长沙地区307例新确诊HIV-1感染者原发耐药突变情况及完全活性ART方案治疗效果

目的 观察长沙地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者原发耐药突变(PDRM)情况,以及具有完全活性的抗逆转录病毒治疗(ART)方案对PDRM的治疗效果。方法 纳入长沙地区新确诊的HIV-1感染者307例,收集患者人口学特征等数据,采集血浆检测CD4+T淋巴细胞计数、HIV-1 RNA病毒载量及基因型耐药检测,判断患者PDRM情况。PDRM患者根据基因型耐药检测结果给予具有完全活性的ART方案;非PDRM患者采用我国指南推荐初治ART方案。比较PDRM患者和非PDRM患者的临床特征、治疗方案和治疗结局,采用Kaplan-Meier法比较PDRM与非PDRM患者的预后。结果 307例HIV-1感染者中,PDRM 77例,非PDRM 230例。PDRM患者中,单个耐药突变位点67例、多个耐药突变位点10例,V179D和V179E是最常见的耐药突变位点。PDRM患者与非PDRM患者的HIV-1亚型分布比较差异有统计学意义(P<0.01)。ART方案主要为非核苷酸逆转录酶抑制剂(NNRTI)+2种核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI),PDRM患者与非PDRM患者的ART方案比较差异有统计学意义(P<0.05)。PDRM患者病毒学抑制率持续低于非PDRM患者,平均生存时间较非PDRM患者缩短(P均<0.01)。结论 长沙地区HIV-1感染者当前PDRM主要针对NNRTI及NRTI药物,PDRM患者更易在治疗早期发生病毒学不良事件,需要推广含整合酶抑制剂类药物的完全活性ART方案以便尽早降低病毒载量,改善患者预后。

贵州地区2017—2020年结核分枝杆菌卷曲霉素耐药与相关基因突变关系

目的检测结核分枝杆菌(M.tb)对卷曲霉素(CM)耐药相关基因突变情况,探究基因型与表型的关联,为临床使用CM提供指导。方法收集2017—2020年某院痰抗酸染色阳性的肺结核病患者痰标本,培养获得临床分离M.tb,药物敏感试验(DST)明确菌株耐药表型;提取DNA送全基因组测序(WGS),检测CM耐药相关基因tly A、rrs、rps L、eis、Rv0194及Rv1258C的突变情况,探索CM与利福平(RIF)表型耐药相关性。结果共培养123株M.tb,WGS检出6个CM耐药相关基因共23个非同义突变位点;DST结果显示52例RIF耐药,4例CM、RIF均耐药。CM耐药菌株检出rrs基因A1401G、rps L基因A128G以及Rv0194基因C3293T和T221C非同义突变位点;CM与RIF耐药相关性分析显示,差异有统计学意义(P<0.05)。结论M.tb CM耐药可能与rrs基因A1401G、rps L基因A128G和Rv0194基因C3293T突变有关,CM存在与RIF交叉耐药可能,在制定抗结核治疗方案时可作参考。

上海地区人类免疫缺陷病毒1型感染／艾滋病患者病毒耐药基因突变及亚型分布

目的研究上海地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染／艾滋病(AIDS)患者中HIV-1耐药株出现的情况及亚型分布。方法对33例HIV-1感染／AIDS患者的血浆HIV-1分离株,进行抗HIV-1药物(核苷类反转录酶抑制剂、非核苷类反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂)的基因型耐药检测和亚型分析。结果33例的HIV-1均未检出对PI的耐药突变;10例高效抗反转录病毒疗法(HAART)治疗失败或抑制病毒复制不完全者中,检出的耐药突变为70％,过渡型耐药突变为20％;23例未经抗HIV-1治疗者中,耐药突变为4．3％,过渡型耐药突变为13％。所有过渡型耐药突变均为T215S。15例经血制品传播的HIV- 1均为B亚型;18例经吸毒和性传播的HIV-1中,B和CRF01-AE亚型分别为39％,和33％,此外,还有C、D、G、K和CRF02-AG亚型。结论上海地区HIV-1感染／AIDS患者中,HAART治疗失败或复制抑制不完全者HIV-1的NRTI和NNRTI耐药突变率高;吸毒和性传播者的HIV-1中,除主要为B和CRF01-AE亚型外,尚有其他少见的亚型。

