基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫性的实验研究

【目的】测定基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫原性和免疫反应性。【方法】用基因重组乳链球菌 (HL 10 7)、乳链球菌 (LM 0 2 30 )、变形链球菌Ingbritt分别灌胃免疫实验动物BALB/c鼠 ,与未免疫组作对照 ,以酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定血清及唾液中的抗变形链球菌表面蛋白PAc的特异性IgG和IgA。【结果】基因重组乳链球菌组血清中抗PAc IgG水平明显高于乳链球菌组 (P <0 0 1)、变形链球菌组 (P <0 0 5 )和未免疫组 (P <0 0 1) ,唾液中重组乳链球菌组抗PAc IgA抗体水平明显高于乳链球菌组 (P <0 0 1)和未免疫组 (P <0 0 1) ,与变形链球菌组无差别 (P >0 0 5 ) ,血清IgA和唾液IgG的水平在 4组中均无差别 (P >0 0 5 )。【结论】基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性 。

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。方法采用携带有变形链球菌表面蛋白（PAc）结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌Sprague－Dawley大鼠进行免疫，并以酶联免疫吸附试验进行鼠血清和唾液中抗PAc－IgG、IgA测定。结果通过灌胃进行免疫接种HL107的大白鼠血清中抗PAc－IgG、IgA抗体滴度和唾液中抗PAc－IgA抗体滴度明显高于乳链球菌LM0230免疫组和空白免疫组（P＜0.01）。结论基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性，能够刺激定菌鼠产生特异性免疫反应和免疫表达产物。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究Ⅶ.基因重组乳链球菌免疫BALB/c鼠的实验研究

目的：观察基因重组乳链球菌的免疫原性和免疫反应性。方法：对实验动物ＢＡＬＢ／ｃ鼠进行基因重组乳链球菌防龋疫苗的灌胃免疫，并以酶联免疫吸附实验进行鼠血清和唾液中抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ测定。结果：接种重组乳链球菌ＨＬ１０２、ＨＬ１０７组血清中抗ＰＡｃ－ＩｇＧ明显高于乳链球菌免疫组（Ｐ＜０．０１），与接种变形乳链球菌组产生同样的ＩｇＧ反应（Ｐ＞０．０１）。结论：基因重组乳链球菌具有变形乳链球菌表面蛋白抗原的免疫原性，能够在ＢＡＬＢ／ｃ鼠中产生特异性免疫反应和免疫表达产物抗特异性ＰＡｃ－ＩｇＧ。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究──Ⅵ．乳链球菌重组质粒pLF稳定性的实验观察

本研究从分析乳链球菌转化子ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中质粒的稳定性入手，了解所用质粒载体对克隆基因表达的影响。质粒稳定性实验结果发现在含有５μｇ／ｍｌ红霉素培养环境下，未出现失去红霉素抗性的红霉素敏感菌株；在红霉素缺失的条件下仅有１％～２％菌落失去抗性，成为红霉素敏感菌株。提示质粒稳定地存在于重组乳链球菌ＨＬ４５、ＨＬ１０２、ＨＬ１０７中，ｒＰＡｃ的低产生水平与在红霉素培养条件下质粒的丧失无关。基因表达的影响因素有待于今后不断深入分析研究。

基因重组乳链球菌防龋疫苗的研究 Ⅲ．乳链球菌重组质粒DNA的Southern印迹和点印迹杂交分析

为了证实重组质粒ＤＮＡ分子中插入的外源ＤＮＡ确是来自变形链球菌拱体菌，检测受体菌中是否有探针同源的序列。本研究采用ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交、点印迹杂交和切口平移制备生物素ＤＮＡ探针以及光敏基因检测技术，对乳链球菌ＨＬ１０２，ＨＬ１０７中的重组质粒ＤＮＡｐＬＦ１０２，ｐＬＦ１０７作了进一步分析鉴定，ＤＮＡ点印迹杂交结果显示，含有ｐａｃ基因的ｐＰＣ４１ＰｓｔⅠ酶切ＤＮＡ探针均与上述质粒ＤＮＡ结合，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交提示重组质粒１．５ｋｂ的酶切片段与生物素探针杂交，证实该基因片段是从ｐＰＣ４１中获得的变形链球菌目的基因片段，重组乳链球菌ＨＬ１０２，ＨＬ１０７均携带变形链球菌表面蛋白抗原（ＰＡｃ）结构基因ｐａｃ。

罗非鱼无乳链球菌gap基因的原核表达及免疫原性研究

试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的gap蛋白与弗氏佐剂乳化腹腔注射免疫罗非鱼,以间接ELISA法检测血清效价并使用GBS进行攻毒试验。结果显示,PCR扩增出1011 bp大小的单条带gap基因,与预期一致;重组载体pET-28a-gap在23℃、0.4 mmol/L IPTG、12 h条件下成功表达49.8 ku的可溶性蛋白;ELISA检测显示,重组蛋白gap能够产生较高的血清抗体效价水平,对GBS攻毒后的罗非鱼相对保护率为64.1%。研究表明,重组蛋白gap具有较好的免疫原性,为鱼类的链球菌病的预防提供新的理论依据。