基因重组人骨形成蛋白-2胶原膜复合物防止大鼠矢状缝扩张后复发的作用

目的 研究基因重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2 )胶原膜复合物对大鼠顶骨矢状缝扩张后复发的影响。方法 10周龄SD雄性大鼠 32只 ,随机分为空白对照组、单纯扩张组、扩张加胶原膜植入组、扩张加rhBMP 2胶原膜复合物植入组 ,每组 8只。大鼠左右顶骨钻孔 ,建立矢状缝扩张模型 ,第 2 1天时取出扩张装置 ,第 2 8天时处死动物 ;用游标卡尺测量相应时间点骨孔间的距离并计算扩张复发率。动物处死后完整取下顶骨 ,去除表面的软组织 ,采用组织学方法观察各组大鼠矢状缝处组织改建情况 ,用原子吸收分光光度计检测该处的钙含量。结果 施加扩张力后 ,矢状缝中新骨形成活跃 ,rhBMP 2胶原膜复合物植入组形成特有的骨质桥连接 ,钙含量显著高于其他组 (P <0 .0 1) ,扩张复发率则明显降低 (P <0 .0 1)。结论 rhBMP 2胶原膜复合物可以降低扩张力作用下大鼠顶骨矢状缝的扩张复发率 ,为临床上降低扩弓复发率提供新的思路。

重组人骨形成蛋白-2与胶原复合物的表面植骨成骨作用研究

目的 评价重组人骨形成蛋白 - 2 (rh BMP- 2 )与胶原复合物在大鼠颅骨表面的成骨作用。方法 用 SD大鼠 9只在两侧颞部各制备一骨膜下袋后 ,分为实验侧和对照侧。右侧植入 rh BMP- 2与胶原复合物为实验侧 ,左侧植入单纯胶原作为对照 ,分别于术后 2、4及 8周处死动物各 3只 ,取标本制作脱钙石蜡切片 ,观察成骨情况 ,并测量成骨厚度。结果 rh BMP- 2与胶原复合物可在颞骨表面通过膜内成骨的方式诱导新骨形成 ,并与颞骨外板良好结合 ,术后 2周 ,植入物大部分降解吸收 ,颞骨表面有大量新生骨 ;术后 4周 ,植入物完全为新骨代替 ,颞骨厚度约为厚原度的 5倍 ;术后 8周 ,新骨更加成熟 ,颞骨厚度约为原厚度 2 .8倍。而对照侧骨质在术后各周均无明显增厚。结论 rh BMP- 2与胶原复合物可作为良好的表面植骨替代材料 。

重组人骨形成蛋白-2复合胶原I盖髓的实验研究

目的 :观察重组人骨形成蛋白 - 2复合胶原I的盖髓效果和对牙髓组织骨钙素含量的影响 ,探讨牙髓细胞分化和修复性牙本质形成的机制 ,为临床筛选理想的盖髓材料提供实验依据。方法 :以 30只猫为实验对象 ,机械暴露牙髓后 ,分别用重组人骨形成蛋白 - 2复合胶原I、氢氧化钙、胶原及对照的牛血清白蛋白盖髓 ,运用组织学方法观察牙髓修复性牙本质的形成及牙髓组织学改变 ,采用放射免疫分析技术检测盖髓后 1周、2周、4周时牙髓组织骨钙素的含量。结果 :与氢氧化钙、胶原和牛血清白蛋白盖髓比较 ,用重组人骨形成蛋白 - 2复合胶原I盖髓 ,能形成完整的管样牙本质桥 ,牙髓组织骨钙素的含量显著多于正常牙髓。结论 :重组人骨形成蛋白 - 2复合胶原I盖髓可诱导形成完整的牙本质桥 ,显著增加牙髓组织骨钙素的含量。重组人骨形成蛋白 - 2复合胶原I作为生物活性盖髓剂 ,起到良好的活髓保存效果 ,值得临床推广应用。

重组人骨形成蛋白-2胶原珊瑚复合人工骨异位诱导成骨的实验研究

目的 本研究采用珊瑚作为载体,胶原作为缓释系统,制备出重组入骨形成蛋白2(rhBMP2)/胶原/珊瑚复合人工骨,并评价其骨诱导活性。方法 rhBMP2、胶原和珊瑚以一定的方式复合后,植入小鼠股部肌袋内,以单纯珊瑚植入作对照,术后不同时间取材,通过组织学方法检测骨诱导活性。结果 复合人工骨植入小鼠肌袋,1周诱导软骨形成,2周形成编织骨,4周形成含骨髓的板层骨,同时珊瑚被部分降解吸收。结论 胶原、珊瑚是rhBMP2较理想的载体,有缓释BMP的作用,该复合骨具有良好的异位诱骨活性,是一种比较理想的新型生物性植骨材料。

