甾体激素对免疫细胞快速作用的非基因组机制

神经内分泌系统和免疫系统存在双向的联系 ,构成复杂的信息网络。甾体激素对免疫细胞的调节作用是上述网络中的重要一环。越来越多的证据表明 ,甾体激素对免疫细胞亦广泛存在着非基因组机制介导的快速作用 。

糖皮质激素对神经元作用的非基因组机制:膜受体假说

甾体（类固醇）激素包括糖皮质激素（GC）、盐皮质激素、雌激素、雄激素、1,25（OH）2维生素D3等。它们是体内重要的调节分子,对于机体的生长、发育、分化及各种缓慢代谢变化十分重要。60年代后发现了甾体激素（S）受体（SR）,并发现S与SR结合后转位到细胞核内与DNA结合。随后发现SR与DNA中的特殊片段HRE结合。

糖皮质激素对神经元快速作用的非基因组机制——膜受体假说

甾体激素可自由弥散通过细胞膜,进入细胞后与细胞核内(核)受体结合,从而改变基因的转录活动,改变新蛋白的合成,然后发动生物学效应。这一机制被称为基因组机制,这种作用一般缓慢而持久。但甾体激素对神经系统有快速效应,它很难用传统的基因组机制解释。根据实验结果提出:甾体激素之一的糖皮质激素(GC)可能还有另一种作用,即它通过神经元质膜上的膜受体起快速的作用,相应的机制即非基因组机制。一系列实验表明,GC可以通过非基因组机制快速影响神经元功能的各个方面:降低兴奋性(膜电位超极化)、抑制分泌和促进重摄取;这种快速、非基因组作用毋须基因组的参与,很可能是通过存在于神经元质膜上的膜受体而实现的。

皮质酮对高钾诱导PC12细胞内钙升高的非基因组调节作用

目的 :分析皮质酮快速抑制高钾诱导PC12细胞内钙升高的机制。方法 :使用荧光影像系统 ,实时检测细胞内钙变化。结果 :①在预处理PC12细胞 5min后 ,皮质酮可呈量 -效关系抑制高钾诱导的PC12细胞内钙升高。②牛血清白蛋白耦联的皮质酮 (B BSA)可模拟皮质酮快速抑制高钾诱导PC12细胞内钙升高的作用 ,并呈现量 -效关系。③糖皮质激素的细胞内受体拮抗剂RU38486对皮质酮快速抑制效应无明显拮抗作用。④蛋白合成抑制剂放线菌酮预处理细胞 3h后 ,皮质酮对高钾诱导PC12内钙升高仍有较强抑制作用。结论 :①皮质酮的作用点位于细胞膜上。②皮质酮的快速作用不直接依赖细胞内蛋白合成和不依赖细胞内糖皮质激素受体。

甾体激素对大鼠L_(929)细胞摄取甘氨酸的非基因组作用

目的 研究甾体激素对成纤维细胞非基因组作用。方法 将大鼠成纤维细胞株L92 9和标记甘氨酸孵育一定时间 ,同时加入甾体激素和 /或其它试剂 ,应用液体闪烁技术检测细胞摄取标记甘氨酸量的变化。结果 甾体激素快速抑制L92 9细胞摄取甘氨酸 ,不同的甾体激素作用强度有差异 ,皮质酮和醛固酮的作用均表现有浓度依赖性 ,牛血清白蛋白偶联皮质酮作用和硫酸皮质酮作用没有差别 ,糖皮质激素胞浆内受体阻断剂能部分阻断皮质酮作用 ,细胞外液Ca2 +能影响皮质酮作用。结论 甾体激素对L92 9细胞摄取甘氨酸的快速抑制为非基因组效应 ,其作用可能是通过细胞膜受体介导的 ,细胞膜受体在结构上可能和胞浆受体有某种相似性。

