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牛胚胎角芽组织基因表达特征分析
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作者 闫茜茜 王伟 +5 位作者 马楠謌 路钰怡 孟凡欣 李洋 刘昊 王禹 《中国牛业科学》 2024年第1期9-13,共5页
[目的] 通过基因表达特征的分析,揭示在形成牛胚胎角芽组织中起关键作用的基因和通路,从而更深入地了解角芽发育过程中的分子机制。[方法] 基于牛胚胎角芽组织、额部皮肤组织、脑、心脏、肾、肝脏、肺、瘤胃、骨骼肌、脾脏的转录组测序... [目的] 通过基因表达特征的分析,揭示在形成牛胚胎角芽组织中起关键作用的基因和通路,从而更深入地了解角芽发育过程中的分子机制。[方法] 基于牛胚胎角芽组织、额部皮肤组织、脑、心脏、肾、肝脏、肺、瘤胃、骨骼肌、脾脏的转录组测序数据,利用主成分分析(PCA)、差异表达基因分析和基因富集分析来解析角芽组织的基因表达特征。 [结果] 多组织基因表达比较鉴定到810个角芽组织特异高表达基因。主成分分析表明牛胚胎角芽组织与额部皮肤组织的基因表达模式最为相似,但存在1695个显著上调基因(校正p<=0.05), 这些基因功能富集到与神经和骨发育相关的通路。[结论] 从多组织比较、角芽组织和额部皮肤的差异比较两个方面分别鉴定了角芽组织的基因表达特征,角芽组织特异高表达基因富集到骨、神经和皮肤发育相关通路,暗示着角芽组织发育涉及多组织协同,具有复杂的调控机制。 展开更多
关键词 牛角芽组织 转录组 基因表达特征
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布氏田鼠GnRH基因克隆及不同组织和发育阶段的基因表达特征 被引量:1
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作者 刘岚 陈燕 +5 位作者 李宁 王大伟 任飞 宋英 郭聪 刘晓辉 《四川动物》 北大核心 2017年第5期498-506,共9页
促性腺激素释放激素(GnRH)由GnRH编码,是调节动物繁殖活动的核心神经内分泌物质。布氏田鼠Lasiopodomys brandtii是我国内蒙古东部草原区的害鼠之一,具有明显季节性繁殖特征,但其繁殖调控机制仍未完全明确。本研究克隆了来自布氏田鼠下... 促性腺激素释放激素(GnRH)由GnRH编码,是调节动物繁殖活动的核心神经内分泌物质。布氏田鼠Lasiopodomys brandtii是我国内蒙古东部草原区的害鼠之一,具有明显季节性繁殖特征,但其繁殖调控机制仍未完全明确。本研究克隆了来自布氏田鼠下丘脑的GnRH cDNA序列,使用实时荧光定量技术检测了不同组织、不同年龄阶段GnRH mRNA水平。结果表明,克隆获得GnRH cDNA序列497 bp,包含开放阅读框273 bp,编码90个氨基酸和1个终止密码子的GnRH前体。DNA序列比对和氨基酸序列同源性分析表明,布氏田鼠下丘脑GnRH基因属于Ⅰ型,与橙腹田鼠Microtus ochrogaste GnRH1相似性最高。GnRH mRNA在下丘脑、垂体、睾丸、肾上腺、肠、膀胱均有表达。雄鼠血清睾酮水平和雌鼠血清雌二醇水平在出生后8周、36周、80周处于高水平,显著高于4周龄鼠,但除80周龄鼠下丘脑GnRH表达量处于高水平,8周龄、36周龄鼠GnRH表达量与4周龄鼠差异均无统计学意义。推测4周龄鼠下丘脑GnRH受GnRH调节剂的中心抑制,而8周龄、36周龄鼠下丘脑GnRH受性类固醇介导的反馈抑制调控,当年龄增加至80周龄,性类固醇介导的反馈抑制消失或者应答时间延长。本研究结果为探究布氏田鼠繁殖调控规律提供了更多基础资料。 展开更多
关键词 布氏田鼠 GNRH 基因克隆 基因表达特征 繁殖调控
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MiR-199b-5p过表达在肾小球足细胞中的作用及基因表达特征 被引量:2
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作者 龚向前 鱼敏逸 +4 位作者 陈俊宇 顾欣雨 李善文 张爱青 甘卫华 《皖南医学院学报》 CAS 2018年第6期519-522,共4页
目的:研究miR-199b-5p在足细胞凋亡过程中的功能及miR-199b-5p过表达足细胞中的基因表达谱特征,探讨足细胞凋亡的潜在分子机制。方法:体外培养小鼠足细胞,用lipofectamine 2000分别在小鼠足细胞中瞬时转染miR-199b-5p过表达质粒(miR-199... 目的:研究miR-199b-5p在足细胞凋亡过程中的功能及miR-199b-5p过表达足细胞中的基因表达谱特征,探讨足细胞凋亡的潜在分子机制。方法:体外培养小鼠足细胞,用lipofectamine 2000分别在小鼠足细胞中瞬时转染miR-199b-5p过表达质粒(miR-199b-5p mimics)、miR-199b-5p过表达质粒阴性对照(NC)组。用qRT-PCR检测miR-199b-5p在足细胞中表达水平。用流式细胞仪检测足细胞凋亡的变化。运用高通量测序分析转染miR-199b-5p mimics后足细胞中差异表达基因,并对miR-199b-5p靶基因进行基因功能(GO)富集分析和信号通路(Pathway)富集分析。结果:qRT-PCR结果显示,转染miR-199b-5p mimics足细胞中miR-199b-5p表达水平较对照组升高(P <0. 05)。流式细胞仪检测结果显示,NC组细胞凋亡率(32. 97±1.45)%,转染mimics组细胞凋亡率(25.51±0.94)%较对照组下降(P<0.05)。高通量测序发现,过表达miR-199b-5p足细胞中有106个基因表达较对照组降低大于1.5倍。基因功能富集分析结果显示miR-199b-5p靶基因可能通过NF-κB及TNF等信号通路,调控肌动蛋白骨架稳定性等多个方面抑制足细胞凋亡。结论:过表达miR-199b-5p能抑制足细胞凋亡,可能通过对其靶基因的调控在足细胞损伤的过程中发挥保护作用。 展开更多
关键词 miR-199b-5p 足细胞 基因表达特征 凋亡
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花斑裸鲤SIRT基因家族分析及低温适应性表达 被引量:1
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作者 倪伟琳 刘丹 +5 位作者 高强 晁燕 张存芳 寇若彬 祁得林 聂苗苗 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期10-21,共12页
花斑裸鲤是裂腹鱼亚科的代表物种之一,能够很好地适应青藏高原寒冷的环境。为探究sirtuins(SIRT)基因家族在花斑裸鲤低温适应中的作用,笔者对SIRT基因家族的7个基因进行了生物信息学分析和基因表达研究。结果显示,花斑裸鲤SIRT基因家族... 花斑裸鲤是裂腹鱼亚科的代表物种之一,能够很好地适应青藏高原寒冷的环境。为探究sirtuins(SIRT)基因家族在花斑裸鲤低温适应中的作用,笔者对SIRT基因家族的7个基因进行了生物信息学分析和基因表达研究。结果显示,花斑裸鲤SIRT基因家族的长度差异较大,序列最长的是SIRT1基因(22885 bp),最短的是SIRT4基因(3660 bp),包含蛋白质编码区,编码304至691个氨基酸不等。通过保守结构域和基序分析发现,花斑裸鲤SIRT基因均具有Sir2保守结构域和基序,包括GAGxSx、xxPxxR、PxxxH和QNxDxLx。氨基酸理化性质预测结果表明,花斑裸鲤SIRT蛋白均为亲水性蛋白,除SIRT4之外,均是不稳定蛋白。亚细胞定位预测结果显示,SIRT蛋白主要分布于细胞质和细胞核中。通过预测蛋白质相互作用发现,SIRTs与SOD2、CAT、PPARGC1α、p53、FOXO1a和FOXO1b具有相互作用。进一步对SIRT基因在低温适应的花斑裸鲤的肝脏、脑和肌肉组织中表达进行分析,结果显示,低温下,SIRT2、SIRT4和SIRT7基因在肝脏和脑中表达显著上调,SIRT2~4、SIRT6和SIRT7基因在肌肉中表达显著上调,推测SIRT基因家族尤其是SIRT2、SIRT4和SIRT7基因在花斑裸鲤低温适应中可能具有重要作用。本试验分析了花斑裸鲤SIRT基因家族的特征,其结果可为后续SIRT基因在花斑裸鲤低温适应中功能研究提供基础。 展开更多
