乙型肝炎病毒表面抗原双顺反子的真核表达载体构建

目的利用双顺反子元件构建含 ＨＢｓＡｇ双体基因的真核表达载体，以增强 ＤＮＡ疫苗的免疫疗效。方法我们首先酶切ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓ获得目的基因ＨＢＳＡｇ片段，将其克隆到ｐＣＩ－ｎｅｏ载体得到ｐＣＩ－Ｓ表达载体；另外通过ＰＣＲ扩增获得目的基因ＩＲＥＳ－Ｓ并定向克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ＋Ｓ载体，相应酶切后再次克隆到ｐＣＩ－Ｓ得到两价ＨＢｓＡｇ真核表达载体ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－Ｓ，并进行酶切图谱分析和测序分析。结果ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ—Ｓ经相应酶切电泳显示 ７４０ ｂｐ和 １３５０ ｂｐ左右的目的基因片段，经测序鉴定， ＨＢｓＡｇ与 ＧｅｎｅＢａｎｋ ＨＢｓＡｇ ａｄｗ亚型相符，ＩＲＥＳ－Ｓ亦无任何变异。结论乙型肝炎表面抗原双体的双顺反子的真核表达载体构建成功，为在真核细胞的高效表达和基因治疗作了必要的准备。