脊髓灰质炎病毒Sabin株工作种子批基因鉴别

目的研究脊髓灰质炎病毒Sabin株基因鉴别的方法。方法分别进行脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ型Sabin株和Ⅲ型Pfizer株3个型的工作种子批病毒RT-PCR,对扩增产物进行SDS-PAGE及测序。结果Ⅰ、Ⅱ型Sabin株和Ⅲ型Pfizer株3个型的工作种子批病毒分别出现了97、71和53bp的电泳带,与预期结果相符。扩增基因序列与报道的脊髓灰质炎病毒减毒株序列一致。结论RT-PCR可以用于脊髓灰质炎病毒Sabin株毒株鉴别。

“龙头凤尾”铁皮石斛基因鉴别及复方胶囊降血糖研究

利用目标起始密码子多态性(start codon targeted polymorphism,简称SCo T)和巢式(Nested) PCR 2种分子标记技术建立"龙头凤尾"铁皮石斛DNA分子鉴别的方法,并研究其复方制剂的降血糖作用。用SCo T标记设计1对引物SC3,开发特异性检测"龙头凤尾"铁皮石斛的Nested PCR方法,建立分子鉴别质量标准;利用鉴别后的石斛制备复方胶囊,对链脲佐菌素加高脂饲料复制的胰岛素抵抗/脂代谢紊乱型糖尿病大鼠进行降血糖药效学研究,观察其对模型大鼠空腹血糖、糖耐量、血清胆固醇、胰岛素等的影响。结果显示,用设计的特异性引物SC3对其进行SCo T-Nested PCR扩增后,仅在睿绅2号中扩增出1条清晰的目标条带,而在其他铁皮石斛品种中均没有出现目标条带,从而实现特异性鉴别。其复方石斛胶囊降血糖作用的规律为:与正常对照组比较,造模组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著增加(P <0. 01),血清胰岛素含量显著减少(P <0. 01);与造模组比较,复方胶囊高、中剂量组大鼠血糖水平、血糖曲线下面积、总胆固醇含量显著减少(P <0. 05),大鼠体质量、血清胰岛素含量显著增加(P <0. 05)。说明SCo T-Nested PCR分子标记可以利用1对引物SC3对"龙头凤尾"铁皮石斛睿绅2号进行特异性鉴别;其制备的复方胶囊高、中剂量组对链脲佐菌素加高脂饲料致胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱型模型大鼠具有一定的降血糖作用,增加胰岛素分泌,降低血清胆固醇含量。能够提高该品种石斛的质量标准,其制剂产品具有较好的降血糖作用。