胶原基纳米骨复合rhBMP-2及钛膜修复即刻钛种植体周围骨缺损

观察胶原基纳米骨(nHAC)复合rhBMP-2及钛膜修复犬下颌骨拔牙创即刻钛种植体周围骨缺损的效果。其实验结果表明:①单纯nHAC组:术后6周已有新生骨小梁形成,术后12周修复骨缺损,钛种植体边缘可见较多新骨形成;②联合钛膜组:术后6周即见新生骨小梁沿钛膜生长,至术后12周,钛膜下骨密度更高,牙槽嵴顶较丰满;③复合rhBMP-2组:成骨过程较早,术后6周即有较多新生骨组织出现,术后12周新骨组织与宿主骨完全融合,并与种植体表面形成广泛的骨性结合。因此,nHAC具有良好的骨引导作用,可良好地修复种植体周骨缺损,复合rhBMP-2或／和钛膜后效果更佳。

以胶原缓释rhBMP-2复合BMSCs及珊瑚构建组织工程骨异位成骨的实验研究

目的 :观察以胶原缓释rhBMP - 2复合BMSCs及珊瑚构建的组织工程骨异位成骨的能力。方法 :构建 3种复合支架材料 :1)rhBMP - 2 /珊瑚 ;2 )胶原 /rhBMP - 2 /珊瑚 ;3)BMSCs/胶原 /rhBMP - 2 /珊瑚。分别植入裸鼠皮下 ,8周后观察成骨情况 ,并作比较。结果 :第 3组材料异位成骨的能力最强 ,第 2组次之 ,第 1组较弱。结论 :动物实验中胶原是rhBMP - 2适宜的缓释载体 。

胶原膜复合rhBMP-2引导牙周组织再生的组织学观察

目的:探讨胶原膜复合rhBMP-2对大鼠牙周组织缺损模型牙周组织再生修复的影响。方法:18只健康雄性Wistar大鼠,于下前牙龈颊沟冠方1 mm处制备实验性牙周组织缺损模型,随机分为对照组、胶原膜组(Co组)和胶原膜复合rhBMP-2组(Co/rhBMP-2组)。术后4、6和8周分批处死大鼠,取实验部位进行组织学观察。结果:Co/rhBMP-2组术后4周缺损区可见大量新生骨;6周新生骨充满缺损区;8周新生牙槽骨密度较高,根面有新生牙周膜和牙骨质样组织,未见牙龈上皮长入。Co组术后4周缺损边缘可见新骨形成;6周新生骨量增多,但尚未充满缺损区;8周根面有少量牙周膜和牙骨质样组织形成。对照组术后4周缺损边缘有少量新骨沉积;6周缺损边缘可见束状胶原纤维;8周切迹内仅有少量新生牙周组织形成,并有牙龈上皮长入。结论:胶原膜复合rhBMP-2既有引导作用,防止牙龈上皮长入,维持生长空间;又具有诱导骨形成作用,能促进牙周组织修复再生。

以带血管蒂筋膜瓣与人脐带间充质干细胞和重组人骨形成蛋白2构建活性组织工程骨

背景:构建的组织工程骨块植入体内后的存活是骨组织工程面临的一个重大课题,临床上尤其缺少可行性强、可以不经体外长时间构建及预血管化而可一期应用的组织工程骨。目的:探讨以带血管蒂的筋膜瓣作为膜包裹材料、以人脐带间充质干细胞作为种子细胞,以β-磷酸三钙生物陶瓷作为支架材构建组织工程骨的可行性及加入重组人骨形成蛋白2作为细胞活性因子、Ⅰ型胶原作为细胞活性因子缓释材料后成骨能力的变化。方法:Wistar大鼠左侧L1～6背部带血管蒂的筋膜瓣包绕由β-磷酸三钙生物陶瓷、人脐带间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2、Ⅰ型胶原构建的组织工程骨作为实验侧,右侧带血管蒂的筋膜瓣包绕接种了人脐带间充质干细胞的β-磷酸三钙生物陶瓷作为对照侧。结果与结论:大鼠实验侧4周时幼稚骨组织连接形成原始层板骨样结构,形成的原始骨组织钙化程度低。8周时,大鼠两侧骨组织均基本成熟。成骨细胞位于骨陷窝中,周围有大量骨基质呈淡紫色,局部可见Ⅰ型胶原存在,有骨髓腔结构出现,但实验侧骨组织成熟度明显高于对照侧。实验侧骨组织哈夫氏小管清晰可见,形成多个骨化中心,骨小梁、骨岛遍布其中,可见成熟板层骨、立方状排列整齐的活性成骨细胞。8周时实验侧骨小梁成熟度高、典型、清晰可见,对照侧骨小梁成熟度稍差。但2组植入物的新骨形成面积接近。提示以带血管蒂的筋膜瓣作为膜包裹材料构建组织工程骨时,重组人骨形成蛋白2及缓释剂Ⅰ型胶原可促进其骨成熟度。

