G-box和G-box结合蛋白在植物基因诱导表达中的转录调控作用

文章就G-box与其它顺式作用元件的组合调控作用,以及G-box结合蛋白通过二聚体化、磷酸化、亚细胞定位等调控方式在植物基因诱导表达中的调控作用作了评述。

氯虫苯甲酰胺诱导甜菜夜蛾细胞色素P450基因上调表达

【目的】明确氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾Spodoptera exigua（Hübner）细胞色素P450基因的诱导表达作用。【方法】采用O-脱乙基香豆素法研究了低剂量氯虫苯甲酰胺处理对甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性的影响,应用Realtime PCR方法测定了其对P450基因（CYP9A9,CYP4G37,CYP4S11和CYP6B）和NADPH细胞色素P450还原酶基因（HQ852049）表达的影响。【结果】氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾P450酶及相关基因的诱导作用均表现出时间效应和剂量效应,。甜菜夜蛾4龄幼虫取食0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺饲料至5龄,在蜕皮后6-36 h内,其P450s酶活性增加为对照组的1.90-2.92倍,诱导效应高于0.01 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组（其P450s酶活性为对照组的1.11-1.62倍）。同时,0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组甜菜夜蛾中肠P450基因CYP9A9,CYP4G37和CYP6B mRNA的相对表达量分别上升为对照组的1.97-3.95,2.46-4.29及1.53-4.48倍,NADPH细胞色素P450还原酶基因HQ852049的相对表达量亦增加为对照的1.85-4.08倍。【结论】结果提示,氯虫苯甲酰胺可能通过诱导3种P450基因及细胞色素P450还原酶基因HQ852049基因mRNA的上调表达而增强了甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性。

板蓝根诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究

目的研究板蓝根体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)是否诱导表达具有抗菌活性的人-β-防御素-2(HBD-2)表达,并进一步探讨该表达是否存在浓度和时间依赖性效应,为进一步在动物水平探讨HBD-2的表达与中药之间的量效关系及时效关系提供依据。方法体外培养SPC-A-1细胞,设置板蓝根5个浓度梯度,另设阳性对照和空白对照各1个,分别刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2mRNA的表达情况,获取最佳表达浓度;再以最佳浓度经不同时间点刺激SPC-A-1细胞,得到表达诱导时间和持续时间。结果研究显示板蓝根能够上调(SPC-A-1)细胞HBD-2mRNA的表达,且这种表达与板蓝根具有浓度和时间依赖性,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,HBD-2mRNA的表达达到最高。结论板蓝根可诱导HBD-2基因的表达,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,其表达达到最高。

应用cDNA-AFLP技术分离草菇冷诱导表达基因

采用cDNA-AFLP技术筛选获得了5个草菇冷诱导表达基因片段VC1、VC2、VC3、VC4和 VC5。测序结果表明,5个DNA片段大小分别为247bp、219bp、172bp、350bp和171bp。同源性BLAST 搜索结果显示,VC1、VC2、VC3、VC4和VC5片段目前都没有同源的核酸序列;VC1片段翻译的蛋白质序 列与粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)的假拟蛋白具有一定的同源性,VC2片段翻译的蛋白质序列与水稻的 AMP脱氨酶具有一定的同源性,VC3片段翻译的蛋白质序列与Daniorerio的糖原合酶激酶3α具有较高的 同源性,VC4片段翻译的蛋白质序列与Leuconostocmesenteroides的假拟蛋白有一定的同源性,VC5片段翻译 的蛋白质序列没有搜索到同源序列。

抑制差减杂交法分离玉米幼苗淹水诱导表达基因(英文)

