MicroRNA基因递送系统抗激素非依赖型前列腺癌增殖作用研究

目的采用支化的聚乙烯亚胺(BPEI)、线型聚乙烯亚胺(LPEI)和树枝状聚合物聚酰胺-胺(PAMAM)与具有抑制激素非依赖型前列腺癌细胞PC3增殖的microRNA(miRNA)-15a和miRNA-16-1质粒结合,构建了miRNA基因递送系统。考察形成的3种纳米复合物的粒径、zeta电位、细胞内摄取,以及对PC3细胞的抑制作用。方法利用粒径分析仪测定形成的3种纳米复合物的粒径和电位,凝胶电泳实验测定3种材料对miRNA的结合能力;利用FAM标记的NC-miRNA考察PC3细胞对3种复合物的摄取情况;通过CCK8法测定3种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1形成的复合物对PC3细胞的抑制作用;PCR法测定3种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1结合后对PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a表达的阻滞作用。结果BPEI、LPEI和PAMAM与miRNA可结合形成稳定的纳米级复合物,在N/P=5时,PC3细胞对BPEI/miRNAFAM的摄取高于LPEI/miRNA-FAM和PAMAM/miRNA-FAM,差异具有统计学意义(P<0.05)。BPEI、LPEI和PAMAM都可以携带miRNA-15a和miRNA-16-1进入PC3细胞,并且阻滞PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。结论BPEI、LPEI和PAMAM包裹miRNA-15a和miRNA-16-1可对激素非依赖型前列腺癌细胞PC3细胞产生抑制作用,并可以有效阻滞PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。

原代树突细胞基因递送系统的构建与应用

目前,安全有效的基因递送系统应用于原代树突细胞(dendritic cell,DC)转染尚未见报道,本研究针对原代DC构建基于脂质体的基因递送系统,优化了制备方法以提高原代DC的转染效率。通过共孵育法、乙醇注入法、鱼精蛋白复合法分别制备含不同阳离子脂质的脂质体/siRNA复合物,并以粒径、电位、对基因药物siRNA的包载能力、安全性、稳定性、DC的摄取效率和基因沉默效率为考察指标,评价并筛选出具有高转染效率的基因递送系统。与市售制剂Lipo2000相比,利用共孵育法制备的赖氨酸谷氨酸双油醇酯(OA2)递送系统的DC摄取效率提高约35%,基因沉默效率提高约10倍,且细胞存活率比Lipo2000提高20%,具有良好的DC基因转染效率和体外安全性。本研究为原代DC提供了一种安全有效、制备简单的基因递送载体平台,具有良好的应用前景。

基因治疗递送系统的研究新进展:遗传性视网膜疾病治疗的曙光

遗传性视网膜疾病是多种先天性视网膜神经退行性疾病的总称,临床上以夜盲、进行性视野缩小、视力下降甚至失明为特点,具有多种遗传形式。由于其病变的根源在于基因突变,通过基因治疗,即利用外源性核苷酸替换或沉默基因缺陷细胞内的致病基因,使细胞表达正确的蛋白质,恢复细胞的功能,就有可能治愈疾病。同时,眼睛具有免疫“豁免”特性,是实现基因治疗的理想器官。为了完成遗传物质的修正,治疗性核苷酸需要进入细胞内发挥作用,携带健康基因的载体递送系统是实现这一过程的有利工具。该文重点总结了包括病毒载体和非病毒载体在内的遗传性视网膜疾病基因治疗递送系统的研究进展及面临的问题。

聚乙烯亚胺纳米基因递送系统的研究进展

基因治疗在恶性肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、罕见病等重大难治性疾病的治疗中表现出巨大潜力。基因递送载体是基因治疗能否成功实施的关键所在,聚乙烯亚胺(PEI)是一种被广泛研究的阳离子基因递送载体,在不同细胞系和转染条件下均展现出稳定高效的基因转染效果,其中PEI25k更被视作基因转染的“黄金标准”。为解决PEI在基因递送中存在的体内转染效率低、细胞毒性大、靶向性低和负载基因溶酶体降解等问题,该文对基于PEI设计构建新型纳米递送系统用于基因治疗的研究进展进行综述,主要包括高相对分子质量线性PEI、多糖、亲水性的聚合物和右旋糖酐修饰的PEI,交联的低相对分子质量PEI,基于PEI的无机纳米递送载体以及基于PEI的药物与基因共递送载体系统,以期为进一步构建高效低毒的基因递送系统提供理论指导。

非病毒载体基因递送系统的研究进展

非病毒载体基因递送系统是相对于以病毒为载体的基因递送系统的另一种基因递送系统。具有高安全性、低免疫原性及易于生产的特性。本文就非病毒基因载体的种类、在疾病治疗中的应用前景及存在的主要问题作一综述。

多功能基因递送系统促进内皮细胞增殖

由于自体血管供应不足,人工血管在心血管疾病的临床治疗中发挥着非常重要的作用。人工血管由于表面缺乏活性内皮层,经常面临术后再狭窄等问题,严重限制了其在临床中的应用。人工血管内皮化能够提高其血液相容性并维持其长期通畅率。大量研究表明,多功能基因递送系统可以促进血管内皮细胞增殖,从而实现人工血管快速内皮化。近年来,功能多肽和阳离子聚合物为开发低毒且高效的多功能基因递送系统提供了有效途径。本文详细介绍了目前用于血管内皮细胞基因转染的功能多肽和聚阳离子基因载体,重点阐述了促进内皮细胞增殖的多功能逐级靶向基因递送系统的研究进展,对采用基因转染方式促进人工血管快速内皮化进行了分析和展望。

