克螟稻秸秆cry1 Ab基因表达产物对土壤生物学活性的影响

通过实验室条件下的秸秆还土试验 ,比较了转基因克螟稻及其亲本稻秸秆对土壤各微生物生理群的数量、土壤酶活性以及土壤呼吸强度的影响差异。与亲本对照相比 ,转基因克螟稻秸秆的添加对土壤好氧性细菌、放线菌和真菌的数量没有显著性影响 ;土壤氨化细菌、自生固氮菌和纤维素降解菌的数量在培养中期有些差异 ,但差异并不持续 ;对土壤蛋白酶、中性磷酸酶、脲酶和土壤呼吸强度没有显著性影响 ;土壤脱氢酶对转基因克螟稻秸秆的添加极其敏感。转基因克螟稻秸秆处理土壤中脱氢酶的活性在培养的前 9周明显地高于非转基因秸秆处理土壤 (p <0 0 5 )。尽管如此 ,培养 63d后 ,两种秸秆处理土壤脱氢酶活性差异逐渐消失。试验结果表明 。

hhlim基因表达产物的亚细胞定位及其在细胞肥大中的意义

hhlim是从胎儿心脏中新近分离和克隆得到的与心脏发生相关的基因 ,其表达产物作为转录因子参与多种基因的转录调控和细胞的发育与分化过程 .用细胞转染方法将外源性hhlim基因导入处于分化过程中的小鼠成肌细胞C2C12 ,发现该基因强制性表达可使C2C12细胞体积明显增大 .RT PCR和蛋白质印迹结果表明 ,hhlim促细胞肥大与诱导α 肌动蛋白 (α actin)过表达及重新启动胚胎基因BNP表达有关 .用绿色荧光蛋白 hhlim融合蛋白表达载体转染处于分化过程的C2C12细胞 ,发现转染不同时间 ,表达产物的亚细胞定位发生动态变化 ,表现为先在胞核和胞质中均有分布 ,而后定位于胞质的变化规律 .应用免疫共沉淀证实 ,hhlim在胞质中以与α actin相互缔合的方式存在 .

ETMIC-2基因表达产物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护及病理学研究

采用大肠杆菌表达鸡艾美耳球虫微线蛋白(ETMIC 2),对石歧杂小公雏在1、2周龄按分组以不同剂量分别肌注免疫,3周龄人工感染强毒柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,4周龄全部捕杀,进行增重、盲肠病变和免疫淋巴器官病理组织学观察。结果表明,全部试验组增重率均高于红对照组,其中两组超过白对照组;盲肠病变均低于红对照组;免疫淋巴器官发生不同程度的增生,尤其是胸腺,盲肠扁桃体及脾脏,淋巴滤泡增大,淋巴细胞明显增殖。此结果可以提示,适量的ETMIC 2基因表达产物免疫雏鸡后,再进行柔嫩艾美耳球虫的强毒攻击,能刺激机体的免疫淋巴组织器官产生免疫应答反应,对机体具有较好的保护力。

L-肉碱对肥胖大鼠体脂含量及肥胖基因表达产物的影响

为探讨L -肉碱对肥胖大鼠体重、体脂、胰岛素及肥胖基因表达产物 (瘦素 )等水平的影响 ,以高脂饲料诱导大鼠肥胖模型 ,将肥胖模型鼠随机分为 4组 :对照组与 12 5、2 5 0、5 0 0mg kgBW 3个剂量的L -肉碱组 ,每天 1次经口给予 ,共 6周。观察大鼠体重、睾丸 +肾脂肪垫重量、胰岛素(INS)及瘦素 (Leptin)水平等的变化。结果显示 3个肉碱组的体重均低于对照组 ,2 5 0与5 0 0mg kgBW组的睾丸 +肾脂肪垫重量、胰岛素和瘦素显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ,提示L -肉碱具有抑制肥胖大鼠肥胖的作用。

转基因猪外源hDAF基因表达产物的功能研究

应用微量淋巴细胞毒方法对转hDAF基因猪外源基因表达产物的功能进行了初步研究。结果表明：外源hDAF基因在猪淋巴细胞上的表达产物具有生物学功能，活细胞数与总细胞数之比最高者达44．44％，从而为转hDAF基因猪的检测提供了一个新方法。

