不同连接比例叶酸偶联壳聚糖的制备

目的叶酸与壳聚糖偶联,并制备不同连接比例的叶酸偶联壳聚糖。方法通过叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应,制得叶酸偶联壳聚糖;采用红外光谱法验证偶联是否成功,紫外分光光度法测定每个壳聚糖上连接叶酸的量。结果叶酸偶联壳聚糖红外光谱图表明,叶酸与壳聚糖成功偶联,并制备了每个壳聚糖上连接叶酸的量大致为3个、10个、20个、30个的叶酸偶联壳聚糖。结论叶酸与壳聚糖成功偶联,并成功制备了不同连接比例的叶酸偶联壳聚糖。

肿瘤靶向性药物载体叶酸-壳聚糖微球的制备及特性研究

目的探索叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS)纳米粒的合成方法及对肿瘤细胞的靶向性。方法利用叶酸活性酯与壳聚糖分子上的氨基反应形成稳定的酰胺键,制备FA-CTS。再利用壳聚糖在偏酸性溶液中带正电荷,在高速磁力搅拌作用下能与阴离子凝集的特性,将紫杉醇(PTX)做模型药物,制备负载PTX叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS/PTX)纳米粒。采用荧光标记法和MTT法评价其肿瘤细胞靶向性。结果所制备的FA-CTS/PTX纳米粒,形态均质规则,无粘连,平均粒径282.8nm,包封率75.4%,载药量9.0%。荧光标记法结果表明FA-CTS纳米粒的肿瘤细胞亲和性均高于普通CTS纳米粒。MTT法结果显示FA-CTS/PTX纳米粒组的肿瘤细胞抑制率均高于普通CTS/PTX纳米粒组。结论合成的FA-CTS纳米粒可通过叶酸受体途径特异靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。

基因治疗中非病毒载体研究进展

肿瘤基因治疗的最大挑战之一是研制安全有效的基因转染载体。在基因转染载体中,非病毒载体以其低毒性、低免疫原性、低致瘤性及易于制备等优点具有良好的应用前景。本文以裸DNA、阳离子脂质体、阳离子多聚物聚乙烯亚胺及壳聚糖、分子偶联体等为代表,从其性质、介导转染的机制、影响转染效率的因素等方面阐述非病毒载体在肿瘤基因治疗方面的研究进展。

pDsRed-hAPJ质粒载体构建及在人HEK293细胞中的表达(英文)

背景:Apelin/APJ系统具有广泛的生理作用,但其在细胞内信号转导,特别是apelin受体的脱敏,内化、复敏降解等方面仍无一致性见解。目的:构建人apelin受体APJ与红色荧光蛋白pDsRED-express-C1融合的真核表达载体并检测其在人胚胎肾293细胞中的表达。方法:以质粒pcDNA3.1-hAPJ为模板,扩增人APJ,用EcoRI和BamHI分别酶切扩增的产物和pDsRED-express-C1载体,常规连接、转化感受态大肠杆菌TOP10。提取质粒,进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染,PI染色,激光共聚焦显微镜观察。结果与结论:PCR扩增出约1.2kb的片段,与预期的人APJ大小序列相符,酶切结果显示重组质粒被切成2条片段,其中一条为pDsRED载体大小,另一条为目的片段大小。共聚焦显微观察显示APJ主要表达在细胞膜上。说明实验成功构建了pDsRed-hAPJ真核重组质粒,此表达载体为研究人APJ的亚细胞区域的位移、内吞定位提供了重要的工具。

小分子靶向肽修饰壳聚糖作为基因载体的研究

目的:将小分子靶向肽RGD(Arg-Gly-Asp)偶联到壳聚糖(CS)上,并包载质粒DNA(pDNA),制成一种具有靶向性的壳聚糖载基因纳米粒。方法:将RGD肽上的羧基和CS上的氨基通过酰化反应发生偶联,运用红外(FT-IR)和元素分析对RGD偶联壳聚糖(CS-RGD)的化学结构进行确证;采用复凝聚法制备CS-RGD/pDNA纳米粒(CS-RGD/pDNA);应用凝胶阻滞实验和DNA酶(DNase I)降解实验考察CS-RGD对pDNA的复合和保护能力;通过激光粒度仪和原子力显微镜对纳米粒的粒径分布和形态进行考察。结果:CS和RGD肽通过酰胺键偶联;CS-RGD/pDNA在N/P≥2时完全复合,在N/P≥4时具有抗DNase I酶降解能力,N/P=2～30的CS-RGD/pDNA复合物粒径在90～260 nm之间,Zeta电位在4～39 mV之间,原子力显微镜结果证明复合物为类球形且分布良好。具有良好的稳定性和易于进入细胞的性质。结论:CS-RGD是一种制备工艺简单,具有应用前景的非病毒基因载体。

RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究

目的将Arg—Gly—Asp（RGD）肽偶联到壳聚糖（CH）材料表面，并制备成包载质粒DNA的纳米粒子，以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照，进行体外内皮细胞转染，观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率。方法以1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基丁二酰亚胺（NHS）为偶联剂，通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面，对其进行表征，并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照，制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子，比较2者对Hy926细胞的转染效率。结果壳聚糖-RGD（CH-RGD）载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子（35．7％VS14．3％．P〈0．001）。结论RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染，其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖。

转基因雪旺细胞与壳聚糖的相容性

大量动物实验证实：将体外培养的雪旺细胞（SC）移植入脊髓损伤区能促进神经元再生，但SC在体外培养和移植过程中，缺乏有效载体。本实验拟建立SC体外分离培养的方法，将神经生长因子（NGF）基因转入SC，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测NGF在转染前后的分泌情况；使用壳聚糖作为载体，种植转基因SC，并对两者的相容性进行观察，探讨转基因和壳聚糖在脊髓损伤治疗中的作用。