基于纳米技术的药物递送系统在肝细胞癌治疗中的研究进展

原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,其中肝细胞癌(HCC)占90%以上。早期HCC以手术切除为主,且预后较好,然而因HCC起病隐匿,绝大多数患者确诊时已进展至中晚期,手术治疗效果较差,而非手术治疗方式因为普遍存在不良反应大,肿瘤选择性低等问题,疗效也不理想,所以目前中晚期HCC治疗仍是临床工作的难点。纳米粒(NP)尺寸小、比表面积大,具有多种独特的理化性质,成为输送药物、基因及细胞活性因子等治疗剂的潜在载体。纳米递送系统以NP为载体,通过功能化修饰,从时间、空间及剂量上调控药物、基因及细胞活性因子等在体内的代谢及转化,在HCC治疗中展现出巨大的潜力。本文主要介绍了几种常见纳米递送系统,包括有机纳米载体、无机纳米载体、外泌体等在HCC治疗中的现状和优势,总结了基于NP的纳米载体治疗HCC的机制,为新型纳米递送系统的研发提供参考。

环糊精准聚轮烷和聚轮烷基因递送载体系统的研究进展

基于环糊精的准聚轮烷和聚轮烷作为一种新颖的基因递送载体材料,具有分子结构独特、生物相容性好、稀释稳定性高、易于功能化修饰等优点,在基因递送研究中得到了越来越多的关注,展现出极大的应用潜力。本文对环糊精准聚轮烷和聚轮烷基因递送载体的研究进展进行综述,为进一步构建高效低毒的基因递送载体提供理论指导。

壳聚糖纳米粒载体的应用研究进展

目的介绍壳聚糖纳米粒载体在药物、基因递送等方面的研究应用进展,为其在新领域的应用提供依据。方法广泛查阅中外文有关文献,整理分析归纳了其中27篇文献内容。结果壳聚糖纳米粒载体在药物和基因递送方面已经有诸多研究应用。结论壳聚糖纳米粒载体是一种有前途的非病毒递送载体,其特性和应用有待进一步探索。

YSA肽修饰的纳米结构脂质载体的制备及表征

目的本研究作者旨在制备载siRNA的YSA肽修饰的纳米结构脂质载体(siRNA/YSA-NLC)并对其进行表征。方法通过YSA与DSPE-PEG2000-Mal发生反应生成DSPE-PEG2000-YSA;采用熔融-超声法制备NLC;以合成的DSPE-PEG2000-YSA对NLC进行表面修饰,制得YSA-NLC,与siRNA复合,制备siRNA/YSA-NLC复合物。采用MCF-7细胞对DSPE-PEG2000-YSA的用量进行筛选,并对优化后的siRNA/YSA-NLC进行表征。结果 DSPE-PEG2000-YSA在NLC中的用量为6%;siRNA/YSA-NLC的粒径为(114.26±11.35)nm,多聚分散度(PDI)为(0.287±0.043),Zeta电位为(6.16±2.79)mV,包封率为(82.31±2.41)%;在4~8℃条件下放置30 d,粒径、PDI和Zeta电位无明显变化;YSA-NLC对siRNA具有良好的保护作用,在血浆中24 h内仍能保持稳定。结论选定和制备了具有良好体外理化性质和瘤靶向能力的YSA-NLC递送siRNA。

已上市核酸类药物的制剂学研究进展

近年来,随着对疾病基因相关机制的不断深入研究,包括质粒DNA、反义寡核苷酸、小干扰RNA、微小RNA及其他基因疗法在内的核酸类药物,引发了全球的广泛关注,其中一些核酸类药物已获得批准上市,用于临床治疗。然而,核酸在体液和细胞内运输所面临的一系列障碍,如容易在血液中快速降解、肝肾清除速度快、细胞摄取效率低以及难以从内吞体逃逸等问题,极大阻碍了核酸类药物的临床应用。病毒和非病毒基因传递系统能将基因传递至胞浆或细胞核,并显示出良好的疗效,已成为核酸类药物体内递送的主要技术手段。本文主要介绍核酸类药物在机体内传递的各种挑战,总结近年来已获批上市的核酸类药物的发展,同时重点从制剂学角度探讨这些已上市的核酸类药物所采用的基因传递系统特点。

脑肿瘤靶向肽T7修饰的纳米结构脂质载体的制备和表征

目的:本研究旨在制备载siRNA的脑肿瘤靶向肽T7修饰的纳米结构脂质载体(siRNA/T7-NLC)并对其进行表征。方法:通过T7与DSPE-PEG2000-Mal反应生成T7-PEG2000-DSPE;采用熔融-超声法制备NLC;以合成的T7-PEG2000-DSPE对NLC进行表面修饰,制得T7-NLC,与siRNA复合,制备siRNA/T7-NLC复合物。采用bEnd. 3/C6细胞共培养模型对T7-PEG2000-DSPE的用量进行筛选,并对优化后的siRNA/T7-NLC进行表征。结果:T7-PEG2000-DSPE在NLC中的用量为4%; siRNA/T7-NLC的粒径(112. 61±1. 85) nm;多聚分散度(PDI)为(0. 277±0. 016); Zeta电位为(9. 54±0. 86) m V;包封率为(80. 56±1. 13)%。在4～8℃条件下放置30 d,粒径、PDI和Zeta电位无明显变化; T7-NLC对siRNA具有良好的保护作用,在血浆中24 h内仍能保持稳定。结论:选定和制备了具有良好体外理化性质和脑肿瘤靶向能力的T7-NLC递送siRNA。