内皮型一氧化氮合酶基因转移预防移植血管狭窄

探讨内皮型一氧化氮合酶基因转移防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性。构建带有内皮型一氧化氮合酶基因的复制缺陷型重组腺病毒载体和腺病毒空载体。采用山羊自体颈静脉作血管桥 ,在体外转染带有内皮型一氧化氮合酶基因的腺病毒载体 (实验组 )和腺病毒空载体 (对照组 ) ,然后旁路移植法端—侧吻合到颈动脉上。术后 30天 ,通过免疫组织化学染色 ,测定静脉桥3H TDR的掺入量和静脉桥内膜厚度及管腔狭窄面积百分比 ,观察内皮型一氧化氮合酶基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生情况。结果发现 ,与对照组相比 ,转染后30天 ,实验组静脉桥中外源性内皮型一氧化氮合酶仍有功能表达 ,静脉桥3H TDR掺入量明显减少 (P <0 .0 1) ;静脉桥平均内膜增生厚度和管腔狭窄面积百分比明显低于对照组 (P <0 .0 1)。结果提示 ,内皮型一氧化氮合酶基因转移可以有效抑制移植血管新生内膜的增生 ,对预防移植血管狭窄有一定的作用。

eNOS基因转染预防静脉移植血管再狭窄

目的 应用含牛内皮型一氧化氮合成酶 (e NOS)基因重组腺病毒 (Ad5 CMVNOS )转染静脉移植血管 ,观察 e NOS基因预防静脉移植血管再狭窄的作用。 方法 将 2 1只杂种犬分为 3组 ,手术对照组、Ad5 CMVL ac- Z(含大肠杆菌 β半乳糖苷酶基因重组腺病毒 )对照组和 Ad5 CMVNOS 干预组。在犬颈静脉、颈动脉旁路血管移植术中分别应用 Ad5 CMVNOS 病毒液或 Ad5 CMVL ac- Z病毒液常温浸泡法感染静脉移植血管 30分钟 ,术后 2 8天病理切片观测移植血管新内膜增生状况。 结果 与正常犬颈外静脉相比 ,手术对照组、Ad5 CMVL ac- Z对照组和Ad5 CMVNOS 干预组颈外静脉移植血管内膜 /中膜比较均有不同程度增加 (P<0 .0 5 ) ,但 Ad5 CMVNOS 组内膜 /中膜比显著低于另外 2个对照组 (P<0 .0 5 ) ,新内膜增生明显减轻。 结论 Ad5 CMVNOS 感染静脉旁路移植血管对预防再狭窄有一定作用。

腺病毒介导血管内皮生长因子基因转移预防再狭窄的实验研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对大鼠颈总动脉损伤后新生内膜增生的影响。方法 将颈总动脉球囊损伤的大鼠分为3组,用局部灌注法将50μl溶液注射至颈总动脉。20min后恢复血流。分别于14d和28d处死大鼠。观察VEGF基因转移对再内皮化及内膜增厚的影响。结果 与两对照组比较,动脉损伤后14d和28d时,VEGF基因转移加速血管再内皮化,减少内皮缺失区域(P<0.05);且显著抑制动脉损伤后新生内膜增厚(P<0.01)。结论 重组腺病毒介导VEGF基因转移对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。

抑制C-myc基因表达对移植血管狭窄的影响

目的 :观察放射菌素D对移植血管中C myc基因表达及内膜增殖的影响。方法 :建立大鼠自体静脉移植模型 ,实验组分别于术前、术后应用不同剂量放射菌素D(0 0 15 ,0 .15mg/kg) ,对照组仅做血管移植。分别于术后2h及 1周切取移植静脉 ,应用原位杂交方法检测C mycmRNA表达 ,应用计算机图像分析仪测量内膜厚度。结果 :高剂量组C mycmRNA表达较对照组明显减少 (6 5 % ,12 5 % ;P <0 0 1) ,移植血管内膜增殖受到明显抑制 (18 7,2 8 5 μm ;P <0 0 1)。结论 :大剂量应用放射菌素D可以抑制C mycmRNA表达 ,从而抑制移植血管内膜增殖。早期应答基因C myc表达在诱导平滑肌细胞增殖中起着重要作用。

