中国人HCV5’非编码区部分基因片断的克隆及序列分析

目的:扩增并测定陕西地区丙型肝炎病毒(HCV) 的基因组5’非编码区(NCR)的序列.方法:应用RT-PCR法和基因重组技术将从陕西省NANB病毒性肝炎患者血清中扩增出的5’NCR长262bp的片段,用全自动序列分析仪测序.结果:所得序列与HCV-J6,HCV-J8,HCV-Hebei, HCV-1及HCV-J比较,其同源性分别为99.2%,96.5%,94.6%,94.6%及94.3%,与HCV-J6的同源性最高.结论: 所分离HCV与HCV-J6同属Ⅲ型,

用于植物分子系统学研究的基因片断

本文简要介绍了用于分子系统学研究的各种基因片断及其研究进展。

一种杂交蛋白可按需裁编基因片断有望用来改良植物、动物甚至人类的染色体组

据美国科学促进会8月30日报道．美国爱荷华州立大学研究人员研发出一种杂交蛋白质．其能使活细胞中双链DNA（脱氧核糖核酸）在需要的位置断裂，并可接人需要的功能基因片段。这一成果有望带来更好的个性化基因疗法。遗传发育与细胞生物学副教授杨冰（音译）及其团队把2种不同细菌的蛋白质拼接在一起，开发出这种杂交蛋白质。

恐龙与恐龙蛋化石基因片断

从河南省西峡晚白垩世的一枚奇特恐龙蛋化石中提取ＤＮＡ，经过３２Ｐ同位素标记和电泳分析。发现蛋腔内絮状物样品中有ＤＮＡ片断存在，其分子量在几十至１０００ｂＰ之间，且大多在４００ｂＰ以下，用１８ＳｒＤＮＡ特异引物和恐龙蛋ＤＮＡ片断为模板．进行ＰＣＲ扩增。克隆ＰＣＲ产物并进行序列分析和同源性比较，发现该序列与鸟类、两栖类、爬行类及人类等１８ＳｒＤＮＡ有７．５％～８１％的同源性，与已知原核生物没有明显同源性，但与１．３亿年的古象鼻虫基因片断有８０％的同源性。

用一个简单快速的RT-PCR技术筛选白细胞介素-6作用相关基因

为了研究白细胞介素 6 (IL 6 )作用相关基因以及一些可能受IL 6调控的基因 ,利用一个简单快速的以PCR为基础的方案 ,检测了IL 6处理和未处理的Sko0 0 7细胞中基因表达的差异 ,克隆并鉴定了差异表达基因的cDNA片段 .首先用 6 mer寡核苷酸引物进行反转录从而最大限度地将mRNA编码区序列生成cDNA ;然后用 2或 3个较长的随机引物进行PCR扩增 ,并以不同引物组合重复PCR增扩 ;扩增产物在 2 %琼脂糖凝胶上电泳分离 ,回收差异片段并直接用于克隆、测序及进一步分析 .在此研究中 ,获得了 3个表达序列标签 (EST) ,其中一个为新的基因片段 ,反向RNA杂交有力证实了它们与IL 6作用的相关性 .进一步的生物信息学分析表明 。

电化学DNA生物传感器定量检测根癌农杆菌终止子基因片段

通过自组装法及共价法固定单链脱氧核糖核酸(ssDNA),制备了电化学DNA生物传感器。将巯基丙酸(MPA)自组装于金电极表面形成单分子膜,再利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的活化作用将ssDNA探针序列固定于金电极表面。将ssDNA修饰的电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的根癌农杆菌终止子(NOS)基因片段进行杂交,在[Fe(CN)6]3-/4-溶液中进行循环伏安和电化学阻抗谱扫描,表征ssDNA固定及杂交过程。优化了ssDNA固定条件。待测溶液中DNA浓度在1.0×10-7～1.0×10-10mol/L范围时,其浓度的对数值和ssDNA/Au电极与dsDNA/Au电极峰电流差值的变化值呈线性相关关系,相关系数为0.9822,检出限为8.1×10-11mol/L。

埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因片段的克隆测序

目的 :探讨我国登革热的重要媒介蚊种埃及伊蚊唾液中的抗凝血因子Xa基因。方法 :用兼并引物PCR方法从我国的埃及伊蚊基因组DNA扩增抗凝血因子Xa基因片段 ,克隆入测序T载体进行测序。结果 :扩增出抗凝血因子Xa基因片段长度约 30 0bp ,测序后发现与报道的埃及伊蚊的cDNA基因相应序列多了一段 6 3bp内含子 ,并有几个碱基和氨基酸序列变化。结论 :我国海南岛的埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因有一定差异 ,可能对应的是一个新的基因型。