关键词 花斑裸鲤 SIRT基因家族 基因特征表达 低温适应
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多效生长因子(Pleiotrophin)基因沉默后的基因表达谱初步分析 被引量:6
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作者 霍艳英 胡迎春 +4 位作者 周乔丹 杨柳 张博 李刚 吴德昌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期351-356,共6页
多效生长因子(pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性的生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能.我们前期研究发现,Ptn稳定沉默可以显著降低细胞的生长及成瘤能力.为进一步了解Ptn表达... 多效生长因子(pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性的生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能.我们前期研究发现,Ptn稳定沉默可以显著降低细胞的生长及成瘤能力.为进一步了解Ptn表达沉默后小鼠基因转录谱的变化,用小鼠表达谱芯片比较了对照及Ptn沉默细胞的基因表达差异.在检测的24000个基因中,Ptn沉默后上调2倍以上的基因有240个,下调2倍以上的基因有129个.值得引起注意的是,在Ptn沉默的MEFs细胞中,同DDK综合症相关的基因家族,schlafen(Slfn)家族的Slfn2、Slfn3、Slfn4以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族的Mmp3、Mmp10、Mmp13表达均显著上调;而可促进内皮细胞运动,参与血管发生的基因angiomotin(Amot)表达显著下调.通过研究,获得了一系列Ptn沉默后表达变化的基因信息. 展开更多
关键词 多效生长因子 基因沉默 基因表达特征 schlafen 基质金属蛋白酶 angiomotin
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水稻幼苗响应氰化物胁迫的基因表达谱差异分析
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作者 张伏中 蔡青 +2 位作者 宋江燕 胡龙兴 吴根义 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期528-535,共8页
为筛选水稻参与氰化物胁迫响应的关键基因,采用Agilent4×44 K水稻全基因组芯片,分析了氰化钾和铁氰化钾胁迫下水稻幼苗叶片和根系的基因表达特征。结果表明:氰化钾和铁氰化钾处理下,从水稻根系中分别筛选到1841和3037个差异表达基... 为筛选水稻参与氰化物胁迫响应的关键基因,采用Agilent4×44 K水稻全基因组芯片,分析了氰化钾和铁氰化钾胁迫下水稻幼苗叶片和根系的基因表达特征。结果表明:氰化钾和铁氰化钾处理下,从水稻根系中分别筛选到1841和3037个差异表达基因,从水稻叶片中分别筛选到734和1805个差异表达基因;氰化钾处理下,细胞壁代谢和抗逆相关的基因在根中显著上调表达;铁氰化钾处理下,水稻叶中解毒相关基因显著上调表达,说明氰化物能诱导水稻基因差异表达;与细胞解毒作用和抗逆相关的基因、与细胞壁和次生代谢途径相关的基因以及转录因子类基因的表达均显著上调,表明2种氰化物处理下水稻根系和叶片均可能通过调节其体内的一些代谢途径和一些酶的催化活性来应对氰化物的胁迫,积极诱导与防御相关的基因,并通过主动吸收和转运等代谢过程将氰化物代谢解毒,以降低对植物的伤害。 展开更多
关键词 水稻 氰化物 胁迫 基因表达特征 差异分析
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围产期蒙古牛外周中性粒细胞凋亡相关基因的表达分析 被引量:1
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作者 刘阳 张新颖 +2 位作者 耿万友 毛景东 杜立银 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期127-133,共7页
选择3头2~3胎次妊娠蒙古牛,分别于分娩前后以及分娩当天采集静脉血,分离中性粒细胞(PMNs)、血清,采用RT-PCR、Western blotting、放射免疫法、全自动动物血液分析仪检测了围产期蒙古牛外周PMNs凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53、Cyt-c在转... 选择3头2~3胎次妊娠蒙古牛,分别于分娩前后以及分娩当天采集静脉血,分离中性粒细胞(PMNs)、血清,采用RT-PCR、Western blotting、放射免疫法、全自动动物血液分析仪检测了围产期蒙古牛外周PMNs凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53、Cyt-c在转录和蛋白质水平上的变化,外周血主要白细胞数量,血清中雌二醇(E2)、孕酮(P4)及糖皮质激素(GC)的浓度变化,以揭示蒙古牛围产期免疫抑制下外周PMNs的免疫状态,从而为PMNs免疫抑制机制研究提供理论参考。结果显示,外周血PMNs和单核细胞(MC)总数及淋巴细胞数量总体上均以分娩当天为拐点呈先降后升的趋势。外周血血清E2质量浓度于分娩前22 d逐渐升高,分娩前2 d升至最高,而后下降;P4质量浓度于分娩前22 d开始逐渐下降,分娩当天迅速下降,之后趋于平缓;GC质量浓度变化趋势与P4相反。凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均以分娩当天为拐点呈先升后降的趋势,促凋亡基因Bax、P53和Cyt-c mRNA和蛋白表达趋势均与Bcl-2相反。总之,围产期蒙古牛外周PMNs凋亡相关基因表达呈明显动态变化趋势,临近分娩时凋亡抑制作用显著增强,分娩时抑制效应达到峰值,分娩后降低。 展开更多
关键词 凋亡基因 基因表达特征 中性粒细胞 围产期 蒙古牛
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无效基因fruitless参与卤虫Artemia franciscana的生殖调控研究
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作者 李科 任翊卓 +2 位作者 韩学凯 刘雪 隋丽英 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期114-122,共9页
fruitless(fru)是在昆虫与甲壳动物求偶、交配行为以及生殖发育过程中发挥关键作用的基因。卤虫不仅是水产育苗的重要开口饲料,而且是生物学研究的重要实验生物。本实验通过对卤虫Artemia franciscana转录组的筛选,获得了fru基因的开放... fruitless(fru)是在昆虫与甲壳动物求偶、交配行为以及生殖发育过程中发挥关键作用的基因。卤虫不仅是水产育苗的重要开口饲料,而且是生物学研究的重要实验生物。本实验通过对卤虫Artemia franciscana转录组的筛选,获得了fru基因的开放阅读框(ORF)并进行生物信息学分析,利用qPCR技术研究了它在卤虫生殖腺发育的不同阶段的表达情况,最后利用RNAi显微注射技术,深入探索了它的功能。经过生物信息学分析,fru基因的ORF长度为1215 bp,其中包含了404个氨基酸,其分子量和等电点分别为45.19 kDa和5.28,属于酸性亲水性蛋白,且不含信号肽和跨膜结构;结构域预测显示fru存在BTB_POZ和HTH两个结构域,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷组成,三级结构与其对应。qPCR结果显示,fru基因的表达量在卵囊的晚期胚胎中表现出明显的增加趋势,其表达量显著高于其他发育阶段(P<0.01);而在精巢的未成熟期,fru基因的表达量也有所增加,其表达量显著高于成熟早期、中期和晚期(P<0.01)。经过RNA干扰,我们发现fru基因的表达量有了显著的下降(P<0.01),并且经过受到干扰的雌虫后代都为休眠卵。这表明fru基因对于A.franciscana的生殖和发育有着重要的影响,甚至可能是影响卤虫繁殖方式的关键因素。通过本次研究,我们获得了关于fru基因在卤虫生殖发育中的作用及其相关分子机制的重要信息,可以帮助我们更好地理解这一重要的生物学过程。 展开更多