以淹水处理 (submergence_treated ,ST)的玉米 (ZeamaysL .)幼苗根部cDNA为目标群体 ,未处理 (untreated ,UT)的玉米幼苗根部cDNA为对照群体 ,进行抑制差减杂交。用经过UT差减的STcDNA构建了一个含有大约 2 0 0 0个独立克隆的差减文库。对随机挑取的 40 8个克隆进行差异筛选 ,获得了 1 84个在ST中特异表达或表达增强的候选克隆。对其中 1 55个cDNA克隆测序并去除重复克隆后 ,共得到 95个差异表达的cDNA片段。GenBank中BLAST查询结果表明 :6个克隆为已知的玉米核苷酸序列 ;6 8个克隆与已知基因或EST序列部分区域的同源性为 6 0 %～90 % ;2 1个克隆在GenBank中无法查到对应的同源序列 ,可能代表了新基因 ,或者由于序列位于变异丰富的 3′端而无法查到与其他物种基因的同源性。

Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统

Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用 。

水稻苗期低温诱导表达新基因OsCOI的克隆、过表达载体的构建与转化

水稻苗期冷害是导致水稻减产的重要因素之一。为了发掘新的耐冷基因、诠释其耐冷分子机制并应用分子育种的手段提高水稻苗期耐冷性,前期已通过Northern表达分析,从已构建的水稻苗期低温诱导表达正向抑制差减cDNA文库中,发现了一个受低温诱导上调表达的功能未知的C2H2型锌指结构域蛋白新基因(特命名为OsCOI)。本研究进一步通过RT-PCR的方法从水稻中克隆了该基因,构建了其植物过表达载体,并通过农杆菌介导转入水稻基因组中,获得了其过表达转基因水稻株系,为进一步研究该基因的功能并探讨其在水稻耐冷分子育种中的应用价值奠定了基础。

利用Tet-OnTM基因表达系统直接克隆 p53下游基因(英文)

目的 直接克隆 p5 3下游基因 ,并对其功能进行初步研究。方法 采用哺乳动物细胞诱导表达系统 -Tet-onTM基因表达系统 ,建立 p5 3基因诱导表达可调控的细胞系 ;通过mRNA差异显示技术直接克隆p5 3下游基因 ,并利用原位杂交技术检测其在小鼠胚胎发育过程中的表达。结果 克隆到一个新的p5 3下游基因侯选基因 ,并检测到它在小鼠胚胎发育过程中有特异性表达。结论 直接克隆 p5 3下游基因的成功 ,为进一步研究 p5 3基因的功能奠定了基础。

植物信号分子——细菌基因表达诱导剂

在植物和微生物的相互作用过程中,微生物可通过植物释放的特定化合物作为化学信号。这样的信号对微生物产生即刻响应,由此微生物产生为侵袭宿主植物所必须的基因表达。自1985年 Stachel 首次报道烟草根部受伤细胞渗出物中含有乙酰丁香酮(Ⅰ)和α-羟基乙酰丁香酮(Ⅱ)可活化土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的毒性基因(vir)后,正式提出了植物信号分子作为基因表达激活剂的概念。

内皮素基因的克隆与表达调控研究

内皮素作为强效缩血管肽和血管平滑肌细胞有丝分裂原,在高血压和动脉粥样硬化的发生过程中起着重要作用。研究内皮素基因的表达调控机理,不仅对阐明内皮素合成与分泌的调控过程,而且对揭示高血压及动脉粥样硬化时血管平滑肌细胞过度增生的本质都有重要的意义。本研究利用现代分子生物学实验技术对内皮素基因的表达调控机理。

抗体阳性MS患者3种IFNβ诱导基因表达的多样性分析

Some interferon beta (IFNβ)-treated patients with multiple sclerosis develop antibody-mediated decreased bioactivity with resultant loss of therapeutic effect. The authors developed realtime multiplex reverse transcriptase PCR to measure expression of three IFNβ-inducible genes to directly assess IFNβbioactivity in patients with neutralizing antibodies (NAbs). The three genes responded in tandem. Correlation of NAb level with bioactivity at low/ moderate NAb levels was poor, indicating that for such patients, direct measurement of IFNβbioactivity is most reliable.