血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗预防大肠癌术后肝转移的实验

目的:观察血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗对预防大肠癌术后肝转移的作用.方法:RT—PCR克隆血管抑素基因,建立重组腺病毒载体.建立人结肠癌LoVo肝转移种植的模型,给予血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗.观察其对大肠癌细胞肝转移的影响结果:血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗治疗组肝转移发生率明显低于其他各组(P<0.05),肝转移瘤数少于其他各组(P<0.05),荷瘤生存时间长,治疗组肿瘤组织中血管抑素基因表达为阳性,MVD明显低于其他各组.结论:血管抑素的基因治疗与传统的腹腔化疗联合应用,对预防裸鼠人LoVo结肠癌细胞肝转移有一定的作用.

eNOS基因转移对山羊移植血管内膜增生的抑制作用

目的探讨eNOS基因转移防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性。方法构建带有eNOS基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMVeNOS)和腺病毒空载体(AdCMV)。取山羊颈静脉作血管桥,在体外转染AdCMVeNOS(实验组)和AdCMV(对照组),然后旁路移植到自体颈动脉上。术后30d免疫组化染色,测定静脉桥3H-TDR的掺入量和静脉桥内膜厚度及管腔狭窄面积百分比,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生情况。结果转染后30d,实验组静脉桥中外源性eNOS仍有功能表达;静脉桥3H-TDR掺入量与对照组相比明显减少(P<0.01);静脉桥平均内膜增生厚度和管腔狭窄面积百分比明显低于对照组(P<0.01)。结论eNOS基因转移可以有效抑制移植血管新生内膜的增生,对预防移植血管的狭窄有一定作用。

血管内皮生长因子基因预防冠心病介入治疗术后再狭窄的研究进展

血管内皮生长因子 (VEGF)基因在预防冠心病介入治疗 (PCI)术后再狭窄方面已经展现出良好的应用前景。本文就VEGF基因在预防PCI术后再狭窄中的机制、载体的选择、导入途径、实验及临床研究进展、存在的问题等作一综述。

PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架预防移植静脉再狭窄

目的通过PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架进行t-PA基因局部定位转移,探讨其对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法60只兔构建颈外静脉-颈总动脉移植模型,制备PLGA/CS-tPAcDNA纳米粒超细纤维复合膜支架,并随机分为基因治疗组(含t-PA基因PLGA/CS静电纺丝血管外支架,n=30)、对照组(PLGA/CS静电纺丝血管外支架,n=30),分别在术后不同的时间点取样,通过免疫印迹、逆转录聚合酶链反应和底物发色法分别检测移植静脉t-PA活性和基因表达,病理形态学观察移植血管新生内膜增生情况。结果在术后2、5、14、28、60 d,基因治疗组移植静脉可检测到外源性t-PA mRNA的表达,其活性变化分别为(390.42±63.71)、(368.47±54.21)、(275.23±58.32)、(170.75±60.52)和(63.52±23.21)U/g。对照组中对应时间点则t-PA无活性。术后5、14、28、60 d,基因治疗组移植静脉镜下显示新生内膜面积、内膜中膜面积比均明显小于对照组。结论PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架可介导t-PA基因局部治疗,可影响移植静脉管腔内血栓形成,抑制移植静脉内膜增殖,继而有效降低移植静脉再狭窄的发生。

三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型血管直径及c-jun基因表达的影响

目的 探讨三七皂甙对兔髂动脉再狭窄模型的预防作用及其疗效 ,初步探讨其机制。方法 成年健康白兔 30只 ,随机分为二组 ,经球囊血管内膜剥脱法制成髂动脉再狭窄动物模型。实验组给予路路通注射液 (含三七皂甙 2 5mg/ml) 5ml,对照组给予同量生理盐水。 30d后重复造影 ,观察血管影像学改变 ;处死动物 ,取出手术段血管 ,采用RT PCR法检测血管中膜c fos、c jun基因的表达水平。结果 造影可见兔髂动脉经球囊过度扩张后 ,30d后实验组髂动脉有 30 %左右的狭窄 ,对照组有 60 %～ 70 %的狭窄 ,程度重于实验组 (P <0 0 5)。经RT PCR法检测 ,实验组c jun表达水平低于对照组 (P <0 0 5) ,而c fos表达未得到阳性结果。证明c jun表达与扩张前血管造影直径和 30d后血管造影直径之差存在相关性 (r =0 7394)。结论 三七皂甙能够在一定程度上抑制平滑肌细胞的增殖和迁移 ,从而抑制PTCA后再狭窄的发生 ,其机制可能与抑制原癌基因的表达 ,从而直接抑制平滑肌增殖的细胞周期有关。c jun的表达水平与再狭窄有关。