南昌市食源性沙门菌多黏菌素耐药基因突变分析

沙门菌耐药性对人类健康造成巨大威胁。多黏菌素号称人类对抗细菌感染的最后一道防线。本文对南昌市食品源沙门菌分离株进行药敏测定。并将4株多黏菌素耐药株进行三代全基因组测序。比较基因组分析结果表明,4株菌均不携带能导致多黏菌素耐药的基因mcr,但eptC、micA都存在基因突变,PhoP/PhoQ和PmrA/PmrB系统存在的SNP位点可能是导致其耐多黏菌素的原因之一。本文结果为沙门菌耐多黏菌素的机制提供了新的数据参考。

乙型肝炎病毒反转录酶区耐药突变患者HBsAg主要亲水区免疫逃逸相关突变研究

目的分析RT耐药突变患者乙肝表面抗原(HBsAg)主要亲水区(MHR)免疫逃逸相关突变的特点。方法回顾性分析2007年7月-2017年8月于解放军总医院第五医学中心接受NAs抗病毒治疗并行耐药检测的6917例C基因型CHB患者的临床资料,并根据是否发生耐药突变分为HBV RT耐药突变组与HBV RT野生组,比对两组HBsAg MHR免疫逃逸相关突变的特点。结果经抗病毒治疗的CHB患者HBV RT耐药相关突变总体检出率为37.37%(2585/6917);且HBV RT耐药突变组HBsAg MHR总体突变率显著高于HBV RT野生组(30.00%vs.17.13%,P<0.05);HBV RT耐药突变组患者的sQ101K/R/H、sS114T/A/L、sT/I126S/N/A、sG130N/R/K/A、sM133T/I、sS143T/L、sA159V/G、sE164D/G等单点突变检出率均高于HBV RT野生组(P<0.05)。结论HBV RT耐药突变患者具有更高的HBsAg MHR免疫逃逸相关突变检出率,提示MHR免疫逃逸相关突变与HBV RT耐药突变密切相关。

福建省MSM人群中HIV-1感染者原发性耐药基因突变研究

目的研究我省男男性行为者(MSM)中未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的原发性基因耐药性突变发生情况,为该人群的抗病毒治疗药物选择提供依据。方法采集福建省尚未接受抗病毒治疗的MSM HIV-1感染者的外周静脉抗凝全血,分离血浆,提取血浆中HIV RNA,用RT-PCR方法扩增HIV pol区蛋白酶基因全序列与部分逆转录酶序列。所得扩增片段进行序列测定后,数据运用Contig Express拼接编辑校正后上传至斯坦福大学HIV耐药数据库进行比对,同时运用Bio-Edit和Mega等软件进行系统发生分析。结果获得50份HIV-1分离株完整的PR和RT基因序列,其中60%(30/50)为01_AE重组亚型,18%(9/50)为B亚型,20%(10/50)为07_BC重组亚型,1例08_BC重组亚型。耐药分析显示,1例发生PI(蛋白酶抑制剂)药物的主要耐药突变M46I,造成对NFV中度耐药。10例样本出现NNRTIs和NRTIS的耐药相关突变,仅1例解释为对NNRTIs的潜在低水平耐药,由V179E引起。结论福建省MSM HIV-1感染者的原发性耐药突变发生率低,有利于今后该人群抗病毒治疗工作的开展,但需加强监控该人群耐药毒株的传播。

