茶树农杆菌转化系统和基因枪转化系统的优化

在用农杆菌浸染前,将茶树外植体预培养在含有PVP(polyvinylpyrrolidone,16g/L)的预培养基上2-3d可提高转化频率.优化后的茶树基因枪转化体系,即制弹程序:60 mg/1ml钨粉悬浮液10 μl中加入1.6 μl质粒DNA(1 μg/μl),再分别加入0.1 mol/L的亚精胺4 μl,2.5 mol/L 的CaCl2 15 μl,最后定容至48 μl;每次轰击上样量为8-10 μl.基因枪转化后抗性筛选2个月,抗性愈伤组织存活率为5.0%～12.1%.

用高效的基因枪转化系统将抗虫抗病基因导入水稻

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织，经１～３次继代培养后，形成分散颗粒状的胚性愈伤组织，可作为基因枪法转化的靶材料。以ｈｐｔ基因或ｂａｒ基因作为筛选的标志基因，将抗虫或抗病基因共转化至水稻中，在含３０～５０ｍｇ／Ｌ潮霉素或２～４ｍｇ／ＬＢａｓｔａ的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养后得到转化植株。粳稻台北３０９的转化频率通常超过２０％，最高达到４７６％。籼稻品种的转化频率一般在４％以上，最高为２５５％。分子检测结果表明，抗虫、抗病基因已整合到转基因水稻基因组中，与标志基因的共转化率为５２５％～１００％。