组织因子途径抑制物基因转移对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的研究组织因子途径抑制物基因转移对兔血管平滑肌细胞迁移的影响,探讨其抑制再狭窄的机制。方法将含有人组织因子途径抑制物基因的重组腺病毒和含β-半乳糖苷酶基因的重组腺病毒在体外分别转染兔血管平滑肌细胞,用X-gal染色法检测腺病毒的转染率,用逆转录聚合酶链反应方法检测转染后平滑肌细胞中组织因子途径抑制物mRNA的表达,于第13、、5及7天用玻片法检测血管平滑肌细胞迁移距离。结果感染指数为100,腺病毒的转染率可达到95%;基因转移后3天在血管平滑肌细胞中检测到组织因子途径抑制物mRNA的表达;同一浓度下转染组织因子途径抑制物基因重组腺病毒组和对照组相比迁移距离显著减少(P<0.001),并具有浓度依赖性。结论腺病毒具有较高的转染培养的血管平滑肌细胞的能力,组织因子途径抑制物基因转移能够显著抑制体外培养的兔血管平滑肌细胞迁移,并且这种抑制作用具有浓度依赖性。

p53、Rb、IGF-I、AT_(1B)基因转移对血管新生内膜增殖的影响

目的观察和比较人野生型ｐ５３基因、Ｒｂ基因、反义ＩＣＦ－Ｉ基因与大鼠反义ＡＴ１Ｎ基因对大鼠颈动脉损伤后新生 内膜增殖的影响。方法通过病毒载体介导，将上述４种基因分别转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１ｄ后 观察并比较其对新生内膜形成的影响。结果与对照组相比，ｐ５３基因、Ｒｂ基因治疗组及反义ＩＧＦ－Ｉ基因治疗组的动脉 血管新生内膜／中层面积比均显著降低（ｐ＜０．０１）；与ＡｄＶβ ｇａｌ组相比，反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组的动脉血管新生内膜／中 层面积比显著降低（Ｐ＜０．０１）．而ｐ５３基因治疗组、Ｒｂ基因治疗组、反义ＩＧＦ－Ｉ基因组及反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组之间无显 著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论上述４种基因对血管成形术后再狭窄可能均有一定的预防作用。

应用大鼠海绵移植模型评价血管内皮生长因子基因的成血管作用

为建立一种重复性好 ,能客观、连续地表明血管内皮生长因子 (VEGF)基因的体内促血管生成作用的评价体系 ,将聚乙烯醇海绵植入大鼠皮下 ,构建大鼠海绵移植模型。术后 5天 ,以VEGF表达质粒pCMV4 VEGF165与空载体pCMV4分别注射到植入的海绵内 ,观察转基因后 7天、11天的血管生成及组织生长情况 ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测VEGF基因在海绵组织、血清及肝组织中的的表达情况。对海绵病理切片行苏木精 伊红 (HE)染色及血管内皮细胞特异性Ⅷ因子免疫组化 ,应用计算机图像分析系统分析海绵内组织生长情况。以Stata软件对数据进行统计分析。结果显示 :VEGF基因的表达局限于注射部位并明显促进海绵内组织生长 ,无远端效应。本研究应用大鼠海绵移植模型成功地观察到血管内皮生长因子基因的成血管作用 ,为VEGF局部转基因治疗缺血性疾病提供了理论基础。

rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究

目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P<0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P<0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。

首例异基因非清髓性外周血干细胞移植治疗转移性乳腺癌

目的:探索转移性乳腺癌的治疗新方法。方法:异基因非清髓性外周血干细胞移植。结果:移植过程顺利,供者干细胞植入成功,转移病灶明显缩小。结论:异基因非清髓性外周血干细胞移植可选择性地应用于晚期乳腺癌的治疗。

