荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的影响因素

探究荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)在乳腺癌人类表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)基因状态检测中的影响因素。方法 选择40例2021年1月至2023年12月我院外科手术切除乳腺癌组织标本,使用FISH检测HER2基因状态,观察不同的酶消化时间、煮片的温度与时间、组织前期处理固定效果对FISH检测HER2基因扩增的影响。结果 酶消化11分钟癌细胞杂交成功率>75%,实验较为稳定;酶消化9分钟时提示消化时间不足;酶消化13分钟提示消化过度。煮片水温在92℃,时间在15~25分钟左右会出现荧光杂交信号弱量较少情况;温度在97℃,时间15分钟会出现荧光杂交信号弱量较少情况,时间在20~25分钟会出现荧光杂交信号强度不均匀情况;煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右最佳。在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定最佳,乳腺组织离体到固定时间间隔不超过1h,不宜用微波快速固定。结论 使用荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2基因扩增时,在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定、酶消化11分钟、煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右具有较高的杂交成功率,同时可以保持实验的稳定性。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

荧光原位杂交（FISH）技术与免疫组织化学（IHC）技术应用于乳腺癌患者Her2基因检测的评价

目的探讨采用荧光原住杂交（FISH）技术检测乳腺癌患者中的Her2基因与免疫组织化学（IHC）检测Her2基因的结果的一致性以及导致两者差异的可能原因；了解荆州地区乳腺癌患者中Her2基因的分布。方法以FISH方法，对55例免疫组织化学分别为（3＋），（2＋），（1＋）和阴性（-）的乳腺癌新鲜石蜡切片标本进行Her2基因的检测。结果55例标本中，有16例采用FISH方法检测出Her2基因的表达；12例Her2基因表达（3＋）的标本中11例检测出Her2基因；7例Her2基因表达（2＋）的标本中5例检测出Her2基因；10例Her2基因表达（1＋）的标本中未检测出Her2基因；26例Her2基因表达（-）的标本中未栓测出Her2基因。结论初步筛查Her2基因状态可以首选免疫组织化学方法，对于IHC（2＋）的标本，应该行FISH确诊。

荧光原位杂交技术在植物细胞遗传学和绘制基因图谱中的应用现状与展望

荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。其探针主要有染色体重复序列、总基因组 DNA、寡单拷贝序列和染色体涂色集中等 ,该技术在研究植物细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。

荧光原位杂交(FISH)技术在厌氧颗粒污泥研究中的应用

本文介绍了荧光原位杂交(FISH)技术的基本原理和操作步骤,重点介绍和讨论了FISH技术在厌氧颗粒污泥研究中的应用现状,并对该技术在国内的应用前景进行了展望。

应用荧光原位杂交技术动态观察急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合基因的变化

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及疗效判断中的作用。方法:对初发的急性白血病患者行常规形态学、细胞化学染色,并采用FISH技术检测PMLRARα融合基因,流式细胞术分析白血病细胞的免疫表型,对治疗过程中患者PMLRARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察。结果:FISH对标准的PML-RARα融合基因的检出与形态学和临床符合率为100%,对流式细胞学免疫表型不符合的APL诊断的1例作出了明确诊断,对累及17号染色体的附加染色体异常也有一定的提示作用,对APL治疗过程中分子生物学缓解的判断非常直观。结论:FISH技术检测PMLRARα融合基因,实验方法简便、快速、直观和准确,具备了用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测的作用。

荧光原位杂交(FISH)技术在转基因小鼠检测中的应用

制备转基因小鼠特有的 DIG标记探针 ,应用染色体荧光原位杂交 (FISH)技术 ,对转基因小鼠外周血细胞的遗传性状进行分析 ,检测其合子类型 ,以挑选纯合子小鼠用于保种。结果杂合型小鼠 61 %的细胞有一个荧光信号 ,而纯合型小鼠约2 4%的细胞有两个荧光信号 ,48%的细胞有一个荧光信号 ,野生型小鼠无荧光信号。

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用

本研究探讨应用荧光原位杂交技术(FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值。对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因。结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100%),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4%(19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100%),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5%及1.2%)。结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义。

荧光原位杂交技术检测SYT- SSX融合基因对滑膜肉瘤的诊断价值分析

目的:探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测SYT-SSX融合基因对滑膜肉瘤的诊断价值。方法:选择2013年6月至2017年6月我院收治的96例经病理诊断为滑膜肉瘤患者为研究对象,所有患者经手术或活检取组织制作组织芯片,应用FISH技术检测SYT-SSX融合基因,免疫组化(IHC)检测常规抗体表达,对比两种检测方法的结果。结果:IHC结果显示,96例患者中Vimentin、CD99、AEl/AE3、EMA、CD34、Calponin、Ki-67的阳性表达率分别为100.00%、73.96%、90.63%、6.25%、29.17%、16.67%、60.42%。FISH检测结果显示,90例患者存在SYT基因易位,其中58例为考虑滑膜肉瘤,32例为可疑滑膜肉瘤,SYT-SSX阳性细胞百分率16.25%时诊断滑膜肉瘤的灵敏度、特异度、准确率分别为91.14%、100.00%、93.02%。FISH与IHC诊断滑膜肉瘤具有一致性(Kappa=0.43)。结论:FISH技术检测SYT-SSX融合基因灵敏度和特异度高,与IHC具有较高一致性,诊断滑膜肉瘤时可互相补充。