草菇S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶同源基因Cor3低温条件下的表达变化

将草菇(Volvariella volvacea)菌株V23和耐低温诱变菌株VH3的菌丝体在4℃下处理不同时间后,采用荧光定量PCR技术中的双标准曲线法研究了S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶同源基因Cor3的表达变化。结果显示,低温处理后,草菇V23菌株的Cor3基因表达量随处理时间的延长呈不断下降趋势,10h时,其表达量仅为对照的7%。而VH3菌株Cor3基因4℃处理2h表达量明显上升,为对照的1.8倍,处理4h和6h表达量降低,分别为对照的80%和90%,处理8h的表达量又上升,为对照的1.4倍,随后下降,处理10h表达量最低,为对照的60%。根据结果初步推测Cor3基因与草菇低温耐受性具有一定相关性。

一个新型原核诱导表达系统的建立

群体感应是细菌依赖于种群密度进行信息交流、协调群体行为并调控基因表达的一种方式。海洋发光弧菌Vibriofischeri利用该机制合成化学物质N-酰基-高丝氨酸内酯(AHLs),与LuxR蛋白结合,随后驱动下游生物荧光基因的高量表达。基于植物叶绿体起源于原始古细菌-蓝藻的假设以及叶绿体内的转录、翻译机制与原核生物高度近似,构建了luxR基因调控下游报告基因GFP表达的叶绿体遗传转化载体。将该载体转入大肠杆菌后,当无外加信号物质AHLs时,GFP不表达;而外加AHLs后,GFP大量表达,证明luxR和GFP基因的组合在大肠杆菌中是理想的化学诱导基因表达系统,可应用于大肠杆菌基因功能的研究。

后基因组时代基因功能分析的策略

人类基因组计划的完成标志着生命科学已经开始迈进后基因组时代 ,大规模基因的功能研究正成为生命科学研究的热点。基因功能的分析方法日趋成熟和多样化 ,综述了基因敲除、反义技术、“dominantnegative”策略 (“显性失活”策略 )、基因诱导超表达、RNA干涉以及生物信息学等基因功能分析策略的特异性及其优缺点。

植物抗冻基因

介绍植物抗寒冻基因研究中一些已分离和鉴定出的低温诱导表达基因及其抗寒功能、低温信号转导以及调控方式的研究进展。

拟南芥ICE1基因转化水稻的进一步研究

利用农杆菌介导的转基因技术,成功地将由启动子(35S和rd29A)调控的拟南芥ICE1基因导入垦鉴稻10号中,经PCR和Southern检测确认目的基因已整合到水稻基因组中。潮霉素抗性测定结果表明,与未转基因水稻相比,T1代表现出对潮霉素较高的抗性和孟德尔式的单位点遗传;抗寒能力检测结果表明,在同等低温胁迫条件下T1代转基因株系的死亡率明显低于未转基因对照;脯氨酸含量测定结果表明,低温处理后T1代植株脯氨酸含量增幅明显高于未转基因对照;上述结果表明,转ICE1水稻提高了抗寒能力。

HRE介导的NT-3表达上调减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的在大鼠局灶性脑缺血模型中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)缺血/低氧调控表达及其对缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法将重组反转录病毒(RV-5HRE-NT3及RV-5HRE-EGFP)或0.9%氯化钠溶液(对照组)注射入大鼠脑内3 d后,用大脑中动脉线栓阻塞法(t MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。用免疫组织化学染色法和Western blot法检测NT-3的表达,用TTC染色法检测脑梗死体积,用TUNEL染色法检测细胞凋亡,用Reglodi评分法检测大鼠神经功能情况。结果大鼠t MCAO 3 d后RV-5HRE-NT3组中NT-3阳性细胞数明显高于对照组和RV-5HRE-EGFP组,且着色较深;t MCAO后第1、3、7和14天,RV-5HRE-NT3组中的NT-3蛋白表达均明显高于对照组和RV-5HRE-EGFP组(P<0.05)。在RV-5HRE-NT3组中,t MCAO 3 d大鼠脑梗死体积百分比明显减小(P<0.05),t MCAO 3和7 d后缺血半暗带凋亡细胞百分比也明显减少(P<0.05)。RV-5HRE-NT3注射可以改善大鼠t MCAO后的神经功能障碍。结论 HRE介导的NT-3低氧反应性表达上调可以减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注脑损伤。