上海地区人类免疫缺陷病毒1型感染者原发耐药基因及亚型分析

本文通过对未经抗病毒治疗患者的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株进行检测,了解上海地区HIV-1的亚型分布及原发耐药基因变异现状。对118例未经治疗的HIV感染者标本中HIV蛋白酶全长和部分反转录酶基因进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,经DNA测序后,进行系统进化树分析和重组分析,以确定HIV-1基因亚型和重组体,并与斯坦福耐药数据库比对,了解耐药突变位点。使用斯坦福REGAHIV亚型分型工具和美国国立生物技术信息中心(NCBI)HIV亚型分析工具分析,获得118例患者的HIV基因序列,基因分型分别为CRF01_AE重组体57例(48.3%)、B亚型36例(30.5%)、CRF07_BC15例(12.7%)、CRF08_BC7例(5.9%)、C亚型2例(1.7%),亚型间或重组体间二重重组体(B/CRF01_AE)1例(0.8%)。蛋白酶抑制剂(PI)和反转录酶抑制剂相关的耐药基因突变率达54.2%(64/118),其中2例(1.7%)发生PI耐药,基因突变位点:M46L、Q58E。5例(4.1%)对反转录酶抑制剂产生耐药,其中对核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)的耐药率分别为3例(2.4%)和5例(4.1%)。基因突变位点:NRTI为M41L、D67N、T69I/N/S、K70L、L74V、V75L、V118I、M184V、L210W/F/M/S和T215F;NNRTI为V90I、L100V、K103R/N、V106M/P/I/G、E138G/A、V179E/D/T、Y181C、G190A、H221Y、F227L、K238S和Y318F。结果提示,上海地区HIV毒株以CRF01_AE重组亚型为主,且发现新的重组体,可能出现新重组体流行趋势。PI和反转录酶抑制剂相关的耐药基因突变率较高,且存在高度原发耐药毒株,应加强HIV-1耐药基因变异监测,科学、合理地给予抗病毒治疗。

上海市常住人口HIV-1感染者基因亚型和耐药性突变横断面研究

目的:采用分层整群随机抽样原则,对本市95例已确诊的人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)感染者进行基因亚型和耐药性突变研究,以了解上海市HIV-1基因亚型及耐药性HIV-1的流行情况。方法:应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因,经DNA测序后进行进化系统树分析和重组分析,以确定HIV-1基因亚型和重组体,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点,结合流行病学资料进行分析。结果:①在95例本市HIV感染者中经RT-PCR扩增并获得基因亚型序列70例,基因分型以CRF01_AE重组体30例(42.9%)为主,其余分别为B亚型6例(8.6%)、B’亚型10(4.3%)、G亚型2例(2.9%)、K亚型1例(1.4%)、CRF02_AG3例(4.3%)、CRF07_BC8例(11.4%)和CRF08_BC7例(10.0%),亚型间或重组体间二重重组体(CRF02_AG/CRF01_AE、B/CRF01_AE、K/G)3例(4.3%);②耐药分析结果表明,本组人群的蛋白酶抑制剂(PIs)原发耐药突变率为4.3%。在抗病毒治疗的HIV感染者15例中,11例(73.3%)发生反转录酶抑制剂(RTIs)耐药基因突变,其中核苷和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为10例和11例(66.7%和73.3%),远高于未治疗者。结论:本研究分析了上海市HIV-1基因亚型和耐药突变的流行与变迁情况,对HIV-1遗传变异多样性和耐药监测体系的建立及上海市的艾滋病预防和控制工作有重要指导意义。

