直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞中T细胞受体基因谱型特征

目的 分析直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞 (tumor -infiltatinglymphocytes ,TIL)克隆的TCRβ基因谱型及CDR3区氨基酸序列 ,了解直肠癌TIL抗肿瘤细胞克隆的基因特征。方法 采用RT -PCR方法扩增直肠癌肿瘤组织、术前外周血和术后外周血T淋巴细胞TCTβ基因的 2 4个不同V基因片段 ,经过特殊的测序凝胶分离和银染色后 ,确定它们的TCRβ基因表达谱型。通过对PCR产物直接测序的方法 ,分析克隆性增殖的特征和CDR3区氨基酸序列。结果 直肠癌肿瘤组织TIL的TCRβ基因谱型中具有克隆性表达 ,表明直肠癌TIL是呈寡克隆性增生的淋巴细胞 ;来自 2例不同患者的肿瘤组织TIL中单克隆性表达的TCRβV11基因具有安全相同的DNA和氨基酸序列 ;其余四个寡克隆的CDR3区存在共同保守的氨基酸序列G/xGGN/xY(D)EQ ,这些序列可能直接接触直肠癌肿瘤组织相关抗原。结论 直肠癌肿瘤组织TIL细胞中存在特异性识别肿瘤相关抗原肽的T淋巴细胞克隆。

用TCRβ链可变区谱型图分析疾病中T淋巴细胞克隆的变化

T细胞是通过T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)识别抗原,根据基因重排所产生的TCRβ链可变区(BV)基因可以将T细胞克隆分为24个基因家族。利用T细胞表面的TCRBV片段的不同可以建立TCRBV基因谱型图,分析并识别具有不同功能的T细胞克隆,了解各种T细胞克隆在恶性疾病及自身免疫性疾病中的功能和增殖情况。体外扩增具有特异性抗肿瘤活性的T细胞,再将其输给患者,有可能发展为肿瘤免疫治疗的新方法。通过对TCRBV的基因特征分析,可以发展抗TCR的单克隆抗体或者DNA疫苗抑制自身免疫病相关性或者肿瘤性T细胞生长,以治疗这些难治性疾病。TCR转基因技术还能使普通T细胞修饰成抗肿瘤T细胞。本文就T细胞受体特征、TCRBV基因谱型分析方法、TCRBV片段与自身免疫性疾病、血液病中增殖的T细胞克隆,识别肿瘤抗原肽的T细胞的寡克隆增生和TCRBV谱型分析与骨髓移植作一概述。

肺结核患者外周血αβT细胞CDR3谱系研究

目的探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCRVα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T细胞CDR3区进行序列分析。结果6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα,24Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布(gaussian distribution),6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α,β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论肺结核患者活动期外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα,Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。

金黄色葡萄球菌的耐药性分析及基因分型研究

目的通过分析上海地区院内分离金黄色葡萄球菌的药敏谱型及对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)进行基因谱型的研究,了解金黄色葡萄球菌的院内流行状况。方法对临床分离出的43株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和SCCmec基因盒的多重PCR检测,并将结果整合后用MEGA3.1软件分析其进化相关关系。结果药敏结果显示43株金葡菌对青霉素和甲氧西林的耐药率最高。甲氧西林的耐药率达到62.8%。MecA阳性菌株SCCmec的分型显示均为II型或III型,且所占比例相近,未见I型和IV型。进化树分析发现了在同一医院中亲缘关系相近的菌株,为院内感染流行株。结论MecA基因介导的MRSA在分离菌株中所占比例高,存在院内感染爆发性流行。

抗磷脂综合征识别相关抗原的T细胞克隆受体分析

为了了解识别抗磷脂综合征相关抗原的T细胞受体特征,用基因谱型图的方法分析一例抗磷脂综合征患者体内的T细胞特征。结果发现优势T细胞呈寡克隆性增生;进一步分析2群主要T细胞克隆的T细胞受体(TCR)基因特征表明,其TCRβ链基因主要由TCRβV8和TCRβV23家族基因编码,T细胞接触抗原的TCRβVCDR3区氨基酸序列分别是CASSLLVAGGPRAYNEQFFGPG和CASSLAGFGQPQHFGDG,其CDR3区模体YNEQFF-GPG和QHFGDG与报道的特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮高度一致。结论这些自身免疫病增殖的T细胞克隆可能识别同样的抗原。

肺结核感染金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药研究

目的通过对肺结核患者分离出的金黄色葡萄球菌进行基因谱型和药敏检测研究，了解肺结核并发金黄色葡萄球菌的院内流行状况。方法对，晦床分离出的30株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和SCCmec基因盒的多重PCR检测。结果药敏结果显示30株金黄色葡萄球菌对青霉素和甲氧西林的耐药率最高。甲氧西林的耐药率达到62．8％。MecA阳性菌株SCCmec的分型显示均为Ⅱ型或Ⅲ型，且所占比例相近，未见Ⅰ型和Ⅳ型。结论肺结核患者并发金黄色葡萄球菌耐药性普遍，MecA基因介导的MRSA在分离菌株分型以Ⅱ型或Ⅲ型为主。