应用内皮型一氧化氮合酶基因转染冠状动脉旁路移植血管桥的研究进展

冠状动脉旁路移植术后血管桥再狭窄一直困扰着冠状动脉外科的发展,许多研究表明血管桥再狭窄的发生与一氧化氮的功能异常相关,用转基因方法转移重组内皮型一氧化氮合酶基因,重建内源性一氧化氮功能,是冠状动脉旁路移植术后血管桥再狭窄治疗的新策略,本文就血管桥转基因一氧化氮合酶同工酶的选择、靶细胞的选择、转基因载体、就转基因的检测及应用等国内外研究进展作一综述。

腺病毒介导的hVEGF_(165)基因转移促进小鼠骨髓移植后造血重建

本研究探讨内皮细胞生长因子对骨髓移植小鼠造血重建的影响。重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165经尾静脉注射给同基因骨髓移植BALB/c小鼠;在移植后10、20和30天时检测hVEGF165在小鼠体内的表达,同时测定外周血白细胞、血小板、红细胞计数和骨髓单个核细胞数;对分离移植后30天的骨髓单个核细胞进行脾集落形成试验。结果显示:重组腺病毒成功介导了hVEGF165在骨髓移植小鼠各脏器和血浆中的长期表达;移植后各时间点,接受hVEGF165治疗组小鼠外周血白细胞、血小板、红细胞计数及骨髓单个核细胞数虽然低于正常对照组,但高于其它实验组(P<0.05);移植后30天时hVEGF165治疗组小鼠骨髓单个核细胞形成的脾集落数(21.4±2.67)恢复正常水平(19.50±2.46)(P>0.05),较其它实验组显著增加(P<0.05)。结论:腺病毒介导的VEGF基因转移具有促进骨髓移植小鼠造血功能重建的作用。

PTEN基因对兔血管再狭窄的影响及其机制探讨

目的:探讨联合应用PTEN基因转染兔预防血管再狭窄及其发生机制。方法:建立兔腹主动脉再狭窄模型;构建PTEN表达载体并在球囊损伤腹主动脉同时转染血管壁细胞。实验分3组。对照组:单纯行内膜剥脱术;实验组A:内膜剥脱术+PTEN真核质粒;实验组B:内膜剥脱术+空脂质体。采用常规病理、免疫组织化学、以及形态测量方法观察对再狭窄血管病变的影响及血管内膜细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和MMP-9蛋白的表达。结果:成功转染PTEN基因组显著抑制损伤后4周内膜VSMCs表达PCNA,与对照组相比PCNA表达和MMP-9的水平明显受抑制(P<0.01);显著减少血管内膜厚度和面积。结论:PTEN基因转染在一定程度上可抑制实验性兔腹主动脉再狭窄。

^(32)P对兔自体移植静脉内膜增生和狭窄的预防作用

为观察不同剂量32 P照射对兔自体移植静脉内膜增生和狭窄的预防作用 ,用苏木精—伊红染色、增殖细胞核抗原免疫组织化学染色、计算机图像分析和透射电镜等观察自体移植静脉在32 P(每平方厘米 2、4、8、1 6 μCi)照射下内膜面积、平滑肌细胞增殖和管腔相对丧失率。结果发现 ,1 6 μCi照射组无明显新生内膜形成 ,但细胞大量坏死 ,血管壁结构破坏严重 ;8μCi照射组少量新生内膜形成 ,血管壁结构完整 ,内膜面积、平滑肌细胞增殖指数和管腔相对丧失率明显低于对照组 ;4 μCi照射组和 2 μCi照射组上述指标与对照组无明显差别。结果提示低剂量32 P照射可有效抑制自体移植静脉内膜增生和狭窄 ,本模型的适宜剂量为 8μCi cm2 。

移植血管再狭窄研究现状

动脉硬化闭塞性疾病是当今世界上致死、致残的首要原因之一,尤其近年来在我国发生率呈逐年上升的趋势,静脉旁路移植是治疗此类引起心脏、肢体等器官缺血疾病的重要手段。

自体移植静脉再狭窄的反义基因治疗

自体移植静脉再狭窄的反义基因治疗边杰芳综述张柏根审校（上海第二医科大学附属仁济医院血管外科，上海２００００１）ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＲｅｓｔｅｎｏｓｉｓｉｎＡｕｔｏｖｅｎｏｕｓＧｒａｆｔＢｉａｎＪｉｅｆａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅ...