内部核糖体进入位点控制hytk基因和绿色荧光蛋白的表达

构建一种带有绿色荧光蛋白基因（ ｇｆｐ）和 ｈｙｔｋ ｃＤＮＡ（潮霉素磷酸转移酶和 ＨＳＶ－ｔｋ的融合基因）的 新型真核表达载体，用于简便、快速地了解自杀基因在恶性肿瘤中的转染效率。利用脑炎心肌炎病毒 （ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ， ＥＭＣＶ）的内部核糖体进入位点（ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ， ＩＲＥＳ），将 ｇｆｐ 的ｃＤＮＡ与ｈｙｔｋ真核表达载体重组，构建获得含ｇｆｐ和ｈｙｔｋ基因的重组质粒：Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导下分别转染 ＣＯＳ－７细胞及人膀胱癌细胞株ＥＪ，并检测其表达情况。结果示该载体在瞬时表达及稳定表达时均可获得ｈｙｔｋ 及 ｇｆｐ的良好表达。说明含 ｇｆｐ和 ｈｙｔｋ基因双顺反子真核表达载体的构建成功，为临床应用自杀基因治疗膀 胱恶性肿瘤提供了新的治疗工具及随访检测手段。