凉山州某县未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者的耐药情况分析

目的分析凉山州某县未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者的传播性耐药(TDR)情况,为了解当地HIV-1耐药株的传播及抗反转录病毒治疗(ART)方案的制定提供理论依据和技术支撑。方法以来源于2022年1—8月在凉山州某县未接受ART的HIV-1感染者为研究对象,采集其血液样本并分离血浆和血细胞,血浆样本用于HIV-1 RNA定量检测和HIV-1 RNA基因型耐药检测,血细胞样本用于HIV-1 DNA定量检测和HIV-1 DNA基因型耐药检测。结果135例研究对象中,男性75例(55.6%),女性60例(44.4%),中位年龄37.5岁,彝族占比最大(96.3%)。性途径传播为HIV-1主要传播方式(83.0%)。发生TDR的有11例,发生率为8.1%。诊断HIV-1感染距耐药检测时间的中位数为11 d。HIV-1 RNA以10001~100000拷贝/mL占比较多(43.7%)。HIV-1 DNA以101~1000拷贝/106 cells占比较多(55.6%)。HIV-1亚型中,以B+C亚型重组占比最高(51.9%),其次为CRF07_BC重组型(43.0%)。135例研究对象中,有23例(17.0%)出现耐药突变位点,与非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)有关的耐药突变位点有16例(11.9%),K103N是主要的耐药突变位点,依非韦伦和奈韦拉平是主要的耐药药物;与整合酶抑制剂(INSTI)有关的耐药突变位点有6例(4.4%),E157Q是主要的耐药突变位点,埃替拉韦和拉替拉韦是主要的耐药药物;有1例(0.7%)同时出现NNRTI和INSTI耐药突变位点。经过单因素和多因素logistic回归分析,相较于年龄>30岁,年龄≤30岁发生TDR风险更高。结论凉山州某县未接受ART的HIV-1感染者的耐药情况不容忽视,相较于年龄>30岁,年龄≤30岁发生TDR风险更高,建议HIV-1感染者在接受ART前均进行HIV-1耐药检测。

含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒全基因组载体的构建及鉴定

目的建立含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒(HBV)全基因组载体,为进一步建立耐药细胞模型奠定基础。方法采用基因扩增、重组和克隆的方法,提取HBV-DNA进行扩增,插入pBluescript-SK(-)载体,酶切和测序鉴定重组质粒含有HBV-DNA全基因组后,以该重组质粒的多聚酶逆转录酶区为模板,设计引入突变位点的引物,聚合酶链反应(PCR)进行定点突变,突变产物经DpnⅠ消化后,转化到感受态细胞DH5α,最后将提取的突变质粒进行测序鉴定。结果凝胶电泳分析血清HBV-DNA扩增可见3.2kb条带,HBV-DNA和pBluescript-SK(-)载体连接后可见6.9kb目的条带,该重组质粒双酶切后可见3.2kb和2.9kb目的条带,突变PCR产物经DpnⅠ消化后可见明显条带。突变前质粒测序显示含有HBV基因型为C型血清型为adr的全基因组,突变后测序证实存在HBV逆转录酶173、180、204位点的预期碱基突变。结论通过测序鉴定,成功构建了拉米夫定耐药HBV全基因组载体。

BMI1分子调控肿瘤干细胞自我更新及免疫逃逸的作用机制

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI1)分子属于多梳家族(PcG)成员,作为重要的干细胞标志物之一,通过转录调控基因的表达维持机体的正常生理功能。研究报道,BMI1也是影响恶性肿瘤发生发展的关键分子,在肿瘤干细胞(CSCs)的自我更新、迁移侵袭、耐药及免疫逃逸中发挥重要的调控作用,参与肿瘤的复发、转移等过程。本文总结近年的研究进展,阐述BMI1的分子结构和生物学功能,分析BMI1分子对CSCs自我更新、迁移侵袭、耐药及免疫逃逸的调控作用,探讨BMI1作为新型靶点在肿瘤免疫治疗中的潜在价值。

人胃癌组织中突变型P53蛋白的积聚与多重耐药基因的表达

目的 研究突变型P53蛋白在胃癌组织中的积聚对多重耐药基因的作用。方法 采用免疫组化法从蛋白水平检测胃癌组织的P53蛋白与多重耐药基因产物P-糖蛋白 (Pg蛋白 )水平。结果 46份胃癌组织标本中P53蛋白阳性率为60.87% ,Pg蛋白阳性率为73.91 %。在28份P53蛋白阳性表达中有23份 (82.15% )Pg蛋白表达阳性;18份P53蛋白阴性表达中9份 (50.00 % )为Pg蛋白表达阳性。P53蛋白和Pg蛋白表达阳性率具有相关性 (P<0.05) ,且P53蛋白、Pg蛋白表达与癌组织的分化类型亦有关。结论 P53蛋白在胃癌组织中的积聚与Pg蛋白异常表达有关 ,P53可能通过各种机制调控多重耐药基因的表达。