艾滋病病毒外膜蛋白与干扰素融合基因表达产物的免疫学研究

为了将艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答,将IFNα-2b基因片段插人到env基因的下游,经脂质体转染,筛选重组痘苗病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。用重组病毒vJl6env/IFNct-2b免疫小鼠,以生理盐水和野生型痘苗病毒作为对照,检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性;用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4^+、CD8^+T细胞计数与CTL。结果表明,与对照组比较,实验组脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性显著增高(P<0.05);CD4^+T淋巴细胞计数和CTL活性也显著增高(P<0.05);CD8^+T淋巴细胞计数呈增高趋势,但未达到显著意义的程度。结论:重组病毒vJl6env/IFNα-2b能增强小鼠的免疫功能和诱导细胞免疫。

恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

目的 用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠 ,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法 提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物 ,免疫注射BALB/c小鼠。取免疫后 4周及 7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉 ,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原。结果 免疫 7周后的BALB/c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原 -抗体反应 ,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应。结论 恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别 。

内皮抑素基因表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用

目的探讨逆转录病毒介导内皮抑素基因转移的方法及其表达产物人内皮抑素对人血管内皮细胞的作用。方法以逆转录病毒为载体,转导内皮抑素基因至肺腺癌A549细胞,获得含内皮抑素基因的A549/Endo细胞。PCR方法检验外源性内皮抑素基因在宿主细胞中的整合。培养A549/Endo细胞,收集上清液。ELISA法检测上清液中内皮抑素的浓度,四唑盐比色试验(MTT)、流式细胞术(FCM)、原位细胞凋亡(TUNEL)观察该上清液对血管内皮细胞EA hy926 的抑制作用。结果PCR法证实A549/Endo细胞基因组中整合有外源性内皮抑素基因。A549/Endo细胞(1×105/ml)培养48h后,上清液中内皮抑素含量为(348±120) pg/ml,MTT法显示含内皮抑素的上清液能明显抑制EA hy926细胞的生长。FCM、TUNEL法显示内皮抑素可诱导EA hy926 凋亡。结论逆转录病毒能高效介导内皮抑素基因转移,内皮抑素基因表达产物能明显抑制人血管内皮细胞的生长,诱导其凋亡。

肥胖基因表达产物leptin与青春期发育

目前 ,肥胖基因及其表达产物 leptin已经成为生物界的研究热点。本文主要针对 leptin的生殖功能 ,从 4方面阐述了 leptin与人和动物青春期发育的关系 ,并对

恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

目的 :用恶性疟原虫 FCC1/ HN株 CSP基因表达产物免疫小鼠 ,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法 :提取目的基因 Pf CSP在 He L a细胞中的表达产物 ,免疫注射 BAL B/ c小鼠。取免疫后 4周及 7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉 ,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原。结果 :免疫 7周后的 BAL B/ c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原 -抗体反应 ,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应。结论 :恶性疟原虫 FCC1/ HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别 。

一个简便、经济的转化胰岛素基因表达产物为重组胰岛素的方法及其应用

建立了直接用胰蛋白酶酶解重组胰岛素基因表达产物的方法,并用以加工猪胰岛素前体(PIP),[B16Ala]PIP和[B26Ala]PIP,分别获得保留了各自亲本全部生物活力的(去B30)胰岛素、(去B30)[B16Ala]胰岛素和(去B30)[B26Ala]胰岛素,进一步证明胰岛素的B链C末端残基不是胰岛素生物活力所必需的,该方法比转肽方法简便、产品得率高、避免了使用有机溶剂;比胰蛋白酶/羧肽酶方法,省去了羧肽酶制剂的使用。(去B30)[B16Ala]胰岛素和(去B30)[B26Ala]胰岛素还保留了其亲本的无自身聚合能力的性质,是单体胰岛素,在临床应用中可代替原单体胰岛素,[B16Ala]胰岛素和[B26Ala]胰岛素。

大肠杆菌外源基因表达产物的下游技术

以大肠杆菌作为工程菌的外源基因产物常以包涵体形式存在，这使得这类基因工程下游工艺具有不同于其它蛋白质纯化的特点。下游工艺包括包涵体提取，重组蛋白变性、复性、纯性、活性检测等复杂技术环节。本文主要对活性检测之外的各技术环节要点进行综述。

寄生蜂多分DNA病毒的基因表达产物及对寄主昆虫的生理作用

最近有关由多分DNA病毒介导的寄生蜂与寄主关系的研究主要集中在多分DNA病毒基因的表达和伴随寄主生理功能失常的分子机理上 ,本文介绍在寄生蜂作用于寄主时一些重要的PDV基因表达产物 ,包括CsPDV ,MdPDV ,CcPDV ,TrPDV ,HdPDV ,CrPDV和其它PDV的基因表达产物 ,并简叙这些基因表达产物对寄主的生理影响。

