ROS对不同基因型小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化的影响

目的 NADPH氧化酶(Nox)来源的活性氧(reactive oxygen species,ROS)在巨噬细胞泡沫化过程中发挥重要作用,然而Nox在动脉粥样硬化(As)发生发展中的作用尚存在争议。研究表明,氧化应激可通过调节核转录因子及胆固醇内流和外流相关受体影响巨噬细胞泡沫化进程,影响As的发生发展。本实验拟探讨Nox来源的ROS对不同基因型小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化的影响及其作用机制。方法同过ox-LDL诱导apoE-/-和WT小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化,并用Nox抑制剂二亚苯基碘(diphe-nyleneiodonium chloride,DPI)抑制ROS的产生,借助形态学、实时定量RT-PCR和免疫细胞化学等手段在细胞水平和分子水平检测巨噬细胞泡沫化不同阶段的变化特征。结果 ox-LDL处理24 h,可诱导两种小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化,且随着时间延长,泡沫化程度逐渐加重。ApoE-/-小鼠Nox的活化对小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化较WT小鼠明显。在两种小鼠巨噬细胞中,Nox活性均可明显被DPI抑制,且DPI可明显减少ox-LDL诱导小鼠腹腔巨噬细胞O2-和总ROS的产生(P<0.05)。ox-LDL诱导48 h,在两基因型之间,O2-和总ROS的变化无明显差异(P>0.05)。在apoE-/-小鼠中,24 h时,ox-LDL+DPI组与ox-LDL组相比,PPARα、ABCA1和SR-BI的mRNA水平显著上调(P<0.05),Nox2、PPARγ的mRNA水平下调,而p47phox、LXRα、NF-κB、CD36和SR-A mRNA水平差异无显著性(P>0.05)。在WT小鼠腹腔巨噬细胞中,与ox-LDL处理组相比,6 h时,DPI处理组显著下调Nox2、PPARα、LXRα、CD36和SR-A的mRNA水平(P<0.05),显著上调PPARγ、NF-κB和SR-BI的mRNA水平(P<0.05),ABCA1、p47phox mRNA水平变化差异无显著性(P>0.05);24 h时,ox-LDL+DPI处理组与ox-LDL处理组相比,p47phox、PPARα、PPARγ、LXRα、NF-κB、CD36、SR-A、ABCA1和SR-BI mRNA水平均被显著上调(P<0.05),Nox2mRNA水平无显著变化(P>0.05)。在apoE-/-和WT小鼠腹腔巨噬细胞中,24 h时,ox-LDL可通过ROS激活NF-κB,且DPI处理组NF-κB活性明显降低(P<0.05)。24 h时,ABCA1和PPARγ蛋白表达无明显差异(P>0.05)。结论 Nox促进了小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化进程,且其对apoE-/-的影响明显大于WT小鼠。在此过程中,O2-等活性氧参与调节巨噬细胞泡沫化相关基因mRNA和蛋白水平,并可通过调节NF-κB和PPAR等关键因子来影响巨噬细胞的相应功能。

泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备

目的探讨制备泡沫细胞相关基因4多克隆抗体的方法。方法将从人胎肝文库经聚合酶链反应扩增获得的泡沫细胞相关基因4基因全长cDNA序列,通过生物信息学分析,预测泡沫细胞相关基因4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对,并根据蛋白质的亲疏水性、二级结构、偶联难度及实验难度等,确定泡沫细胞相关基因4抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,采用固相多肽合成法合成该抗原片段,偶联后经过基础免疫,6次加强免疫,经追踪检测,于第四次免疫后10～14天颈动脉放血,分离血清,冷冻抽干,-20℃保存而制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体。结果用固相多肽合成法成功制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体,该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为1∶16000,Westernblot检测可见40kDa处有目的带,用免疫组织化学方法从HepG2细胞中检测到泡沫细胞相关基因4蛋白表达,证实该抗体具有较好的反应性和特异性。结论固相多肽合成法省时、省力、制备的抗体效价高;泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备,为进一步研究泡沫细胞相关基因4蛋白在动脉粥样硬化中的功能作用奠定了基础。

论日本式主银行体制

在日本的“护送船团”体系中,主银行系统作为日本式成长的引擎,采取低利率运营和质量保证体系等手段有效地促进了日本产业的发展,保证了日本在自然资源贫乏、储蓄资源有限的情况下对欧美的赶超,但由于本身存在的制度偏颇、缺乏战略认识和战略转变,也促成了资本的过度流动及经济的泡沫化。面对日本十年的经济停滞和大量的不良资产,我们不得不对日本的主银行体制进行反思。