国产基因重组水蛭素抗家兔急性弥漫性血管内凝血作用的实验研究

目的：研究国产基因重组水蛭素（r-hirudin,rH)对凝血酶诱发的家兔急性弥漫性血管内凝血（DIC）的抑制作用，为其临床应用于DIC的实验提供实验依据。方法：家兔麻醉后以1ml/min×60min自股静脉恒速滴注诱导凝血酶100u·kg^-1，同时自耳缘静脉恒速滴注不同剂量的rH。于给药前及给药后20，40和60min分别自心脏取向，测定凝血酶原时间（PT），纤维蛋白原含量（FIB），血小板计数（PL）以及3P试验，然后与药前基础值比较计算药后上述三项指标变化百分率以及3P试验阳性率。结果：DIC组给凝血酶后20，40至60min PT与莫有比较呈明显进行性延长，PL进行性减少，FIB进行性降低，至60min时上述三项指标的延长，减少或降低百分率（平均值）分别达70.71%,79.96%以及74．77％，说明已造成DIC模型。DIC＋rH组在造模的同时静脉滴注rh25,62.5,31.25及15.625μg·kg^-1，60分钟后与DIC组相比，PT的延长均明显降低，算得上述不同剂量时DIC抑制％分别为89．38％，52．60％，49．71％和25．58％；PL减少显著降低，DIC抑制％分别为100．01％，61．86％，58．40％和32．68％；FIB的降低亦明显减少，DIC抑制％分别为85．22％，73．015，33．60％和14．86％。当rH剂量为125μg·kg^-1时上述三项指标数值均与生理盐水组基本一致；3P试验阳性比率药前及药后均为0／6，说明125μg·kg^-1rH完全对抗DIC的形成。讨论：本研究通过PT，PL，FIB和3P试验四项诊断筛选指标的测定，表明本文建立的方法能够充分诱发家兔的急性DIC，且方法简便，造模成功率高。研究表明国产rH具有强大的抗DIC作用，且呈明显剂量依赖性关系，其抗DIC的有效剂量很低（15.625-125μg·kg^-1)。经比较，国产rH的作用强度在此动物模型中为肝素的2倍以上，与国外rH（德国产Refludan)的作用强度一致。

应用基质辅助激光解吸质谱快速分析重组水蛭素产物的纯度与分子量

利用MALDI TOF MS测定了具有抗凝血活性的水蛭素基因重组产物 (rHV 2 )的纯度和分子量 ,实验测定结果与理论计算值一致。证明此基因重组产物的一级结构是正确的 ,在表达、复性和纯化的过程中没有氨基酸的丢失、变异和修饰。