用流式细胞术检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物P170

为研究检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物，采用间接标记法，用鼠抗人Ｐ１７０单克隆抗体，二抗为ＦＩＴＣ标记兔抗鼠Ｉｇ，应用流式细胞仪检测了２９例新鲜实体肿瘤组织和一株多药耐药的Ｋ５６２细胞株。结果显示：１８例肿瘤细胞表达Ｐ１７０，其阳性率为６２．１％，１１例未检出表达，其阴性率为３７．９％；９９．９％Ｋ５６２细胞表达Ｐ１７０。在１８例Ｐ１７０阳性表达的样本中，有１６例阳性表达百分比低于３０％；只有２例高于３０％。提示大多数肿瘤组织细胞表达Ｐ１７０阳性率高，但表达Ｐ１７０肿瘤细胞表达百分比低。检测肿瘤组织的Ｐ１７０表达能为临床治疗提供一个可靠的参考指标。

应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究

利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。

重组人β趋化因子RANTES基因融合表达产物活性分析

为研制基于病毒受体的抗艾滋病毒感染基因药物 ,将重组人 β趋化因子RANTES基因导入大肠杆菌中表达谷胱甘肽S 转移酶 (GST) RANTES融合蛋白 ,并回收携带末端延伸肽 (TEP)的RANTES修饰蛋白 .荧光免疫化学分析表明 ,2种非天然RANTES蛋白均显示对人外周血淋巴细胞的结合活性 .暗示在细胞表面可能已发生RANTES与CCR5之间的相互作用 .2种修饰RANTES蛋白都能使人外周血细胞的过氧化物酶活性显著升高 ,提示这 2个人造蛋白可能仍存在对淋巴细胞的趋化性诱导 .

人CNTF突变体(CNTFM)基因的克隆、表达和产物纯化及活性鉴定

采用PCR的方法对睫状神经营养因子(CNTF)基因进行改造,获得CNTF突变体基因(CNTFM) ,将CNTFM基因克隆入表达载体pBV2 2 0 ,在大肠杆菌BL 2 1(Gold)中进行了表达.目的蛋白占细胞总蛋白5 5 %左右,以包涵体形式存在,经Superdex 75凝胶过滤柱一步纯化和复性,获得纯度达90 %目的蛋白.纯化的重组CNTFM蛋白能促进培养的鸡胚背根神经节长出神经突起,能明显减轻实验小鼠的体重,表明CNTFM具有良好的体内、体外生物学活性,为开发新型高效的减肥药奠定了基础.

肺癌中MTS1/p16和p53基因产物表达与细胞增殖的关系

应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法研究６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白的表达情况，并进行增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测，计算细胞增殖指数（ＰＩ）。结果显示６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白阳性率分别为５８．１％和５９．７％。腺癌ｐ１６蛋白的阳性率明显高于小细胞癌；ＰＩ分级不同者ｐ１６蛋白表达不同。淋巴结转移阳性组ｐ５３蛋白的表达高于阴性组；不同ＰＩ分级中ｐ５３蛋白的表达不同。提示ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达均有促进肺癌细胞增殖的作用，ｐ１６蛋白的表达与肺癌的细胞分化有关。

神经系统肿瘤恶性程度与其基因产物表达的不稳定性相关

用免疫组化法检测了１０例中枢神经系统肿瘤和１０例末梢神经系统肿瘤细胞中ＰＣＮＡ、ｂｃｌ－２、Ｆａｓ、ＢＭ－１、Ｒｂ和ｐ５３基因产物的表达。ＰＣＮＡ、ｂｃ１－２、Ｆａｓ、ＢＭ－１、Ｒｂ和ｐ５３在中枢神经系统肿瘤中分别有７、１、４、０、２、３例阳性；而在末梢神经系统肿瘤中则各有４、５、１０、０、５、０例阳性。在两者之间存在基因产物表达上的差异。但无论在中枢或末梢神经系统肿瘤中ＰＣＮＡ和ｂｃ１－２同时表达的病例明显预后不良。

aflJ基因表达产物失活可致米曲霉菌株不产黄曲霉毒素

米曲霉（Aspergillus oryzae）与黄曲霉（Aspergillusflavus）类似，但它不产黄曲霉毒素（AF）。根据AF同源生物合成基因簇（AFHC）的结构，米曲霉RIB菌株可分为三类。第一类，础基因的表达水平非常低，其他4种AF同源基因（avnA、verB、omtA和vbs）皆不表达。详细比较了米曲霉和黄曲霉AFLR和AFLJ的ORF结构，并确定了几种氨基酸替代物。