糖皮质激素对原代培养的海马细胞中p44/42的快速非基因组激活作用

用Westernblot方法研究了皮质酮 (B)对原代培养海马细胞 15min刺激下 p4 4/ 4 2的快速激活作用 .主要结果有 (1)在 5～ 15min的时间内 ,皮质酮可以激活 p4 4/ 4 2 .当激活时间为 15min时 ,p4 4/ 4 2升得最高 ,30min后恢复到正常水平 ,呈钟形的瞬时激活特点 . (2 )B激活 p4 4/ 4 2的作用 ,不能被GR阻断剂RU384 86所阻断 .根据快速、GR受体阻断剂不能阻断两点 ,基本上可以认为 ,所观察到的p4 4/ 4 2的激活属于GC的快速非基因组作用 . (3)酪氨酸激酶阻断剂Genis tein不能阻断 ,而GDPβs可以阻断此作用 ,提示GC的这一效应不是通过TRK受体 ,而是通过G 蛋白耦联受体 (GPCR) . (4 )PKA的阻断剂H89不能阻断 ,而PKC阻断剂G 6 976及MEK (即MAPKK)阻断剂PD980 5 9能够阻断这一效应 ,所以B快速激活 p4 4/ 4 2的信号转导通路可能是GCGPCRPKCMEKp4 4/ 4 2 .

人类基因组计划的倡导者——杜尔贝科

癌症是严重威胁人类健康的重大疾病．目前对癌症机制的研究早已深入到分子水平．但中晚期癌症的治疗手段仍然有限，且远远无法达到人们的预期，因此对癌症的攻克仍然任重道远。进入21世纪，癌症的研究开始拓展到基因组层面，从而开拓了一个新的研究方向——癌症基因组学．而最早提出该想法的是意大利裔美国病毒学家、1975年诺贝尔生理学或医学奖获得者杜尔贝科（R．Dulbecco）。

糖皮质激素中枢作用机制的新进展

研究表明糖皮质激素在脑内具有广泛的作用 ,它能调节下丘脑 垂体 肾上腺轴的平衡 ,参与学习记忆过程、调节心血管活动和神经系统的发育、成熟和凋亡等。过高或过低浓度的糖皮质激素将对大脑产生不良影响。糖皮质激素在脑内的作用机制有经典的基因组机制和快速的非基因组机制。糖皮质激素作用的发挥除受到血浆糖皮质激素水平、糖皮质激素代谢酶和结合蛋白的调节外 ,还受靶细胞内 ,皮质激素受体类型的影响。

经MAPK信号转导通路介导的糖皮质激素的作用机制

糖皮质激素 (GC)通过膜受体快速激活细胞内信号传导通路的机制 ,主要涉及ERK ,JNK/SAPK和P38等MAPK家族的重要成员。GC在许多细胞中对ERK起抑制作用 ;在不同的细胞中 ,GC能激活JNK或抑制其活性 ,即具有一定的细胞特异性 ;GC还直接或间接地激活P38途径。GC激活MAPK介导的信号传导通路 ,产生一系列生物学效应 ,如抑制细胞的生长和繁殖 。

雌激素的神经保护机制

雌激素在多种生理活动中扮演很重要的角色,不仅维持生殖、骨稳态、免疫、心血管生理活动的正常运作,还具有神经系统保护作用。雌激素在中枢神经系统的神经保护作用大多通过与其核型受体结合发挥直接基因组作用,但近期也有很多研究揭示雌激素不仅可通过间接基因组机制发挥其神经系统保护作用,雌激素还可直接介导抗氧化作用。

皮质酮快速抑制PC12细胞乙酰胆碱诱发电流影响及机制探讨

目的和方法：本研究采用全细胞膜片箝技术，观察皮质酮（Ｂ）对ＰＣ１２细胞上乙酰胆碱诱发电流（ＩＡＣｈ）的快速作用并初步探讨其可能机制。结果：ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ是通过烟碱受体（ｎＡＣｈＲ）引起的。箝制电压为－８０ｍＶ时，ＡＣｈ（３０μｍｏｌ／Ｌ）诱发一内向电流；细胞外灌流同时给予ＡＣｈ和Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）时，Ｂ对ＩＡＣｈ的抑制作用较弱；用Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对细胞进行预处理，可提高Ｂ对ＩＡＣｈ峰值的抑制率，作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性；细胞外用ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（４×１０－５～４×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）或蛋白合成抑制剂放线菌酮（１０－４～１０－３ｍｏｌ／Ｌ）孵育细胞１～２ｈ阻断基因机制，但均不影响Ｂ对ＩＡＣｈ的快速抑制作用。结论：Ｂ对ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ有快速抑制作用，此作用可能是由非基因组机制介导的。