芸薹属植物MYBL2基因的克隆及其在A、B、C基因组中的PCR鉴别

【目的】MYBL2负调控拟南芥花青素和原花青素的生物合成。从芸薹属6个物种的不同叶色材料中克隆MYBL2基因,分析其序列和表达模式,探究其在芸薹属植物花青素生物合成途径中的功能,为油菜的品质、抗逆性、观赏性等性状改良提供参考。【方法】以芸薹属6个物种19份供试材料的总DNA为模板,同源克隆MYBL2基因,并进行多序列比对和进化树分析;对白菜、甘蓝型油菜、芥菜型油菜以及埃塞俄比亚芥的紫叶材料进行遮光处理,结合转录组和qRT-PCR分析MYBL2基因表达水平;对甘蓝、甘蓝型油菜、芥菜型油菜以及埃塞俄比亚芥紫、绿叶材料进行qRT-PCR分析MYBL2基因表达水平;根据克隆MYBL2-1和MYBL2-2序列的核苷酸变异位点设计特异性引物,开发能够区分MYBL2基因组来源的PCR标记。【结果】克隆获得MYBL2-1和MYBL2-2各9个同源基因共56个拷贝。其中,BcaMYBL2-1为首次获得,BcaMYBL2-1编码区序列全长为867 bp,包含2个内含子,分别为168和102 bp,编码198个氨基酸,分子量为22.69 kD,等电点(pI)为8.72。序列比对和进化分析表明,BcaMYBL2-1来源于B基因组。芸薹属6个物种MYBL2-1和MYBL2-2同源基因中,仅BraA07.MYBL2-1、BolC06.MYBL2-1和BcaMYBL2-1在不同叶色材料中存在序列差异。经遮光处理后,紫叶材料叶色变浅,在白菜紫宝5号中,BraA07.MYBL2-1和BraA02.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.7和0.4倍;在紫叶白花甘蓝型油菜中,BnaA07.MYBL2-1、BnaC06.MYBL2-1、BnaA02.MYBL2-2和BnaC02.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.4、0.5、0.4和0.4倍;在紫叶芥中,BjuA07.MYBL2-1、BjuB03.MYBL2-1、BjuA02.MYBL2-2和BjuB05.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.4、0.3、0.4和0.2倍;在紫秆埃芥中,BcaMYBL2-1、BcaB03.MYBL2-1和BcaC03.MYBL2-2表达量分别为未遮光部分的0.3、0.4和0.5倍,而BcaB05.MYBL2-2表达量为未遮光部分的2.4倍。对比芸薹属不同叶色材料MYBL2基因表达情况,结果表明,除了羽衣甘蓝,在紫叶材料中MYBL2基因大部分同源基因的表达量均高于绿叶。在羽衣甘蓝中,绿叶羽衣甘蓝BolC06.MYBL2-1和BolC02.MYBL2-2的表达量分别为紫叶羽衣甘蓝的2.5和3.5倍;在甘蓝型油菜中,紫叶白花BnaA07.MYBL2-1、BnaC06.MYBL2-1和BnaC02.MYBL2-2的表达量分别为绿叶白花的7.5、8.6和26.0倍,而绿叶白花BnaA02.MYBL2-2的表达量为紫叶白花的13.0倍;在芥菜型油菜中,紫叶芥BjuA07.MYBL2-1、BjuB03.MYBL2-1、BjuA02.MYBL2-2和BjuB05.MYBL2-2的表达量分别为四川黄籽的8.3、11.8、23.2和14.6倍;在埃塞俄比亚芥中,紫秆埃芥BcaMYBL2-1、BcaB03.MYBL2-1的表达量分别为W-BCDH76的7.1和27.6倍,而W-BCDH76的BcaB05.MYBL2-2和BcaC03.MYBL2-2的表达量则分别为紫秆埃芥的2.8和5.0倍。依据克隆的基因序列设计出5对引物,可以有效鉴别芸薹属植物MYBL2基因的A、B、C基因组来源。【结论】芸薹属紫叶材料MYBL2基因的表达与光照密切相关,而且参与花青素生物合成的调控机制与拟南芥MYBL2负调控花青素生物合成的机制有所不同。

华南籼稻稻瘟病菌致病型单基因鉴别寄主筛选

采用35个单基因鉴别寄主、12个日本清泽鉴别寄主共47个具有已知基因的鉴别寄主,对147个籼稻稻瘟病菌株进行致病型鉴别研究。147个菌株被划分为28个不同的致病类型。优势致病型为 I-04、I-02和 I-01,这3个致病型的菌株数占参试菌株的74.8%,而且与其他致病型比较,它们的致病谱较广。研究结果表明,F80-1(Pi-k)、IRBL7(Pi-kp)、IRBL16(Pi-sh(1))、IRBL21(Pi-7(t))、IRBL3(Pi-i)、IRBL9(Pi-z)、IRBL19(Pi-3)、IRBL10(Pi-z5)、IRBL11(Pi-zt)、IRBL18(Pi-1)、IRBL10(Pi-2)、F128-1(Pi-ta^2)、F145-2(Pi-b)和 IRBL22(Pi-9(t))等14个单基因鉴别寄主对以广东为主的华南籼稻区稻瘟病菌具有较好的鉴别能力,其中尤以 F80-1(Pi-k)、IRBL7(Pi-kp)、IRBL16(Pi-sh(1))、IRBL21(Pi-7(t))、IRBL3(Pi-i)、IRBL9(Pi-z)、IRBL19(Pi-3)和 IRBL10(Pi-z5)等8个单基因鉴别寄主的鉴别能力最强,IRBL11(Pi-zt)、IRBL18(Pi-1)、IRBL10(Pi-2)、F128-1(pi-ta^2)、F145-2(Pi-b)和 IRBL22(Pi-9(t))等6个单基因鉴别寄主可鉴别抗性反应表现型较相似的致病型,并可用于细分致病型。3个优势致病型 I-04、I-02和 I-01对 F80-1(Pi-k)等上述8个单基因鉴别寄主的抗性反应表现型依次为 RRSRSSSMR、SSSSSSSS 和 SSRSSSSR。