关键词 卤虫 fru基因 性腺 基因表达特征 RNAI 生殖发育
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哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析 被引量:1
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作者 吴秀梅 徐黎明 +6 位作者 王晓玉 纪锋 赵景壮 刘淼 曹永生 卢彤岩 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期604-609,共6页
为了研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)在哲罗鲑Hucho taimen生长繁殖过程中所起的作用,根据Gen Bank收录的大西洋鲑IGF-Ⅱ基因开放阅读框序列(NCBI登录号:NM_001123647)设计用于哲罗鲑IGF-Ⅱ开放阅读框... 为了研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)在哲罗鲑Hucho taimen生长繁殖过程中所起的作用,根据Gen Bank收录的大西洋鲑IGF-Ⅱ基因开放阅读框序列(NCBI登录号:NM_001123647)设计用于哲罗鲑IGF-Ⅱ开放阅读框扩增的引物,以哲罗鲑肝脏总RNA反转录成的cDNA为模板,利用PCR方法克隆获得哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的开放阅读框。生物信息学分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的长度为645 bp,编码含有214个氨基酸残基的蛋白,该蛋白的相对分子质量为24554,等电点为9.92;哲罗鲑IGF-Ⅱ前肽由信号肽、B、C、A、D、E肽6部分构成;同源性比对和系统进化分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ与鲑科鱼类IGF-Ⅱ核苷酸序列同源性最高,聚为一支,其中与大西洋鲑的IGF-Ⅱ同源性最高(98.6%),该基因在进化过程中有着高度保守的进化特性;用荧光定量PCR技术检测2龄哲罗鲑IGF-Ⅱ基因在不同组织中的表达,结果显示,该基因在肝脏中表达量最高,在心脏、鳃、脾、后肠、头肾、胃中的表达量次之,而在前肠和脑中的表达量最低。 展开更多
关键词 哲罗鲑 胰岛素样生长因子-Ⅱ 基因表达特征
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植物络合素合酶及其基因研究进展 被引量:3
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作者 梅磊 朱晔 +2 位作者 肖钦之 陈进红 祝水金 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期530-538,共9页
植物络合素(phytochelatin, PC)能与重金属产生络合反应,在植物解除重金属毒害过程中起关键作用,其在生物体内的合成受植物络合素合酶(phytochelatin synthase, PCS)控制。深入研究植物络合素合酶对理解植物对抗重金属胁迫的机制,以及... 植物络合素(phytochelatin, PC)能与重金属产生络合反应,在植物解除重金属毒害过程中起关键作用,其在生物体内的合成受植物络合素合酶(phytochelatin synthase, PCS)控制。深入研究植物络合素合酶对理解植物对抗重金属胁迫的机制,以及运用基因工程手段创造工程植物来修复重金属污染环境具有重要意义。本文从PCS的双功能酶特性、基因表达和酶学特征、物种分布和亲缘关系、催化活性中心及激活模式5个方面作简要评述。PCS的主要功能为催化合成植物络合素,同时具有肽酶的副功能;PCS基因的表达是组成型的,在少数物种中,其表达也受Cd^(2+)等重金属离子诱导,而酶的活性受部分金属离子调控,其中以Cd^(2+)效果最为明显。PCS分布广泛,不是植物所独有的,在酵母、线虫等物种中同时存在,然而该酶在植物中同源性较高,在其他物种中较低,暗示其在植物对环境适应过程中具有某些重要作用。PCS的催化中心位于N-基端,其中与藻青菌中Cys70、His183和Asp201相对应的3个氨基酸在所有物种中为严格保守;PCS的重金属活化被认为与其含半胱氨酸有关,包含重金属直接接触活化和形成间接中间物活化2种假说。最后对PCS的多功能性、基因表达特性、酶激活机制及此基因的利用进行了展望,旨在为与PCS相关的研究提供参考。 展开更多
关键词 植物络合素合酶 双功能酶 亲缘关系 基因表达特征 活化机制
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Piwi基因参与两性卤虫(Artemia franciscana)的生殖调控研究 被引量:2
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作者 任翊卓 韩学凯 +3 位作者 左佳俊 欧阳雪梅 段虎 隋丽英 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1567-1576,共10页
Piwi(P-element induced wimpy testis)基因编码Piwi蛋白,在生殖干细胞的自我更新、减数分裂过程、RNA沉默和转录调控中起重要作用。为探究Piwi基因参与两性卤虫生殖发育的作用,从两性卤虫Artemia franciscana转录组中筛选获得Piwi基因... Piwi(P-element induced wimpy testis)基因编码Piwi蛋白,在生殖干细胞的自我更新、减数分裂过程、RNA沉默和转录调控中起重要作用。为探究Piwi基因参与两性卤虫生殖发育的作用,从两性卤虫Artemia franciscana转录组中筛选获得Piwi基因开放阅读框,进行序列分析和结构域预测等生物信息学分析,采用qPCR技术研究该基因在A.franciscana生殖腺发育不同时期表达特征,并利用RNAi显微注射技术探究其功能。生物信息学分析表明,A.franciscana Piwi基因的开放阅读框长2619 bp,编码872个氨基酸;Piwi基因编码的蛋白分子量为98.11 kDa,等电点为9.50,为碱性亲水性蛋白,无信号肽和跨膜结构;存在Piwi和PAZ结构域及ArgoL1结构域,二级结构以α-螺旋为主,三级结构与之对应;系统进化树显示A.franciscana与蚤状溞和大型溞的Piwi序列相似性最高。qPCR结果表明,Piwi基因在卵巢的卵黄发生晚期和晚期胚胎表达量最高,显著高于卵黄发生早期和早期胚胎(P<0.01);Piwi基因在精巢的未成熟期表达量最高,显著高于成熟早期、成熟中期和成熟晚期(P<0.01)。RNAi结果显示,该方法能显著降低Piwi基因的表达水平(P<0.01),并导致A.franciscana所产后代均为休眠卵,说明Piwi基因不但在A.franciscana生殖发育调控起重要作用,而且可能在其繁殖方式决定过程中起关键作用。研究结果为两性卤虫Piwi/piRNA功能和分子机制调控的研究提供了基础信息,将有助于揭示Piwi基因参与调控两性卤虫生殖发育机制。 展开更多
关键词 Artemia franciscana Piwi基因 生殖腺 基因表达特征 RNAI
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中华鲟精巢细胞系的建立和鉴定 被引量:1