糖皮质激素抑制加压素释放的细胞膜机制

利用离休孵育脑薄片和放射免疫测定其释放的精氨酸加压素（ＡＶＰ）方法，探讨糖皮质激素（ＧＣ）在不能进入细胞内的情况下，对去肾上腺大鼠的下丘脑薄片释放ＡＶＰ的快速影响及其可能的细胞膜机制。结果如下：（１）下丘脑薄片能够稳定地释放ＡＶＰ（２ｈ），其释放量为１５．４２±１．２８ｐｇ／ｍｉｎ；（２）牛血清白蛋白耦联皮质酮（Ｂ－ＢＳＡ）对ＡＶＰ的释放具有快速的（２０ｍｉｎ）抑制性效应，在１０￣（－７）─１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ范围内呈剂量一效应关系；（３）ＧＣ细胞内受体拮抗剂ＲＵ４８６（１０￣（－４）─１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ）能部分地阻断Ｂ─ＢＳＡ的快速抑制效应；（４）孵育液中Ｃａ￣（２＋）程度升高，Ｂ─ＢＳＡ的快速抑制效应明显增强；反之，孵育液中无Ｃａ￣（２＋）则Ｂ－ＢＳＡ的快速抑制效应有所减弱。表明ＧＣ在未进入细胞内的情况下也可快速地抑制大鼠下丘脑薄片释放ＡＶＰ，因此没有通过传统的基因组机制，而是由非基因组机制介导的，其作用部位在细胞膜水平上，可能是影响Ｃａ￣（２＋）的跨细胞膜内流通量或／和影响有Ｃａ￣（２＋）参与的ＡＶＰ释放过程的结果。

蛋白质起始的DNA病毒复制机制

DNA聚合酶在DNA合成过程中需要的引物包括RNA引物、DNA自我引物和蛋白质引物3种类型。新DNA链(如冈崎片段)的复制多是在DNA模板上合成一段RNA引物,细小病毒利用其基因组末端的反向末端重复序列(ITRs)自我折叠成DNA引物,而一些DNA、RNA病毒及真菌质粒起始复制反应的引物则是蛋白质。以感染原核生物的噬菌体Phi29和真核DNA病毒腺病毒为例,从复制过程所涉及的蛋白质、对复制原点的识别、复制起始反应、新链的延伸、复制终止过程等方面详细阐述DNA病毒由蛋白质引发的复制机制,并对已商品化的Phi29 DNA聚合酶产品多重置换扩增及单细胞测序等的应用以及基于噬菌体Phi29蛋白质起始的最小复制系统体外扩增异源DNA等最新的应用研究作相关总结介绍。

雌激素心血管作用的研究进展

雌激素受体广泛分布于心血管系统 ,具有抗心律失常作用 ,抗动脉粥样硬化效应和舒血管效应 ,并可调控动脉压力感受器反射。

糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用

目的 :分析糖皮质激素对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺的快速抑制作用。方法 :采用荧光分光光度法测定邻苯二甲醛与组胺在碱性条件下生成的荧光物质 ,检测不同条件下大鼠腹腔肥大细胞分泌的组胺。 结果 :(1)用 10 - 7m ol/ L 皮质酮预处理细胞 7m in后 ,肥大细胞分泌组胺即受到抑制 (P<0 .0 5 ) ;(2 )牛血清白蛋白偶联的皮质酮 (B- BSA)可以模拟皮质酮的快速抑制作用 ;(3)糖皮质激素细胞内受体拮抗剂 RU384 86 对皮质酮的快速抑制作用无阻断效应 ;(4)蛋白质合成抑制剂放线菌酮预处理细胞 3h后 ,皮质酮仍可快速抑制肥大细胞分泌组胺。结论 :皮质酮对大鼠腹腔肥大细胞分泌组胺具有快速抑制作用 ,这一作用不直接依赖于细胞内蛋白质合成 ,也不依赖细胞内的糖皮质激素受体。此种快速抑制作用属非基因组机制。