纯化探针降低基因芯片杂交结果的背景

研究探针的纯化对基因芯片杂交结果的影响。将乙醇沉淀的探针和用DNA纯化试剂盒纯化的探针分别与基因芯片杂交 ,在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测。结果表明 ,纯化的探针与基因芯片杂交结果的背景低 ,而未纯化的探针背景强 ,阳性信号界限比较模糊。运用基因芯片进行基因表达谱研究 ,要求杂交检测的结果必须低背景。

汉坦病毒HTN261株S基因片段的核苷酸序列测定及分析

黑龙江省是肾综合征出血热 (HFRS)的重疫区。近年来HFRS年的发病人数曾超过万人。流行病学和血清学研究表明黑龙江省HFRS疫区主要是姬鼠型 ,但目前尚缺乏病毒的分子生物学资料。我们对从疫区捕获的宿主动物 黑线姬鼠肺中分离的汉坦病毒HTN2 6 1株的S基因片段的全基因序列进行了测定和初步分析。结果如下 ,HTN2 6 1株的S基因片段的全序列长为 16 97nt。只有一个主要的编码N蛋白的ORF ,起始位置为第 37nt,终止于132 6nt,编码的蛋白长为 42 9aa。没有发现存在ORF2。HTN2 6 1株的S基因片段核苷酸序列与HTN型中的病毒株的同源性很高 ,而与汉坦病毒其他型的同源性较差。从种系发生树分析来看 ,HTN2 6 1株归结于汉坦病毒的HTN型。在HTN型之内 ,HTN2 6 1株和HTN76 118株在一个分枝内。就其核苷酸和蛋白的同源性来说 ,HTN2 6 1株和HTN76 118株的同源性分别是 89% (全S基因 )和 98% (蛋白 )。而与中国境内发现的其他汉坦病毒株Z10 ,HU ,Chen4,NC16 7等基因和蛋白的同源性相对较差。汉坦病毒除具有其宿主的依赖性外 ,还具有其地理的簇集性。HTN2 6 1株和HTN76 118株之间S基因和N蛋白序列的变异性的差异分别为 11%和 2 % ,表明HTN2 6 1株和HTN76 118株还有不同 ,可能是不同的亚型。不过 。

Ⅰ型单纯疱疹病毒UL30基因片段在口腔鳞状细胞癌中的分布

应用与单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶⅠ）ＵＬ３０基因片段杂交的寡核苷酸探针，对４例未转移浸润癌、４例转移浸润癌及其转移淋巴结组织进行原位杂交研究。结果发现：（１）有４例未转移浸润癌、３例转移浸润癌及其转移淋巴结组织杂交分别阳性，但阳性率无显著性差异；（２）ＵＬ３０基因片段主要位于肿瘤上皮细胞胞浆；（３）ＵＬ３０基因片段在肿瘤浸润和转移的过程持续存留在肿瘤上皮细胞中；（４）存在ＨＳＶⅠ基因片段的组织均无ＨＳＶⅠ增殖感染的形态学特征。提示ＨＳＶⅠ可能以特殊感染方式在口腔鳞状细胞癌的发生发展中起作用。

转基因食品安全的法律规制

相对美国和欧盟,中国在转基因作物和相关食品安全方面的研发、商业化和法律规制等方面处在滞后状态转基因技术,又称基因工程技术、基因改良技术、或重组DNA技术,是一种改变生物尤其是农作物的基因片断,或将一种生物的基因片断植入,从而改变受体生物的基因构成,使其具有消费者和科研工作者所希望特征的现代生物技术。转基因技术可以使农作物具有抗恶劣自然条件(如旱、霜、酷热和涝)、抗病虫害、

牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA的基因克隆和序列分析

目的:扩增牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)的基因片断并作鉴定。方法:利用PCR方法,克隆牙龈卟啉菌rgpAcd基因,并将基因片断插入pMD18-TVector,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定。结果:克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列一致。结论:成功克隆了牙龈卟啉菌rgpAcd的基因,为体外表达其活性蛋白奠定了基础。

基因芯片技术在肾移植临床中的应用

基因芯片是一种高通量的检测手段,能同时研究数万条基因的表达水平,以其集成化、微型化、自动化的特点,越来越多的应用于医学的各个领域。本文主要介绍基因芯片在肾移植中的应用现况,并对其意义及展望作一综述。

鹅细小病毒vp基因片段的原核表达及抗血清的制备

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置。将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa。将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清。Westernblotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性。结合前期工作进展对GPVVP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位。

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

采用PCR技术,从大肠杆菌K99中扩增出0.54kb的K99菌毛抗原基因,然后将其克隆到pUCm-T载体上,用BglⅡ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,通过T4连接酶与同样经BamHⅠ和SalⅠ双酶切合成的耐热肠毒素STⅠ核苷酸序列连接,通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析,证明插入的K99-STⅠ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。