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作者 叶欢 王艺舟 +4 位作者 杜浩 岳华梅 阮瑞 罗江 李创举 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1261-1268,共8页
为了开展中华鲟(Acipenser sinensis)种质资源保存及其精原干细胞体外培养的研究,采用蛋白酶消化法,对中华鲟精巢组织细胞进行原代培养,建立了中华鲟精巢细胞系(Acipenser sinensis testicular cell line,AST),经352d传代培养,已稳定传... 为了开展中华鲟(Acipenser sinensis)种质资源保存及其精原干细胞体外培养的研究,采用蛋白酶消化法,对中华鲟精巢组织细胞进行原代培养,建立了中华鲟精巢细胞系(Acipenser sinensis testicular cell line,AST),经352d传代培养,已稳定传至80代。中华鲟精巢细胞系形态主要呈类纤维状,培养基为DMEM,培养温度为25℃,最适血清浓度为15%。正常传代的AST细胞冻存、复苏后,经台盼蓝染色,约(81.36±1.13)%的细胞具有活性,复苏后细胞仍生长旺盛。染色体核型分析结果显示,第30代中华鲟精巢细胞系染色体数目分布在142—310,众数为264。通过RT-PCR检测发现,在P0和P1细胞中,Sertoli细胞特异表达基因(amh和gsdf)、Leydig细胞特异表达基因(cyp17a1)和生殖细胞特异表达基因(dazl、dnd和vasa)都有表达,且表达量与精巢中的相似;在P15、P30和P60细胞中,只有amh和vasa基因有微弱的表达,说明细胞系传代到了后期,只含有极少量的Sertoli细胞和生殖细胞。通过脂质体转染法将pEGFP-N3质粒转入AST细胞中,可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)。AST细胞系的建立为中华鲟种质资源的保存、精原干细胞的体外增殖与分化、基因功能等研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 精巢 AST细胞系 传代培养 核型分析 基因表达特征 中华鲟
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3种保虫宿主日本血吸虫特征性差异表达基因的筛选与验证
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作者 杨健美 石耀军 +7 位作者 冯新港 傅志强 苑纯秀 刘金明 洪炀 李浩 陆珂 林矫矫 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第3期279-283,共5页
目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行... 目的筛选日本血吸虫3种重要保虫宿主来源虫体的特征性差异表达基因,寻找可以用于鉴别这3种宿主来源虫体的遗传标记。方法日本血吸虫尾蚴人工感染黄牛、水牛和山羊,收集感染后49 d成虫,分别抽提RNA,逆转录成cD NA,体外转录为cRNA并进行片段化;采用定制的血吸虫芯片分别进行杂交,筛选每种宿主来源虫体的特征性差异表达基因。采用实时定量PCR法对所筛选差异表达基因的表达水平做进一步测定,验证芯片数据的结果,并对这些特征性差异表达基因进行验证。结果通过芯片杂交,分析筛选获得实验黄牛组来源虫体特征性差异表达基因3个,水牛组来源虫体4个,山羊组来源虫体7个。其中黄牛组2个、水牛组3个、山羊组5个特征性差异表达基因在另一批次3种宿主来源虫体的重复试验中得到验证。结论芯片杂交筛选出10个3种宿主来源虫体的特征性差异表达基因,这些基因可能可以作为这3种不同宿主来源虫体的遗传标记。 展开更多
关键词 日本血吸虫 保虫宿主 芯片 特征性差异表达基因
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绵羊BMP-15基因在不同产羔性状母羊中的表达量差异及分析 被引量:4
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作者 朱韶华 张利平 +2 位作者 马晓明 杜丽 张筱艳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1853-1858,共6页
选择分别影响Hanna、Cambridge与Belclare三个不同品种绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP-15)为候选基因,为了解不同产羔性能母羊BMP-15基因在不同组织中的表达差异,及其与产羔数性状关联性分析,采用... 选择分别影响Hanna、Cambridge与Belclare三个不同品种绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP-15)为候选基因,为了解不同产羔性能母羊BMP-15基因在不同组织中的表达差异,及其与产羔数性状关联性分析,采用real time RT-PCR的方法检测BMP-15基因在蒙古羊、无角陶赛特羊、小尾寒羊3种绵羊母羊的下丘脑、垂体、卵巢、肾脏、心脏5个组织中m RNA的分布。结果表明,在具有高繁殖力的蒙古羊双羔母羊、无角陶赛特羊双羔母羊中,BMP-15基因集中表达在肾脏和卵巢,其中肾脏的表达量高于卵巢(p〈0.05),而其余组织表达并不明显;在小尾寒羊多羔母羊中,BMP-15基因集中表达在肾脏、心脏和卵巢,其余组织表达并不明显。在蒙古羊及无角陶赛特羊卵巢中,双羔母羊的BMP-15基因的表达量均显著高于单羔母羊(p〈0.05),而小尾寒羊多羔母羊的卵巢中BMP-15基因的表达量也显著高于蒙古羊的单、双羔母羊。推测BMP-15基因可能是影响以上3个品种绵羊高产的候选基因之一。 展开更多
关键词 BMP-15 基因表达特征 单双羔母羊 实时荧光定量PCR
原文传递
Cloning and Expression Patterns of a Metallothionein-like GenehtMT2 of Helianthus tuberosus 被引量:3
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作者 常团结 陈蕾 +3 位作者 路子显 陈宛新 刘翔 朱祯 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第10期1188-1188,共1页
A novel cDNA sequencehtMT2, which encodes a type 2 metallothionein_like protein, was isolated from Helianthus tuberosus L. tuber cDNA library. The whole sequence is 509 bp, including an open reading frame (ORF) of 240... A novel cDNA sequencehtMT2, which encodes a type 2 metallothionein_like protein, was isolated from Helianthus tuberosus L. tuber cDNA library. The whole sequence is 509 bp, including an open reading frame (ORF) of 240 bp, a 5′ UTR of 62 bp and a 3′ UTR of 207 bp. Two genomic sequences covering the coding region ofhtMT2were cloned by PCR reaction. Sequence analysis revealed that the genomic sequences htMTG_1 of 986 bp and htMTG_2 of 982 bp were both composed of three exons and