非小细胞肺癌外周血有核细胞3p位点LOH检测对于肺癌的无创诊断有意义,且多区域联合检测有助于提高检测的敏感性。

肾透明细胞癌3，7，8，9，17号染色体的杂合性缺失研究

肿瘤常在抑癌基因位点上出现染色体基因缺失，多表现为等位基因杂合性缺失（LOH）。我们通过检测肿瘤的LOH及其规律，旨在一定染色体范围内发现肿瘤相关的抑癌基因。

染色体核型和单核苷酸多态性检测对AML预后评估的临床分析

目的探讨不同染色体核型及单核苷酸多态性(SNP)的急性髓系白血病(AML)患者、尤其是具有正常染色体核型患者预后的异同。方法应用G-显带技术和基于SNP的高分辨基因芯片(SNPa)对23例AML患者的骨髓进行检测,明确其染色体核型及SNP状况;观察患者的疾病转归,并分析患者疾病转归与其染色体信息变化的关系。结果在23例AML患者中,G-显带技术检测出11例伴有异常染色体核型,12例为正常染色体核型。SNPa检测出19例患者伴有基因信息异常,其中12例具有正常染色体核型的患者中有11例伴有SNP;这11例患者中有4例基因信息异常,表现为基因杂合性缺失(LOH)。12例具有正常染色体核型的AML患者中,有7例初次诱导即达完全缓解,经后续治疗存活至今;另有2例经再次诱导化学治疗后达完全缓解;还有3例初次诱导未达完全缓解,再次诱导化学治疗后因出现严重感染或内脏出血而死亡。11例具有异常染色体核型的AML患者中,有8例在初次诱导化学治疗后达完全缓解。经SNPa检测发现,23例AML患者中,5例具有LOH的患者有4例初次诱导不缓解可能与其合并有17或21号染色体长臂特定位点发生SNP有关。结论 SNPa可作为染色体核型分析的补充手段,对AML患者,特别是具有正常染色体核型患者可提供更为准确的预后评估。

HCVNS5A转基因小鼠遗传不稳定性分析

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)NS5A转基因小鼠的原发性肝癌(HCC)发生与遗传不稳定的关系,以及活性氧簇(ROS)的作用。方法:选取5只12个月龄31Line HCV NS5A转基因雄性小鼠为研究对象,3只12个月龄正常健康同窝雄鼠作为对照。选取小鼠10个微卫星位点,用微卫星标志的聚合酶链反应检测NS5A转基因小鼠肝肿瘤和其周围组织的微卫星杂合性缺失(LOH)、杂合性保留(ROH)和不稳定性(MSI)。RT-PCR、蛋白质印迹法和流式细胞法分析转基因小鼠肝组织的NS5A表达和ROS水平。结果:HCV NS5A仅在转基因小鼠中表达,且肿瘤组织的表达水平高于肿瘤周围组织。转基因小鼠的ROS水平显著高于非转基因小鼠(13.61±3.43)倍,P=0.009。HCV NS5A转基因小鼠肝肿瘤及其周围组织的LOH检出率分别为25.0%(5/20)和20.0%(10/50),均高于非转基因小鼠(0),P值分别为0.003 9和0.008 8。转基因小鼠肝肿瘤组织、肿瘤周围组织和非转基因小鼠中的ROH检出率分别为20.0%(4/20)、38.0%(19/50)和43.3%(13/30),差异无统计学意义,P均>0.05。样本中均未检测出MSI。结论:HCV NS5A基因的表达诱导了ROS水平增高,而高水平的ROS进一步导致LOH,可能是HCV NS5A转基因小鼠HCC发生的重要因素之一。