中国人基因组YAC文库的构建及首批克隆鉴定

本文采用PJS97/PJS98及TPH 274载体主宿系统构建中国汉族男性基因组YAC文库,在初探基础上不断改进方法,通过控制脉冲条件的原位筛选去除小片段DNA分子,用多胺溶液防止68℃对大片段DNA分子的破坏作用,并采用Agarase消解低熔点胶。转化获克隆10000余个,采用甘油一步到位法保存8000余个。对其中一批克隆进行鉴定。转化子阳性率为95％,其中75％的片段介于100～200kb间,10％为200～600kb,10％为600～1600kb,该批转化子平均片段230kb。克隆片段平均大小略高于回收到的目的片段的下限而低于它的平均大小。