免疫逃逸相关分子B7-H1影响恶性肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤多药耐药是目前肿瘤治疗失败的主要原因之一,也是肿瘤治疗领域的重要问题。随着对肿瘤免疫微环境方面的研究不断进行,肿瘤免疫逃逸的地位得以深入理解,其中相关分子B7-H1的异常表达与肿瘤耐药发生之间的密切关系不断被认识,其表现在耐药肿瘤可能较非耐药肿瘤细胞更易逃逸机体的免疫系统监视和杀伤。文章主要对免疫逃逸相关分子B7-H1影响恶性肿瘤多药耐药研究进展进行综述。

乙型肝炎病毒基因突变与耐药株监测进展

拉米夫定(Lamivudine)为核苷酸类似物,主要用于抗乙型肝炎病毒治疗,能有效地抑制HBV的复制。但长期使用可引起乙型肝炎病毒基因突变,其突变部位主要在 HBV基因组 P区中高度保守的聚合酶基因YMDD模序,导致耐药病毒株的出现,影响临床治疗。目前临床检测突变的手段是建立在PCR技术基础上的方法。

EGFR突变晚期非小细胞肺癌靶向治疗耐药后免疫治疗的新探索

表皮生长因子受体(EGFR)基因突变是亚洲晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者最常见的驱动基因突变类型。酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)是EGFR突变NSCLC一二线标准治疗药物,然而,耐药仍是无法避免的难题。对于耐药后无标准靶向药物治疗的患者,其后续治疗方案已经成为目前研究的热点与难点。尽管免疫检查点阻断剂(ICIs)已经成为驱动基因阴性的晚期NSCLC患者的标准治疗方案,但ICIs在EGFR突变的NSCLC中的一线疗效不佳,因此EGFR突变NSCLC耐药后能否可从免疫治疗中获益值得关注与探讨。文中主要对EGFR-TKIs耐药后免疫治疗现状及相关最新研究探索进行阐述,以期为临床及科学研究提供参考。

B7-H1与免疫逃逸及肿瘤耐药

肿瘤对多种药物产生抵抗（即耐药）是治疗失败的主要原因之一，同时也一直是肿瘤治疗领域的重要问题之一。肿瘤耐药的产生与多药耐药（muhidrugte．sistance，MDR）基因、耐药相关蛋白（multidrugre．sistance-associatedprotein，MRP）、肺耐药相关蛋白（1ungresistanceprotein，LRP）等的过度表达有关。

乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药株的全基因组克隆与序列分析

目的:从慢性乙型肝炎恩替卡韦临床耐药的患者血清中,应用高保真聚合酶长距离扩增、克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组序列,建立HBV恩替卡韦耐药株的全长基因克隆。方法:从3例恩替卡韦临床耐药的慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,应用高保真聚合酶对3 200 bp的HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建PGEM-HBV重组质粒,DNA测序后进行序列分析。结果:获得1株恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,序列长度为3 216 bp,序列分析发现在逆转录区有L180M、M204V、T184G位点变异。结论:构建了恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,为进一步研究HBV耐药株提供工具。

乙型肝炎病毒阿德福韦酯耐药株基因组分析

目的:分析乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)阿德福韦酯耐药株的基因序列。方法:从已发生阿德福韦酯临床耐药的慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,设计保守引物,采用高保真聚合酶对耐药株HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建PGEM-HBV重组质粒,测序后进行序列分析。结果:获得阿德福韦酯耐药的HBV DNA全长序列克隆,序列长度为3 261 bp,序列分析发现在逆转录区有rt A181V位点突变。结论:阿德福韦酯耐药株HBV DNA全长序列克隆的成功构建,为阿德福韦酯临床耐药性研究提供参考。