短小芽孢杆菌葡聚糖内切酶基因的克隆及序列测定

从台湾海峡潮间带的红树林土壤中分离到一株产纤维素酶的短小芽孢杆菌S 2 7,该菌只产生葡聚糖内切酶。对该酶的研究显示其作用最适温度为 55℃ ,最适 pH为 5～ 7,在pH9的条件下仍具有 79 0 %的活力。用pBluescriptⅡ为载体 ,E .coliDH1 0B为受体 ,克隆到该酶的基因 ,并对其进行测序。测序结果显示其全长为 1 980bp ,推测其含 660个氨基酸。比较GenBank中的已知葡聚糖内切酶 ,发现该酶的氨基酸序列与嗜纤维杆菌 (Clostridiumcel lulovorans)的EngC及Bacillussp .KSM 52 2的EG Ⅳ同源性极高。

大熊猫脑源性神经营养因子(BDNF)基因的克隆与表达

大熊猫脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因的克隆与表达林峰杨玉华张义正（四川联合大学生物工程系，成都６１００６４）陈红卫费立松宋云芳何光昕张安居（四川省成都动物园，成都６１００８１）大熊猫（Ａｌｉｕｒｏｐｏｄａｍｅｌａｎｏｌｅｕｃａ）是我国特有的珍稀濒...

一个编码玉米转译起始因子新基因的克隆

一个编码玉米转译起始因子新基因的克隆胡建广袁自强赵相山钱晓茵程宁辉杨金水（复旦大学遗传学研究所，上海２００４３３）杂交玉米在生长势、抗逆性与产量性状等方面表现明显的超亲优势，这涉及到杂种一代的亲本基因表达方式发生改变。我们以玉米杂种一代增强表达的基因...

泛素—核糖体蛋白S27a基因的克隆、测序及其原核GST融合表达和纯化

目的:克隆泛素—核糖体蛋白S27a基因并在大肠杆菌细胞内高效表达,并纯化该蛋白。方法:从HL-60细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得泛素/核糖体蛋白S27a的编码区cDNA,将HindⅢ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样双酶切的GST融合表达载体pGEXGST构建为融合表达质粒pGEXGST-S27a,转化感受态的大肠杆菌JM109实现质粒的扩增与纯化,经DNA测序确证后再转化感受态表达菌BL21,表达并纯化出融合蛋白。结果:(1)PCR扩增获得长约560bp的泛素—核糖体蛋白S27a基因片段。(2)SDS-PAGE证明,泛素—核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白的分子量为43kDa。(3)通过过柱法纯化出泛素—核糖体蛋白S27a-GST融合蛋白。结论:成功克隆出泛素-核糖体蛋白S27a的基因,并在表达菌BL21中可见GST融合表达,并纯化出该融合蛋白,为进一步研究其功能获得了候选蛋白分子。

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a(+)中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。 用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

绿脓杆菌外毒素A(PEA)是绿脓杆菌感染的最主要致病因子,它由3个区域共613个氨基酸组成,分子质量66 ku。在体内,毒素先由Ⅰ区(受体结合亚单位)识别细胞表面受体并与之结合,而后,通过Ⅱ区(跨膜亚单位)将具有ADP-核糖基化活性的毒性单位导入胞浆,使Ⅲ区(毒力亚单位)发挥毒力作用,催化细胞内的延长因子2(EF-2)发生ADP-核糖基化反应,使EF-2灭活,抑制蛋白合成而杀灭细胞。在这种结合、入胞。

血小板生成素功能区段基因的克隆与表达

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是由巨核细胞产生的一种细胞因子,早期认为它在血小板生成晚期发挥作用。1994年TPOcDNA克隆成功,从而使得对血小板生成素的研究更加深入。TPO cDNA全长1774 bp,其中编码区为1059 bp,编码353个氨基酸,从其结构上看,它可以分为N端区和C端区两部分,其N端区与EPO同源性较高,称为EPO样结构区(EPO-like domain),而且仅此结构区即具有完整TPO分子的功能。

肾综合征出血热病毒基因的检测、分型和衣壳蛋白基因的克隆及表达

根据我国流行的2型肾综合征出血热病毒（HFRSV）代表毒株汉滩型（HTNV）76-118株和汉城型（SEOV）R22株M节段的核苷酸序列,设计2型共同引物。

血管抑制素基因的克隆及表达

多年来,肿瘤的转移一直是肿瘤治疗的极大障碍,而血管抑制素(angiostatin)的发现很可能对肿瘤及其转移的治疗有重要意义。血管抑制素是从荷Luwis肿瘤小鼠血、尿中分离到的一种同源于纤维蛋白酶原内片段的多肽,在体外可抑制血管内皮细胞生长,在体内可显著抑制肿瘤组织转移及继发肿瘤的生长。