基于电化学基因传感器的冬虫夏草及其伪品北虫草的鉴别

目的:构建一种能够灵敏鉴别中药冬虫夏草及其伪品北虫草的电化学基因传感器。方法:β-环糊精修饰的具有特异性分子识别特性的金纳米颗粒(Au-CDS)被用作电化学信号提供者和主体分子。用3’端标有dabcyl,5’端标有氨基的发卡探针DNA进行电极修饰,冬虫夏草的DNA片段可以和该探针DNA形成双螺旋结构,从而将目标杂交事件转换为Au-CDS提供的电流信号,该信号变化可通过循环伏安法灵敏检测,目标DNA特异性基因位点的微小差异可产生显著的电流响应差异。结果:可灵敏检测2.6×10-12M的目标DNA。结论:该传感器为冬虫夏草的快速鉴别提供了一种新方法和工具。

荧光显微术在鉴别拟南芥花粉壁发育相关基因功能中的应用

花粉在发育过程中,其壁中的不同成分具有自发荧光或诱发荧光的特性,荧光显微术利用此特性来鉴别花粉壁中的化学成分.拟南芥野生型花序的树脂半薄连续切片用苯胺蓝水溶液染色后,在紫外光激发下,胼胝质发出黄绿色荧光,孢粉素发出黄色或黄棕色荧光,纤维素发出蓝色荧光.利用荧光的方法快速简便,分辨率高,适用于大规模筛选花粉壁发育相关基因时对不同基因的功能进行快速鉴别和分类.用该方法鉴别出了几个与胼胝质合成、胼胝质降解、孢粉素沉积模式以及花粉内壁纤维素合成相关的遗传位点.

用PCR-RFLP技术鉴别嗜人按蚊和中华按蚊的研究

目的 依据嗜人按蚊和中华按蚊rDNA的ITS2区段基因特征 ,建立一种新的嗜人按蚊和中华按蚊基因鉴别技术。方法 对不同地区的嗜人按蚊、可疑嗜人按蚊和中华按蚊样本通过采用特异性ITS2 引物PCR扩增 ,限制性内切酶RsaI和HinfI消化 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析进行PCR -RFLP基因鉴别。 结果 不同地区嗜人按蚊rDNA的ITS2 基因PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfI酶切 ,并显示一条 4 5 0bp的酶切DNA条带 ;中华按蚊的ITS2 基因PCR扩增产物则能被限制性内切酶RsaI酶切 ,并显示 4 0 0bp和 2 0 0bp两条酶切DNA条带 ;辽宁可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与嗜人按蚊相同而广东珠海可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与中华按蚊相同。结论 依据rDNA的ITS2 区段基因特征建立的PCR -RFLP技术可用于嗜人按蚊和中华按蚊的基因鉴别。采用该PCR -RFLP基因鉴别技术发现辽宁可疑嗜人按蚊的基因与中国大陆的嗜人按蚊属同种 ,而广东可疑嗜人按蚊的基因与中华按蚊属同种。

可鉴别转基因原料的包装薄膜

法国向市场推出两种使用普通聚氯乙烯(PVC)材料加工而成的新包装薄膜，用它可鉴定被包装食品是否使用转基因原料。使用这种经特殊处理的包装用PVC薄膜，可鉴定其包装内容物如大豆油是否由转其因大豆原料加工而成，即使对于只含5％-10％转基因成分的大豆食品，也能鉴定清楚。它主要用于包装欧洲南部地区栽植的非转基因大豆，作为跟踪检查并保证其在流通过程中不能掺进转基因大豆原料。