two introns. The deduced protein consisted of 79 amino acid residues with a predicted molecular weight of 7.8 ku (kD). Amino_terminal and carboxy_terminal domains contained 8 and 7 cysteine residues respectively, separated by a central cysteine free spacer. Sequence alignment revealed that the predicted protein ofhtMT2 was homologous to type 2 metallothioneins (MTs) of plants. Southern blotting analysis indicated that htMT2was encoded by a small multi_gene family in H. tuberosus genome. Northern blotting analysis showed that htMT2 transcripts were detected in stems, leaves and leafstalks, but no transcripts were detected in roots. The expression level in stems was the highest among the above tissues. Transcripts in stems were significantly reduced by Cu 2+ treatment. Judging from the homologies between the deduced HtMT2 and other type 2 plant metallothioneins as well as responses to metal ions, we believe thatwere cloned by PCR reaction. Sequence analysis revealed that the genomic sequences htMTG_1 of 986 bp and htMTG_2 of 982 bp were both composed of three exons and two introns. The deduced protein consisted of 79 amino acid residues with a predicted molecular weight of 7.8 ku (kD). Amino_terminal and carboxy_terminal domains contained 8 and 7 cysteine residues respectively, separated by a central cysteine free spacer. Sequence alignment revealed that the predicted protein ofhtMT2 was homologous to type 2 metallothioneins (MTs) of plants. Southern blotting analysis indicated that htMT2was encoded by a small multi_gene family in H. tuberosus genome. Northern blotting analysis showed that htMT2 transcripts were detected in stems, leaves and leafstalks, but no transcripts were detected in roots. The expression level in stems was the highest among the above tissues. Transcripts in stems were significantly reduced by Cu 2+ treatment. Judging from the homologies between the deduced HtMT2 and other type 2 plant metallothioneins as well as responses to metal ions, we believe that[ShtMT2 encodes a new type 2 metallothionein. 展开更多
关键词 plant MT-like protein cDNA sequence gene expression metal ion treatment INTRON
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Analysis of Gene Expression of Seven Isoforms of ADP-glucose Pyrophosphorylase in Rice Endosperm under Different Temperature Conditions
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作者 袁定阳 孙志忠 +1 位作者 谭炎宁 段美娟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第6期1226-1229,1233,共5页
[Objective] This study aimed to analyze the effects of temperature on the expression of AGPase isoform genes in rice endosperm during milk stage. [Method] Different temperature treatments (33 and 25 ℃ of daily mean ... [Objective] This study aimed to analyze the effects of temperature on the expression of AGPase isoform genes in rice endosperm during milk stage. [Method] Different temperature treatments (33 and 25 ℃ of daily mean temperature for high and normal temperature treatments, respectively) and the real-time fluorescence quantitative PCR ( FQPCR) were used to analyze the expression patterns of seven isoforms (AGPS1, AGPS2a, AGPS2b, AGPL1, AGPL2, AGPL3 and AGPL4) of ADPglucose pyrophosphorylase (AGPase) which was the key enzyme in starch synthesis and metabolism in rice endosperm of two rice varieties Teqing and Thai Fragrant Rice. [Result] The AGPase isoforms AGPS2b, AGPL2 and AGPL3 had much higher expression than the other four isoforms, thus they were thought to be the main expression patterns of AGPase in rice endosperm. The relative expressions of AGPL2 was the highest among all the isoforms. The relative expressions of AGPS2b, AGPL2 and AGPL3 were higher in the normal temperature treatment than in the high temperature treatment in both rice varieties. The relative expression of the three enzyme genes in milk stages in Teqing was higher than those in Thai Fragrant Rice under different temperature treatments. [Conclusion] This study provides a theoretical basis for further use of molecular biology techniques to cultivate stable high-quality rice varieties. 展开更多