人亲环素A基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用于防治器官移植排斥反应的药物CsA发挥作用必须由体内受体蛋白亲环素(CyP)来介导。CyP是一个功能相关的蛋白家族,具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(PPIase)活性,能催化细胞内蛋白质的折叠、装配和运输。CyP自身抗体与某些自身免疫病也有关系。亲环素A(CyPA)是免疫抑制剂CsA在体内的主要受体蛋白。本研究对CyPA基因进行了克隆和序列测定,并构建了表达载体。

抗人Cl-INH McAb可变区基因的克隆及序列结构分析

近年来迅猛发展的基因工程抗体研究,已成为抗体应用研究的核心。构建重组抗体的前提是从杂交瘤细胞、免疫脾细胞或外周血淋巴细胞中分离免疫球蛋白(Ig)的重链和轻链可变区(VL和VH)基因。

人转化生长因子β1成熟肽基因的克隆及序列测定

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了人TGF β1基因的克隆及其在真核细胞中的表达后,准备进行其在大肠杆菌中的高效表达研究。

奈瑟氏淋球菌IgA蛋白酶基因的克隆

IgA蛋白酶(IgA protease)可由多种病原微生物产生并分泌,例如肺炎双球菌(Haemophilus),奈瑟氏菌(Neisseria)等。其中奈瑟氏菌的IgA蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶类,其切割底物的核心序列为—ProPro/XxxPro,其中Xxx可以是Thr、Ala和Ser三个氨基酸中任何一种。IgA蛋白酶的切割具有特异、高效的特点,另一突出优点是它可用重组大肠杆菌进行表达制备。

霍乱弧菌O139脂多糖基因的克隆表达

霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以串联体的形式集中在一起,这为我们的克隆表达提供了便利条件。 本研究首先用粘粒pCOS5构建了O139霍乱弧菌基因组粘粒文库。

O139霍乱弧菌O-抗原基因的克隆及表达

霍乱弧菌脂多糖已经被公认为是一种保护性抗原。它是由三部分组成:O-抗原、核心多糖和磷脂A。其O-抗原具有特异的免疫原性及抗原性,霍乱弧菌的抗血清与脂多糖的抗原抗体反应是针对其O-抗原部分。因此,克隆表达O-抗原基因更便于我们进行基因的操作和构建多价疫苗,它比克隆脂多糖基因更具有实际应用价值。 本研究在建立O139霍乱弧菌质粒基因组文库的基础上。

马氏珠母贝珍珠层形成相关基因的克隆与功能研究

作为世界上最重要的南洋珍珠生产基地,印度尼西亚(以下简称印尼)的产量占世界产量的50%以上。南洋马氏珠母贝珍珠由于光泽度好、晶莹剔透以及质感细腻等闻名于世。本文首先对马氏珠母贝进行了简单的介绍,然后分析了贝壳机制蛋白、珍珠层以及珍珠囊的研究现状,并对马氏珠母贝的BMP7基因与TIMP基因的克隆和功能研究做了简单的概述。

X连锁淋巴组织增生综合征基因的克隆

Epstein-Barr病毒(EBV)是目前已知的最强的转化病毒,它能使B淋巴细胞转化成免疫母细胞,一种含有病毒染色体并连续分裂的抗体产生细胞。至少有90％的人在其一生中可与EBV处于平衡状态,因为EBV感染细胞的增殖处于免疫系统T细胞的控制之下,疾病仅仅发生于生物学偶然,典型的例子是X连锁淋巴组织增生综合征(XLP)。

枯草芽孢杆菌中性蛋白酶基因的克隆与表达

本研究对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的基因进行克隆,并在大肠杆菌中诱导表达。从枯草芽孢杆菌基因组克隆到编码中性蛋白酶的全长基因,构建大肠杆菌原核表达载体pET30b,转化大肠杆菌BL21得到重组工程菌。通过菌落PCR和酶切筛选验证重组体。在25℃,110 r/min条件下,用IPTG诱导重组蛋白表达。表达蛋白用SDS-PAGE验证,并对酶活力进行测定。测序结果表明克隆序列与NCBI上的登录的序列同源性高达99%。SDS-PAGE结果表明诱导出的蛋白相对分子质量56.6 kD,酶活力达到39 U/mL。证明成功克隆得到枯草芽孢杆菌中性蛋白酶基因,并在大肠杆菌中得到高效表达。