rhBMP-2/hTGF-β_1/胶原复合材料的初步研究

目的合成rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料,检测其生物相容性和活性。方法用胶原复合rhBMP-2/hTGF-β1形成复合材料,通过兔眼结膜刺激试验和溶血试验对其生物相容性进行检测,观察复合材料对Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)生长及增殖的影响,通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对复合材料的活性进行检测。结果rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料呈白色棉絮状或团块状。对兔眼结膜无刺激作用,对兔血也无溶血作用。复合材料明显影响体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶水平。结论按以上方法合成的rhBMP-2/hTGF-β/胶原复合材料具有良好的生物相容性和生物学活性。

rhBMP-2/nHA/Co复合膜异位成骨的实验研究

目的:观察rhBMP-2/nHA/Co复合膜异位诱导成骨的能力。方法:构建nHA/Co复合膜和rhBMP-2/nHA/Co复合生物膜,分别植入裸鼠后肢大腿肌囊,于10、20、30 d后观察成骨情况,并作比较。结果:rhBMP/nHA/Co组材料在裸鼠肌囊内出现骨样结构,异位成骨的能力较nHA/Co组强。结论:动物实验中Co、nHA均为BMP的良好缓释载体,此复合膜能有效的诱导异位成骨。

转染人骨形成蛋白-7基因的骨髓基质细胞异位成骨实验研究

目的观察转染人骨形成蛋白-7(Bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因的骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)与胶原膜(BME-10X)复合培养后的异位成骨能力。方法将hBMP-7基因转染Beagle犬BMSC,与胶原膜复合培养后,植入裸鼠皮下,8周后取材,HE、Mallory染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色,观察其异位成骨能力。结果各组均有不同程度Ⅰ型胶原的表达,转染组和未转染组显著高于单纯膜组,转染组又显著高于未转染组(P<0.05)。结论转染了hBMP-7基因的BMSCs具有更强的异位成骨能力,有望成为牙周组织工程理想的种子细胞。

rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的细胞活性研究

目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶的含量的影响不同。结论:rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性有剂量依赖性,和细胞浓度也有关。

rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性研究

目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶的含量的影响不同。结论:rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性有剂量依赖性。

活性纳米羟基磷灰石复合胶原聚乳酸材料异位成骨性能研究

目的:探讨既具有骨引导性又具有骨诱导性的活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸(AnHAC/PLA)材料的异位成骨能力,为该材料作为植骨材料应用于临床打下实验基础。方法:通过扫描电镜观察rhBMP-2与nHAC/PLA材料的复合情况,并将nHAC/PLA、rhBMP-2、AnHAC/PLA材料分别植入小鼠股后肌袋内,术后2周、6周通过X线片、组织学观察、成骨量测定来研究AnHAC/PLA的异位成骨能力。结果:rhBMP-2在nHAC/PLA孔隙中均匀分布,6周时AnHAC/PLA组诱导形成的骨量是rhBMP-2组的10.5倍。结论:AnHAC/PLA材料具有良好成骨能力,nHAC/PLA是rhBMP-2理想的缓释载体。

重组人骨形成蛋白-2结合胶原膜在兔颅骨引导骨再生模型中的成骨效应研究

目的探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)与胶原膜靶向结合后在兔颅骨引导骨再生(GBR)模型中的成骨效应。方法将20只普通级雌性健康新西兰大白兔随机分成2周组和6周组,每组10只。所有大白兔均制备颅骨GBR模型,在颅顶骨植入4个钛筒,分别盖rhBMP-2/CBD胶原膜(rhBMP-2/CBD胶原膜组)、rhBMP-2胶原膜(rhBMP-2胶原膜组)、胶原膜(胶原膜组)和不盖膜(空白组)。分别在2周和6周时处死各对应组的大白兔,取样制作硬组织切片和石蜡切片,染色后进行组织学观察。结果 2周时可见胶原膜阻挡了纤维组织的长入,4组钛筒上层均无新骨生成,其中rhBMP-2/CBD胶原膜组钛筒顶端毛细血管增生量明显较其余3组多。6周时可见rhBMP-2/CBD胶原膜组钛筒上层大量新骨生成,与来源于颅骨骨面的新骨界限明显,而其余3组钛筒顶端未见新骨生成。结论 rhBMP-2与胶原膜靶向结合可形成具有骨诱导性的胶原膜,缓释rh BMP-2使胶原膜下方大量新骨生成,表层成骨可阻止纤维组织的长入和防止植骨床的塌陷,使成骨速度加倍。