关键词 RICE ADP-glucose pyrophosphorylase (AGPase) isoforms Gene expression characteristics Real-time fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR)
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Reduced expression of E-cadherin/catenin complex in hepatocellular carcinomas 被引量:34
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作者 Bo Zhai He-Xin Yan +3 位作者 Shu-Qin Liu Lei Chen Meng-Chao Wu Hong-Yang Wang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第37期5665-5673,共9页
AIM: TO examine the immunoreactivity of E-cadherin and four subtypes of catenin family in human hepatocellular carcinomas (HCCs) and to investigate the correlation between expression of E-cadherin/ catenin complex ... AIM: TO examine the immunoreactivity of E-cadherin and four subtypes of catenin family in human hepatocellular carcinomas (HCCs) and to investigate the correlation between expression of E-cadherin/ catenin complex and clinicopathologic parameters of HCC patients. METHODS: An immunohistochemical study for E-cadherin and catenins was performed on 97 formalin-fixed, paraffin-embedded specimens of HCC. RESULTS: Reduced expression of E-cadherin, ^-, 13-, y-catenin and p120 was observed in 69%, 76%, 63%, 71% and 73%, respectively. Both expressions of E-cadherin and catenin components were significantly correlated with tumor grade (P = 0.000). It showed significant difference between expression of catenin members and tumor stage (P = 0.003, P = 0.017, P = 0.007 and P = 0.000, respectively). The reduced expression of E-cadherin in HCCs was significantly correlated with intrahepatic metastasis (IM) and capsular invasion (P = 0.008, P = 0.03, respectively). A close correlation was also observed between the expression of catenins and the tumor size (P = 0.002, P = 0.034, P = 0.016 and P = 0.000, respectively). In addition, the expression of each catenin was found correlated with IM (P = 0.012, P = 0.049, P =0.026 and P = 0.014, respectively). No statistically significant difference was observed between the expression level of E-cadherin/catenin complex and lymph node permission, vascular invasion and satellite nodules. Interestingly, only expression of p120 showed correlation with AFP value (P = 0.035). The expression of E-cadherin was consistent with α-, β-, γ-catenin and p120 expression (P = 0.000). Finally, the abnormal expression of E-cadherin/catenin complex was significantly associated with patients' survival (P = 0.0253, P = 0.0052, P = 0.003, P = 0.0105 and P = 0.0016, respectively). Nevertheless, no component of E-cadherin/catenin complex was the independent prognostic factor of HCC patients. CONCLUSION: Down-regulated expressions of E-cadherin, catenins and p120 occur frequently in HCCs and contribute to the progression and development of tumor. It may be more exact and valuable to detect the co-expression of E-cadherin/catenin complex than to explore one of them in predicting tumor invasion, metastasis and patient's survival. 展开更多
关键词 E-CADHERIN Hepatocellular carcinomas Histologic feature SURVIVAL
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Correlation of IL-8 with induction, progression and metastatic potential of colorectal cancer 被引量:12