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因阳性的病例分析

目的:本研究应用快速、高敏感性和特异性的荧光原位杂交技术(fluorecence in situ hybridization,FISH)检测BCR/ABL融合基因并对阳性病例进行分析。方法:回顾性分析2010年4月至2012年4月用FISH法检测初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病(chronic myeloproliferative disease,CMPD)或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病(myelodysplastic myeloproliferative disorders,MDS/MPD)、急性淋巴细胞白血病患者(acute lympho-cyte leukemia,ALL)及口服格列卫的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)和ALL患者的BCR/ABL融合基因的表达情况。结果:BCR/ABL融合基因阳性的病例共456例,其中经骨髓细胞学初诊为CML的350例,占总阳性病例的76.8%;CML复查病例为85例,占总阳性病例的18.6%;诊断为B细胞型ALL(B-ALL)的21例,占总阳性病例的4.6%。31例初诊为CMPD和MDS/MPD的患者中,有5例患者骨髓形态学诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100%);另26例患者骨髓形态学诊断为非CML的CMPD及MDS/MPD,BCR/ABL融合基因均为阴性(100%)。79例骨髓形态学诊断为ALL患者应用FISH法检测BCR/ABL融合基因,其中阳性病例为21例,占ALL病例的26.6%。45例初次口服格列卫的CML患者,6个月达到主要分子生物学缓解(major molecular response,MMR)或完全分子生物学缓解(complete molecularresponse,CMR)的为21例,占46.7%,12个月为40例,占88.9%。2例CML移植患者分别在91天和16个月发现融合基因阳性。结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因快速、简单、特异性高、可靠,弥补了染色体检测报告需要时间长等不足。对CMPD和MDS/MPD的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+ALL患者的诊断;在监测格列卫疗效和微小残留病灶(minimal residual desease,MRD)方面也有重要意义。

荧光原位杂交技术检测性染色体在异基因干细胞移植中的应用

目的 探讨性染色体双色间期荧光原位杂交 (FISH )技术在异性间异基因造血干细胞移植后植活标志、微小残留病灶 (MRD)监测的价值。方法 用间期FISH检测 10例白血病、2例地中海贫血患者异性间移植后不同时期性染色体荧光杂交信号 ,确定供体源的植入克隆或患者的残存克隆。结果 12例患者在移植后 2 2～ 3 5天 ,细胞遗传学及双色间期FISH分析均获植入证据。在移植后不同时间 ,当染色体分析 10 0 %XX或 10 0 %XY结果 ,同步的bcr/ablmRNA基因持续阴性时 ,FISH可显示不同比例的供者源性染色体。结论 双色FISH应用于异性间异基因造血干细胞移植后植活标志、MRD监测 ,操作简易快速 ,是细胞遗传学及分子学检查很好的补充。

基因芯片和荧光原位杂交技术在毒理学的应用

基因芯片技术和荧光原位杂交技术是近几年兴起的分子生物学技术。将其应用于毒理学基因突变的检测及染色体畸变分析等方面 ,推动了毒理学的研究向着更高层次发展 ,深入到未曾达到的分子水平。

荧光原位杂交技术检测PML/RARa融合基因在儿童APL微小残留病中的应用

目的应用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)定量检测儿童急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocyticleukemia,APL)PML/RARa融合基因,监测患儿微小残留白血病(minimal residual disease,MRD)。方法对初发、诱导缓解、巩固、维持治疗中的30例APL患儿进行常规形态学检查、流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测及利用FISH进行PML/RARa融合基因定量检测。结果 30例初发骨髓细胞形态学及流式细胞术诊断为APL患儿,诱导化疗结束后骨髓细胞形态学均完全缓解,FCM检测MRD阳性19例,阴性11例,但FISH检测PML/RARa融合基因阳性27例,阴性3例。经巩固治疗后细胞形态学完全缓解,FCM检测MRD阴性29例,1例持续阳性最终复发;而FISH检测有7例PML/RARa融合基因检查仍呈阳性,其中3例在第一轮维持治疗后转阴,4例仍呈阳性,经IA方案化疗后,1例转阴,3例持续阳性者最终复发。两种检测方法阳性数比较差异有统计学意义(P<0.005)。结论FISH检测PML/RARa融合基因较FCM具有更高的敏感度,可以定量检测MRD,为早期预测复发,指导临床治疗提供依据。

