减毒伤寒杆菌为载体的甲肝疫苗候选株的构建和免疫应答

目的 :构建以减毒鼠伤寒杆菌为载体的甲肝疫苗候选株 ,并证明其免疫源性。方法 :将甲型肝炎病毒编码区 c DNA插入高效表达质粒 p BV2 2 1。转化大肠杆菌 DH5 α。用核酸探针和限制性内切酶筛选和鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒用电转移法转化减毒鼠伤寒杆菌 BRD5 0 9。用抗生素平板筛选法筛选出转化成功的伤寒杆菌 ,用温度诱导法诱导目的基因在伤寒杆菌中表达。结果 :蛋白质印迹法 (Western blotting)和酶联免疫吸附测定(EL ISA)检测表明 ,表达蛋白可与人抗甲型肝炎 Ig G发生特异性反应。用此伤寒杆菌口服或腹腔注射免疫小鼠 ,小鼠血清检测到抗甲型肝炎病毒的抗体。结论 :以减毒鼠伤寒杆菌为载体的甲肝疫苗构建成功 ,并可在体内外产生免疫应答。