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作者 Claudia Rubie Vilma Oliveira Frick +6 位作者 Sandra Pfeil Mathias Wagner Otto Kollmar Berit Kopp Stefan Grber Bettina M Rau Martin K Schilling 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第37期4996-5002,共7页
AIM: To investigate the expression profile of IL-8 in inflammatory and malignant colorectal diseases to evaluate its potential role in the regulation of colorectal cancer (CRC) and the development of colorectal liv... AIM: To investigate the expression profile of IL-8 in inflammatory and malignant colorectal diseases to evaluate its potential role in the regulation of colorectal cancer (CRC) and the development of colorectal liver metastases (CRLM).METHODS: IL-8 expression was assessed by quantitative real-time PCR (Q-RT-PCR) and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in resected specimens from patients with ulcerative colitis (UC, n = 6) colorectal adenomas (CRA, n = 8), different stages of colorectal cancer (n = 48) as well as synchronous and metachronous CRLM along with their corresponding primary colorectal tumors (n = 16).RESULTS: IL-8 mRNA and protein expression was significantly up-regulated in all pathological colorectal entities investigated compared with the corresponding neighboring tissues. However, in the CRC specimens IL-8 revealed a significantly more pronounced overexpression in relation to the CRA and UC tissues with an average 30-fold IL-8 protein up-regulation in the CRC specimens in comparison to the CRA tissues. Moreover, [L-8 expression revealed a close correlation with tumor grading. Most interestingly, IL-8 up-regulation was most enhanced in synchronous and metachronous CRLM, if compared with the corresponding primary CRC tissues. Herein, an up to 80-fold IL-8 overexpression in individual metachronous metastases compared to normal tumor neighbor tissues was found.CONCLUSION: Our results strongly suggest an association between IL-8 expression, induction and progression of colorectal carcinoma and the development of colorectal liver metastases. 展开更多
关键词 INTERLEUKIN-8 Gene expression profiling RNA and protein expressioni Colorec cal cancer Colorectalliver metastases
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Microarray-based analysis for hepatocellular carcinoma: From gene expression profiling to new challenges 被引量:5
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作者 Yutaka Midorikawa Masatoshi Makuuchi +1 位作者 Wei Tang Hiroyuki Aburatani 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第10期1487-1492,共6页
Accumulation of mutations and alterations in the expression of various genes result in carcinogenesis,and the development of microarray technology has enabled us to identify the comprehensive gene expression alteratio... Accumulation of mutations and alterations in the expression of various genes result in carcinogenesis,and the development of microarray technology has enabled us to identify the comprehensive gene expression alterations in oncogenesis.Many studies have applied this technology for hepatocellular carcinoma(HCC),and identified a number of candidate genes useful as biomarkers in cancer staging,prediction of recurrence and prognosis,and treatment selection.Some of these target molecules have been used to develop new serum diagnostic markers and therapeutic targets against HCC to benefit patients.Previously,we compared gene expression profiling data with classification based on clinicopathological features,such as hepatitis viral infection or liver cancer