IL-2基因转染的人卵巢癌细胞对人外周血淋巴细胞杀瘤功能的影响

目的 :研究白介素 - 2 (interleukin- 2 ,IL - 2 )基因转染的人卵巢癌细胞对人外周血淋巴细胞 (peripheral bloodiymphocytes,PBL)杀瘤活性的影响。方法 :采用脂质体携带 IL- 2基因转染人卵巢癌细胞系 3AO细胞 ,与正常人 PBL 混合培养 ,利用 MTT法测定混合培养后 PBL对已转染 IL- 2基因的 3AO细胞抑制率。结果 :基因转染后 3AO细胞生长良好 ,光镜形态下未观察到凋亡改变 ;转染后的 3AO细胞转录并产生 IL - 2 m RNA;PBL对转基因 3AO细胞的抑制率明显高于无基因转染的 3AO细胞的抑制率 (P<0 .0 1)。结论 :IL- 2基因修饰的卵巢癌细胞能够改变淋巴细胞的功能而发挥其抗肿瘤作用。

IL-2基因转染对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和MHC-Ⅱ的影响

目的 研究白介素 -2(IL-2)基因转染对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和主要组织相容性复合体 -Ⅱ(MHC -Ⅱ )的影响。方法 将IL-2基因质粒DNA导入人卵巢癌细胞系 (3AO) ,用逆转录PCR(RT-PCR)观察转染后3AO细胞IL-2mRNA表达、细胞免疫化学SP法观察细胞增殖和MHC -Ⅱ表达、原位末端标志法观察凋亡。结果 显示3AO细胞转染60h后可表达IL -2mRNA ,增殖细胞核抗原表达减弱 ,MHC -Ⅱ抗原表达增强 ,未观察到凋亡改变。结论 IL -2基因导入3AO细胞可通过抑制瘤细胞增殖 。

hEGF转基因表皮细胞的制备及其EGF蛋白表达

目的 应用G41 8筛选转染EGF基因后的转基因上皮细胞 ,并测定外源性基因在转基因细胞中的稳定表达。方法 选用构建的pBK Signal EGF质粒 ,在脂质体LipofectAMINE的介导下 ,转染培养 60 %～ 70 %连片的人表皮细胞 ,然后用G41 8进行筛选出稳定表达的细胞克隆。大量培养传代后 ,通过ELISA试剂盒检测细胞培养上清中表皮细胞生长因子 (EGF)外源性基因稳定表达水平。结果 ①人表皮细胞生长因子hEGF质粒可成功转到人表皮细胞中 ;②通过G41 8可以筛选出含EGF的转基因细胞 ;③hEGF表达水平在细胞培养上清中可以测出。结论 ①通过G41 8可以筛选出转EGF基因的表皮细胞 ;②采用体外培养的第

pCD-rbFGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

为了构建碱性成纤维细胞生长因子 ( basic fibroblastgrowth factor,b FGF)真核表达质粒 ,并探讨应用 b FGF基因治疗骨科各种疾患的可能性 ,将鼠碱性成纤维细胞生长因子 c DNA克隆至真核表达载体 pc DNA3中 ,构建了重组质粒 p CD- rb FGF。通过 L iofectin介导将 p CD- rb FGF转染兔成骨细胞 ,经免疫组化检测证实兔成骨细胞获得了 b FGF的瞬时表达。提示该 b FGF真核表达质粒有效 ,可用于进一步基因治疗研究。

突变型端粒酶逆转录酶基因转染对膀胱癌细胞T24增殖的影响

目的 探讨转染缺失突变的人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因对膀胱癌细胞株T2 4端粒酶活性和体外增殖的影响 ,为膀胱肿瘤基因治疗提供新的基因靶点。 方法 采用DNA 磷酸钙共沉淀法 ,将绿色荧光蛋白基因标记的含突变型hTERT真核表达载体 pEGFP hTERT导入人膀胱癌细胞株T2 4中。应用荧光显微镜、端粒酶PCR ELISA法、与衰老相关的 β 半乳糖苷酶染色、软琼脂集落形成试验、裸鼠皮下成瘤试验等方法动态观察转染细胞中端粒酶活性及对细胞恶性表型的影响。 结果 在转染 pEGFP hTERT细胞中可见与突变型hTERT基因融合的绿色荧光蛋白稳定表达于细胞核内 ,转染细胞端粒酶活性降低 ,衰老相关 β 半乳糖苷酶表达增加 ,软琼脂中集落形成减少 ,裸鼠成瘤性降低。与转染空载体组及未转染组细胞相比 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。 结论 转染突变型人端粒酶逆转录酶基因hTERT能抑制膀胱癌细胞T2 4的端粒酶活性 ,促进其衰老并逆转膀胱癌细胞的恶性表型 。