4种荧光原位杂交探针检测隐匿易位急性早幼粒细胞白血病的比较

目的:比较4种临床常用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)探针对罕见隐匿PML-RARα插入易位急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)的检测能力。方法:联合FISH、RT-PCR及常规染色体核型分析技术检测3例罕见APL病例相关融合基因及染色体异常,其中FISH技术采用4家不同公司PML-RARα探针进行检测。结果:FISH方法检测罕见插入易位PML-RARα融合时,由于片段短小极易出现假阴性的情况。4家不同探针FISH检测结果显示,美国Abbott公司探针3例PML-RARα融合基因检测均为阴性;英国Cytocell公司探针检测到2例阳性,1例阴性;武汉康录和广州安必平公司探针在3例中均成功检测到融合信号。结论:康录和安必平公司探针PML-RARα检出率高,是FISH检测此类罕见PML-RARα融合基因时的更优选择。

多基因组合荧光原位杂交技术鉴别皮肤黑色素瘤良恶性的价值

目的:分析多基因组合荧光原位杂交技术(FISH)鉴别皮肤黑色素瘤良恶性的价值。方法:在商丘市第一人民医院皮肤科2019年1月至2021年12月期间收诊的皮肤恶性黑色素瘤患者中选取40例作为恶性组,另在同期收诊的皮肤良性黑色素瘤患者中选取40例作为良性组,对两组患者进行FISH检查,计算FISH检查的鉴别皮肤黑色素瘤的准确率、灵敏度、特异度,并观察扩增表现。结果:80例患者均经FISH检验获得满意荧光信号,可以判读FISH结果。FISH鉴别皮肤黑色素瘤良恶性的准确率为92.50%(74/80),特异度为95.00%(38/40),灵敏度为90.00%(36/40)。恶性组中有36例经FISH检验为阳性,表现为CCND1、RREB1和MYB基因异常改变,其中CCND1扩增占36.11%,RREB1扩增占22.22%,RREB1扩增合并MYB缺失占36.11%,CCND1、RREB1和MYB同时异常的仅占5.56%。结论:FISH在皮肤黑色素瘤的良恶性鉴别中具有较高的效能,并能在早期检出黑色素瘤异常的基因改变。

转基因水稻中外源基因的荧光原位杂交(FISH)分析

利用荧光原位杂交(FISH),在供试8个转基因水稻株系的染色体上检出了转入的外源基因bar-nase-ps1片段。其中两株系各检出了两个不同的信号位点,而其他株系均只检出一个信号位点。所有染色体着丝粒区都没有杂交信号。结合Southern杂交及表达分析发现,大多数株系中,整合在染色体端部区的barnase基因表现为高水平表达,而靠近着丝粒区的则表现为低水平表达,表明表达水平与转基因整合位置可能存在一定程度的相关性。表达水平与拷贝数无明显相关。本文还利用多色荧光原位杂交(Multi-color FISH)技术,进行了barnase-ps1片段与报道基因pHctinG的共杂交,多数情况下,barnase-ps1片段与报道基因整合在染色体的同一位置。

荧光原位杂交技术检测乳腺原发癌和淋巴结转移癌HER-2基因的表达及意义

目的:探讨使用荧光原位杂交技术检测乳腺原发癌和淋巴结转移癌HER-2基因的表达及意义。方法:选取我院2013年6月至2014年6月收治的乳腺原发癌患者133例作为研究对象,对其临床资料进行回顾性分析。应用荧光原位杂交技术(FISH)与免疫组化技术(IHC)对所有患者手术切除标本的HER-2基因表达予以检测。结果:FISH阳性率为42.1%,IHC为58.6%;IHC阴性时与FISH符合率为87.2%,IHC(+)与FISH符合率为34.7%,IHC(++)与FISH符合率为83.8%,IHC(+++)与FISH符合率为100.0%。淋巴结转移阳性率为67.5%,未转移阳性率为33.3%,组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IHC对HER-2基因予以检测时若结果为阴性或者强阳性则与FISH符合率较高,同时HER-2基因表达与腋淋巴结转移之间存在正相关关系。

基于荧光原位杂交(FISH)与免疫组化技术(IHC)在非小细胞肺癌中的应用探究

目的探究在非小细胞肺癌检测中基于荧光原位杂交(FISH)与免疫组化技术(IHC)的应用效果。方法从2019年2月至2020年2月本院收治的非小细胞肺癌患者中选出53例为研究对象,分别利用FISH和IHC技术,对其石蜡组织标本进行EGFR基因表达检测,对比分析检测结果。结果FISH检测EGFR基因表达阳性率为75.47%,IHC检测为79.25%,差异无统计学意义(P > 0.05)。结论基于荧光原位杂交(FISH)与免疫组化技术(IHC)可以互相补充,为非小细胞肺癌患者治疗中酪氨酸激酶抑制剂的使用,以及疗效预测提供指导意见。