糖皮质激素快速抑制气道平滑肌游离钙升高与磷脂酶C活性的关系

目的:本实验通过对平滑肌细胞行GCs快速预处理,拟证实糖皮质激素对平滑肌细胞内[Ca2+]i浓度升高有快速抑制作用,并初步探讨该现象的可能分子机制。方法:原代培养的大鼠平滑肌细胞,应用Fura-2/AM显微荧光检测技术,检测肌细胞内[Ca2+]i在受到激动剂刺激后的浓度变化;比较不同浓度地塞米松预处理后10min与对照组之间游离钙上升情况的区别。用Western blot方法,分析气道平滑肌细胞内抑制型磷脂酶C(phospho-PLCβ-ser1105)含量的变化。设立RU486及CHX对照组,排除基因组作用在该反应中的影响。结果:GCs温浴10min,能够明显降低乙酰胆碱引起的ASMCs细胞内[Ca2+]i峰值。并能够明显上调ASMCs内抑制型PLC含量。这些反应不受RU486和CHX影响。结论:GCs能够通过非基因组作用快速抑制刺激物引起的气道平滑肌的收缩反应,这一效应的实现可能是通过抑制PLC分子活性,使其下游的[Ca2+]i浓度降低实现的。

甾体激素对C6细胞摄取甘氨酸的快速作用

目的 :探讨甾体激素对C6细胞摄取甘氨酸快速作用的非基因组织机制。方法 :应用液体闪烁技术 ,通过检测C6细胞在加入了甾体激素和 /或其它试剂后摄入标记甘氨酸量的改变 ,确定甾体激素的作用。结果 :C6细胞高亲合力的甘氨酸依赖于钠离子和氯离子。皮质酮 ,孕酮 ,地塞米松可快速抑制这种摄取 ,雌二醇 ,脱氧皮质酮无显著的抑制作用 ,表明甾体激素作用有特异性。皮质酮的作用在 10 4 -8～ 10 -6 mmol/L范围内效应与浓度成正相关。皮质酮偶联牛血清蛋白后作用依然存在。RU38486 能部分阻断皮质酮的效应。细胞外液钙离子缺乏时皮质酮的作用基本消失。结论 :虽然皮质酮 ,孕酮 ,地塞米松神经胶质细胞和神经元摄取甘氨酸的快速作用不一样 ,但均是非基因组机制。

类固醇激素对大鼠小脑和脊髓突触体摄取甘氨酸的快速作用

目的：探讨类固醇激素对突触体摄取甘氨酸功能的非基因组作用，以进一步阐明类固醇激素的生理功能。方法：应用液体闪烁技术检测使用类固醇激素前后小脑或脊髓突触体摄取氚标记甘氨酸的量。结果：皮质酮和孕酮能快速促进小脑突触体摄取甘氨酸，雌二醇和脱氧皮质酮无明显作用，表明类固醇激素作用有特异性。但皮质酮、孕酮、雌二醇和脱氧皮质酮对脊髓突触体均无明显作用。结论：皮质酮和孕酮快速促进小脑突触体摄取甘氨酸是通过非基因组机制起作用的。

雌激素的非基因组效应对细胞内钙离子调节的研究进展

雌激素作为体内重要的甾体激素，在实现其生物效应中存在快速的非基因组机制，使得雌激素可以不进入细胞内而对细胞的生理活动发挥调控作用。钙离子（Ca^2＋）作为第二信使参与调节细胞的各项生理活动，包括细胞的增殖和凋亡等，在雌激素的非基因组效应中起到至关重要的作用。

运动中糖皮质激素及其受体与细胞凋亡的关系

采用文献资料法对运动与糖皮质激素分泌、糖皮质激素受体 ,糖皮质激素与细胞凋亡以及受体介导的细胞凋亡的关系进行研究 ,探讨糖皮质激素诱导细胞凋亡的机制。