中国大陆株日本血吸虫23kD基因重组抗原的研究─—编码23kD抗原基因克隆的筛选

应用中国大陆株日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多肽和载体ｐＧＥＸ表达蛋白的基因重组抗原（Ｈ－Ｓ．ｊ．２３／ｐＧＥＸ）免疫ＣＢＡ小鼠，制各抗血吸虫２ｓｋＤ抗原的特异性免疫血清，并用该免疫血清作为探针筛选中国大陆株日本血吸虫ｃＤＮＡ文库，从３～４×１０￣４个ｃＤＮＡ噬菌体克隆中共钩取到三个阳性克险，其分子量分别为６００ｂｐｓ、７００ｂｐｓ和１０５０ｂｐｓ，并进一步把７００ｂｐｓ的克隆基因连接到ｐＧＥＭ载体上进行部分双链ＤＮＡ序列分析和ＰｍａｌＰ载体上进行蛋白质表达。

应用Sj23基因重组抗原诊断牛、羊血吸虫病研究

以血吸虫基因重组抗原LHD Sj23/pGEX(血吸虫23kD抗原大亲水区多肽/pGEX载体表达蛋白)作为抗原,应用ELISA法检测黄、水牛和绵羊血吸虫病。结果对黄、水牛的阳性符合率为94 0%(79/84)和85 5%(53/62),阴性符合率为82 7%(81/98)和95 1%(77/81),对绵羊的阳性符合率为86 04%(111/129),阴性符合率为100%(91/91)。以血吸虫成虫抗原(SWAP)及虫卵抗原(SEA)作为诊断抗原获得的结果差异不明显。对锥虫感染绵羊血清不出现交叉反应。由于基因重组抗原的制备比虫体抗原制备简便、价廉,同时由于基因重组抗原的应用有利于诊断技术的标准化,以基因重组抗原作为血吸虫病诊断抗原具有良好的研究应用前景。

猴源人隐孢子虫P23抗原基因克隆表达及其免疫活性的测定

为探索隐孢子虫病免疫预防的新途径,本文对猴源人隐孢子虫Cryptosporidium hominis P23抗原基因进行了克隆、表达及其免疫活性的测定.采用RT-PCR方法对猴源C.hominis P23抗原基因进行克隆,构建重组质粒pGEX 4T 1 P23,并用IPTG诱导其在E.Coli Rossetta中表达;采用SDS PAGE检测其表达效果;采用Dot ELISA和淋巴细胞转化试验分别检测其与抗体反应特性和淋巴细胞增殖情况.结果表明：所克隆的P23抗原基因大小为342 bp;重组质粒表达蛋白的大小为40 kDa（含26 kDa的融合蛋白GST）,以1、5、10 μg剂量的重组蛋白rP23均能刺激鼠脾脏淋巴细胞增殖,并能够与感染猴血清中的抗体明显地发生反应.

重组抗原rSjPGM和rSjRAD23用于检测山羊日本血吸虫病的初步研究

以日本血吸虫基因重组抗原SjPGM(rSjPGM)和SjRAD23(rSjRAD23)作为诊断抗原,以日本血吸虫虫卵抗原(SEA)作为对照抗原,应用间接ELISA方法对91份日本血吸虫感染山羊血清、44份健康山羊血清、12份捻转血矛线虫感染山羊血清进行了检测。结果显示,rSjPGM和rSjRAD23的敏感性分别为81.3%和66.0%,特异性均为100%,和捻转血矛线虫病血清均无交叉反应;把两种抗原等量混合后检测的敏感性提高到91.2%,特异性下降至95.5%,和捻转血矛线虫感染山羊血清无交叉反应;以SEA作为诊断抗原的敏感性为100%、但特异性仅为75.0%,并且和山羊捻转血矛线虫病血清有25.0%的交叉反应。结果表明,rSjPGM和rSjRAD23混合抗原可作为诊断抗原,用于山羊血吸虫病诊断。

风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析

目的 在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒 (rubellavirus ,RV)JR2 3株包膜糖蛋白E1 ,为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础。方法 E1基因的表达质粒 pGAPZαA E1经AvrⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌 ,在YPD(含 1 0 0 μg/mlZeocinTM)平板上两次筛选 ,挑出单菌落 ,于液体YPD中培养 ,并在不同时间收集培养物 ,用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 SDS PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达 ,在 4 8h时表达量达到最高 ,之后趋于稳定 ,上清和细胞中均有蛋白表达。Westernblot结果表明 ,上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应 ,而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应 ,不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞 ,并经过折叠形成了正确的构像 ,能够与单克隆抗体结合 ;而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去 ,没有形成能够被单抗识别的构像 ,不能与单抗结合。结论 E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达 ,且免疫反应性良好。