活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料对拔牙创早期愈合及牙槽嵴吸收影响的实验研究

目的观察活性纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料(AnHAC/PLA)促进犬拔牙创早期愈合及减少牙槽嵴吸收的效果。方法将小块状纳米羟基磷灰石复合胶原/聚乳酸材料(nHAC/PLA)、AnHAC/PLA、自体牙槽松质骨植入犬拔牙创中,并设空白对照。术后4周、8周、12周通过大体观察测量、HE染色和M asson′s三色法染色来观察比较拔牙创骨缺损的修复情况及牙槽嵴的吸收情况。结果AnHAC/PLA材料修复拔牙创骨缺损及减少牙槽骨吸收的能力强,与自体牙槽松质骨组类似,nHAC/PLA材料的能力较弱,但明显优于空白对照组。结论AnHAC/PLA可早期修复拔牙创,减少牙槽嵴的吸收。

活性纳米羟基磷灰石复合胶原／聚乳酸材料应用于牙槽嵴扩增的研究

目的:构建下颌牙槽嵴扩增的动物模型,并初步观察nHAC/PLA复合rhBMP-2在下颌皮质骨表面贴附式植骨的成骨能力。方法:制备AnHAC/PLA材料,将HAC/PLA、AnHAC/PLA材料分别植入新西兰兔下颌骨颊侧皮质骨表面,设计皮质骨颊侧制备沟槽的改良术式组,并与无沟槽的普通术式组对比,术后8周通过大体、X线、组织学观察来研究其牙槽骨加宽的能力。结果:AnHAC/PLA材料较nHAC/PLA材料更能良好的增加下颌骨的宽度,在皮质骨表面增加刻槽的改良术式能明显增加材料的成骨情况。结论:AnHAC/PLA材料可以有效地增加牙槽骨宽度。

一种新型复合人工骨修复家兔下颌骨骨缺损的扫描电镜观察

目的探讨珊瑚转化型羟基磷灰石-胶原-重组人骨形成蛋白-2(CHA-Co-rhBMP-2)复合人工骨在修复颌骨缺损上的应用价值,为临床应用提供理论依据。方法健康家兔18只,随机分为实验组和两组对照组,每组6只。在双侧下颌骨体部制造1.0cm×1.0cm贯通性骨缺损,实验组用CHA-Co-rhBMP-2复合人工骨充填修复,对照组分别用CHA-Co复合骨和单纯CHA充填修复。每组动物各取3只分别在术后6周、12周处死,进行组织学观察及统计学分析。结果与对照组相比实验组材料具有明显的骨诱导活性,6周可见明显新骨形成,12周材料大部分降解,降解区域被大量成熟骨组织所取代,骨材料界面结合紧密,无纤维结缔组织。骨密度分析结果认为骨缺损区的骨密度随时间延长有逐渐增高趋势,统计学分析实验组与对照组之间骨密度有显著性差异。较对照组具有明显优势。实验动物均无感染和不良反应出现。结论CHA-Co-rhBMP-2复合人工骨具有良好的生物相容性、降解性及骨诱导活性,是一种理想的颌骨缺损修复材料。

细胞特异性的非病毒载体增强BMP-2在成纤维细胞中表达

目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于骨修复的可能性。方法将胶原蛋白增强子、启动子及BMP-2基因导入pcDNA3质粒中,用脂质体法转入HDFs,将血管内皮细胞(VEC)作为对照,RT-PCR检测BMP-2基因在两种细胞中的表达差异,并检测转染后HDFs体外成骨表型。结果转染pcDNA3-CEP-BMP-2在HDFs造成BMP-2表达高于pcDNA3-BMP-2,而在VEC的BMP-2表达不增高。转染了pcDNA3-CEP-BMP-2的HDFs骨钙素的分泌和矿化能力高于pcDNA3-BMP-2。结论胶原蛋白1A2启动子和增强子能特异性地增强BMP-2基因在HDFs中的表达。

rhBMP-2/hTGF-β_1与胶原合成复合材料前后生物学活性对比研究

目的检测rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料与rhBMP-2/hTGF-β1生物学活性的差别。方法本研究于2010年5—12月在福建医科大学附属口腔医院实验室进行。分离培养的Beagle犬骨髓基质细胞中加入质量浓度相同的rhBMP-2/hTGF-β1或rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料后继续培养4d,通过细胞计数(MTT法)、碱性磷酸酶(ALP)活性检测,分别对rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料和rhBMP-2/hTGF-β1的生物学活性进行检测,并比较其活性差别。结果 rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料和rhBMP-2/hTGF-β1均具有生物学活性,并且其生物学活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论这种合成rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的方法不会改变生长因子的生物学活性。