α-IFN质粒DNA-脂质体制剂的制备及其在皮肤中表达的研究

目的研制α干扰素(αIFN)质粒DNA脂质体制剂,为临床提供一种经病灶部位透皮给药后转基因表达抗乳头瘤病毒(HPV)的新制剂。方法利用基因克隆技术和脂质体制备技术,得到在生物体细胞内表达αIFN的表达载体,含有质粒DNA的脂质体制剂;利用ELISA方法测定在皮肤细胞层中αIFN的表达水平。结果连续3天经皮给药脂质体制剂后24hpcIFN的表达水平最高;最后一次给药后连续5天αIFN的表达水平高于对照组(P<0.005);没有检测到用药组和对照组动物血清中含有αIFN。

用于基因治疗的APRIL-siRNA/类脂质体复合物短期实验

目的检测APRIL-siRNA/类脂质体复合物的亚急性毒性,以期为APRIL-siRNA/类脂质体复合物这种新基因治疗药物今后合理应用于临床提供依据。方法 40只ICR小鼠,随机分为4组。试验组设低、中、高3个不同剂量组,分别为APRIL-siRNA/类脂质体复合物125、250和500 mg/kg·bw,和1个对照组(生理盐水)。按0.1 ml/10 g·bw小鼠每天静脉注射(iv)1次,连续14 d。分别于染毒前、染毒后第1、3、5、7、9、11和14天定期称重小鼠体重和食用饲料重量。小鼠于染毒后第14天,iv给予3%戊巴比妥钠麻醉,心脏取血,检测血液学指标和血液生化学指标;迅速取出主要脏器,进行称重并做病理组织学检查。结果各组APRIL-siRNA/类脂质体复合物试验组体重变化、进食量、脏器系数与病例切片结果与正常对照组相比,除了试验组脾脏重量与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其余均无统计学意义(P>0.05)。结论在本实验剂量范围内,APRIL-siRNA/类脂质体复合物对小鼠亚急性毒性试验无明显毒性反应。

离子交换高效液相色谱法分析质粒pUDKH

采用阴离子交换高效液相色谱法监测重组质粒pUDKH的生产过程和该质粒产物中超螺旋pUDKH的比例。所用的色谱条件为:色谱柱TSKgelDNA NPR(4 6mmi d ×75mm);流动相体系由20mmol/LTris HCl(pH8 8)和1mol/LNaCl组成,梯度洗脱方式。分析结果表明:质粒产物中超螺旋pUDKH含量达95%(质量分数)以上时,检测不到残留的核糖核酸(RNA)。高效液相色谱法检测质粒pUDKH产物及其生产过程的灵敏度高、试样用量少,分辨率高。