猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

为研制新型猪囊尾蚴疫苗,将猪带绦虫六钩蚴阶段编码TSOL18的基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、免疫荧光试验等方法检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达TSOL18目的蛋白,表达蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病基因疫苗的研究奠定了良好基础。

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。

犬瘟热病毒基因疫苗表达载体构建及在真核细胞中的表达

利用pCI载体构建了犬瘟热病毒基因疫苗表达载体质粒pCIF和pCIN,通过脂质体介导法将这两种真核表达质粒分别转染MDCK细胞,用RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白是否表达。结果表明,真核表达质粒pCIF和pCIN已被成功构建,这两种重组质粒转染MDCK细胞72h后就可检测到目的基因的转录和两种目的蛋白的表达,表达的蛋白均能与抗CDV抗体发生特异性的抗原抗体反应。这为研究预防犬瘟热的基因疫苗奠定了良好的基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒三种不同基因活载体疫苗的免疫性研究

用3株构建好的分别表达猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porci ne reproduct i ve andr espi r at or y syndr ome vi r us,PRRSV)GP5蛋白,M蛋白和GP5-M融合蛋白的重组鸡痘病毒接种BALB/c小鼠进行免疫学实验,对其诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应的潜力进行了评价。结果表明,表达GP5-M融合蛋白的重组鸡痘病毒相对于其他各组能够刺激免疫鼠产生高水平的特异性中和抗体和ELI SA抗体;显著促进IFN-γ的分泌和特异性T淋巴细胞增殖,。提示表达GP5-M融合蛋白的重组鸡痘病毒可显著增强小鼠的体液免疫和细胞免疫,这为防治PRRSV感染的新型疫苗研究提供了新的思路。

减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因

用长距离RT PCR扩增了传染性法氏囊病病毒 (infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)ZJ2 0 0 0株多聚蛋白基因 ,定向克隆入真核表达载体pCI,电转化dam- 和phoP- 双突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株 ,并直接转染Vero细胞。RT PCR和间接免疫荧光试验可从Vero细胞中检测到阳性信号 ,SDS PAGE和West blotting均可检测到 4 1kD的蛋白条带。结果表明减毒沙门氏菌可将外源基因导入Vero细胞 ,并进行转录和表达 ,具有免疫反应性 ,为进一步研制减毒沙门氏菌为载体的IBDV口服DNA疫苗打下基础。

生长抑素基因工程活载体疫苗对肉兔生长性能的影响

选择30日龄左右体重相近、健康的新西兰肉兔36只,分为2组(试验组和对照组),每组18只肉兔(公母相等)。试验组注射激生1号(按产品标准剂量),对照组注射等量生理盐水。连续饲养35d。试验结果表明:激生1号可以使新西兰肉兔增重提高23.74%,采食量提高9.36%,发病率和料肉比明显降低。

应用于兽用疫苗研发的病毒载体研究进展

对应用于兽用疫苗研发的病毒载体,包括痘病毒载体、疱疹病毒载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、副粘病毒载体、弹状病毒载体、甲病毒载体、冠状病毒载体、反转录病毒载体、黄病毒载体等DNA和RNA病毒载体的研究进展进行了综述,以期为我国基因工程活载体疫苗研发工作提供参考。

动物疱疹病毒基因工程疫苗的研究进展

疱疹病毒是一类具有相同形态和较大囊膜的双链DNA病毒,它不仅能引起原发性感染,还能引起潜伏性感染和复发性感染。此外,某些疱疹病毒是哺乳动物和禽类等动物肿瘤的病原因子,因此防制此病毒病不容忽视。疫苗的免疫接种是预防、控制该病毒病的主要手段。文章在简单介绍动物疱疹病毒常规疫苗的基础上对动物疱疹病毒基因工程疫苗进行了综述,并对动物疱疹病毒基因工程疫苗今后的发展方向进行了总结,以期为动物疱疹病毒基因工程疫苗的深入研究提供借鉴。

马立克氏病常规疫苗与基因工程疫苗

马立克氏病(MD),是由马立克氏病毒引起的淋巴增生性疾病,病毒经空气传播,传染力强,被感染鸡产生肿瘤和死亡,造成巨大经济损失.MD是危害养禽业最为严重的传染病之一.目前,该病的控制主要依靠疫苗免疫.

激生Ⅰ号疫苗免疫育肥猪低营养水平饲养增重试验

将大二F1 商品猪 81头均分为 3组 ,第 1组 (剂量 0 47× 1 0 7PFU/头 )和第 2组 (剂量 1 42× 1 0 7PFU/头 )进行激生Ⅰ号疫苗免疫 ,第 3组不接种为对照。在低营养水平 (粗蛋白 1 3 43 % ,消化能 1 2 0 8MJ/kg)情况下饲养 3个月 ,结果第 1组与对照组无显著差异 ;第 2组平均体重比对照组增加 3 1 2kg ,提高 7 3 % (P <0 0 1 )。表明激生Ⅰ号在低营养水平情况下 ,能显著提高商品猪的生长速度。剂量以略大于 1 0

SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP重组沙门菌的构建及在B16细胞中的表达

目的构建能够稳定表达结核杆菌热休克蛋白70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore scent protein,EGFP)双基因的鼠减毒伤寒沙门菌真核共表达载体,探讨其在小鼠黑色素瘤B16肿瘤细胞中的表达。方法将重组质粒PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP电穿孔转入减毒沙门氏菌SL7207中,酶切鉴定,并对构建的重组减毒沙门氏菌体外连续传代20代后再酶切鉴定,对其稳定性进行观察;重组菌体外感染B16,荧光显微镜下观察B16细胞荧光表达及蛋白印迹法(Western blot)检测重组菌在B16细胞内mtHSP70蛋白的表达。结果PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP成功导入减毒沙门氏菌SL7207中;该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代;重组菌体外感染B16约36h后,B16细胞胞体变圆并高效表达强荧光,重组菌在B16细胞内表达mtHSP70蛋白。结论成功构建能在真核细胞中稳定表达mtHSP70与EGFP双基因的重组减毒沙门氏菌株,为恶性黑色素瘤靶向基因免疫治疗的后续研究奠定了基础。

禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达

为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA+NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。

鸡毒支原体免疫研究进展

鸡群单独感染鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)时,死亡率很低,但MG感染常并发细菌感染和病毒感染,致使病情加重和病程延长。为了避免更加严重的经济损失,采用疫苗进行免疫接种是主要的预防措施。主要对鸡毒支原体灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程活载体疫苗的研究进展作一介绍,以期为相关研究提供参考。