progression.The next era of gene expression analysis will require systematic integration of expression profiles with other types of biological information,such as genomic locus,gene function,and sequence information.We have reported integration between expression profiles and locus information,which is effective in detecting structural genomic abnormalities,such as chromosomal gains and losses,in which we showed that gene expression profiles are subject to chromosomal bias.Furthermore,array-based comparative genomic hybridization analysis and allelic dosage analysis using genotyping arrays for HCC were also reviewed,with comparison of conventional methods. 展开更多
关键词 Liver cancer IVlicroarray
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mRNA Expression of Chemokine Receptors on Peripheral Blood Mononuclear Cells and Correlation with Clinical Features in Systemic Lupus Erythematosus Patients 被引量:2
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作者 Yu-mei Li Zhi-qiang Chen +4 位作者 Xu Yao Ai-zhen Yang An-sheng Li Dong-ming Liu Juan-qin Gong 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2010年第3期162-168,共7页
Objective To investigate the expressions of chemokine receptors and interleukin (IL) receptors on the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from systemic lupus erythematosus (SLE) patients and their correla... Objective To investigate the expressions of chemokine receptors and interleukin (IL) receptors on the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from systemic lupus erythematosus (SLE) patients and their correlations with clinical features as well as SLE disease activity index (SLEDAI). Methods The mRNA expressions of chemokine receptors and IL receptors on PBMCs of 93 SLE patients and 30 healthy controls were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction, including CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8, CXCR3, CXCR5, CX3CR1, XCR1, IL-4R, and IL-10R. The clinical features of SLE patients were recorded. The correlations of chemokine receptors and IL receptors mRNA expressions with clinical features as well as SLEDAI were assayed using linear regression analysis. Results The level of CCR5 mRNA in SLE patients (including active and inactive SLE) was signifi- cantly higher than that in healthy controls (P〈0.05), and there was no significant difference between active and inactive patients in this respect (P〉0.05). CX3CR1 mRNA expression significantly increased from healthy control to inactive SLE to active SLE in sequence. The others (except for CCR8, CXCR3, and IL-1 OR) in active SLE patients weresignificantly higher than those in both inactive SLE patients and healthy controls (all P〈0.05). There were positive correlations between SLEDAI and CCR2 (r=0.424, t=4.313, P〈0.001), CCR3 (r=0.518, t=5.410, P〈0.001), CCR4 (r=0.376, t=3.851, P〈0.001), CCR6 (r=0.457, t=4.513,P〈0.001), CXCR5 (r=0.455, t=4.629, P〈0.001), CX3CR1 (r=0.44-5, t=4.523, P〈0.001), as well as XCRI (r=0.540, t=5.445, P〈0.001). And CCR5 mRNA expression level was positively correlated with IL-4R mRNA (r=0.313, t=2.353, P〈0.05). The patients with myositis and cutaneous vasculitis simultaneously showed lower levels of CCR5 and CX3CRI, and CCR5 expression was negatively correlated with the scores of SLEDAI in SLE cases accompanied by photosensitivity (r=0.426, t=- 2.155, P〈0.05). Conclusion Increased expressions of CCR5 and CX3CRI on PBMCs may be indicators in clinical survey for SLE. 展开更多
关键词 systemic lupus erythematosus chemokine receptors peripheral bloodmononuclear cell
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