中药僵蚕霉变情况调查与继生真菌的鉴别研究

目的:研究中药僵蚕在保管和零售过程中的霉变情况,并对这些霉菌进行基因鉴别,以确定其种属和来源。方法:对7个地区12批僵蚕样品进行外观性状鉴别,并对污染僵蚕的继生真菌进行接种培养、纯化、DNA提取、基因重组、阳性克隆筛选和基因测序研究。结果:12批僵蚕样品中,有6批出现霉变。霉变僵蚕的粒数比为9∶3 000~29∶3 000。污染僵蚕的霉菌经鉴定为黄曲霉Aspergillus flavus和产黄青霉Penicillium chrysogenum。结论:僵蚕在保管和零售过程中较易发生霉变,这提示相关从业人员,应加强对易霉变中药的监管,以避免产生不良反应。

HPC1基因可能与家族性前列腺癌有关

约翰斯霍普金斯大学医学院的研究人员已报道了可能与1/3家族性前列腺癌有关的基因鉴别情况。在美国癌症研究协会会议的新闻发布会上,巴尔的摩的研究人员JohnIsaacs说,研究进一步证实了1号染色体上人前列腺癌易感基因(HPCI)的研究发现。他说,10％的前列腺癌病例趋于群集在家族中。

“象人”基因被发现

美国华盛顿消息:科学家们各自进行自己的研究工作,但他们几乎同时发现与那种最常见的多发性神经瘤有关的基因。密执安大学Howard Hughes医学研究所的Francis Collins及其研究小组在1990年7月11日的《科学》杂志上发表了他们的研究结果,同一天,犹他大学的Raymond

AS-PCR法鉴别炮制辅料鳖血和常见掺伪品的研究

目的建立一种炮制辅料鳖血等位基因特异性PCR(AS-PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别鳖血与其它常见动物血液。方法通过比较鳖血基原中华鳖和驴、牛、羊、鸡、猪、兔为代表的常见动物的COⅠ序列差异,根据SNP位点设计鳖血特异性鉴别引物,优化PCR反应体系,并进行耐受性、适用性、掺伪灵敏度考察验证。结果实验条件为退火温度62℃、循环次数29次、引物用量0.2μL、DNA模板浓度100 ng时,鳖血使用设计的ZHB286引物经PCR扩增和凝胶电泳后出现约286 bp的明亮条带,其他动物血液样品均无条带出现。结论该AS-PCR鉴别方法具有高度特异性,能准确鉴别鳖血和其他常见动物血液,进而可用于鳖血与驴、牛、羊、鸡、猪、兔血掺伪鉴别,在血液类药材分子鉴定中具有广泛应用价值。

台湾开发完成猪快速诊断基因芯片

台湾省“农业委员会家畜卫生试验所”最近宣布完成动物快速基因芯片诊断鉴别技术的开发，可在8个小时之内区别诊断口蹄疫等4种猪只水泡性疾病。

云南省近年稻瘟病菌生理小种的组成和分布

用日本 9个水稻单基因鉴别品种和BL1、K5 9两个参考品种鉴定了云南省 4个稻作区 2 1个县 (市 )采集、分离的 15 5个稻瘟病菌单孢菌株 ,结果出现 78个稻瘟病菌生理小种 ,其中优势小种为 136 4(出现频率为 6 5 % )、317 4(出现频率 5 2 % )、0 0 7(出现频率 5 2 % )小种。通过研究各稻作区生理小种对日本鉴别品种的侵染率 ,分析了各垂直抗性基因在不同稻作区的利用价值。

水稻地方品种‘月亮谷’纯系对田间稻瘟病菌的选择

云南元阳哈尼梯田稻作模式是水稻可持续生产模式之一。尽管梯田地理条件适合稻瘟病的发生,但地方品种‘月亮谷’在超百年的种植历史上未有稻瘟病大发生的记载,其原因值得探索。为了解‘月亮谷’不同抗性品系对环境中稻瘟病菌的选择作用,以‘月亮谷’单粒传纯系为材料,通过孢子捕捉法和常规病组织分离法采集稻瘟菌株,进行人工培养、表型观察,接种测定了这些稻瘟菌菌株对25个抗稻瘟病单基因近等基因系的致病型。结果表明,梯田环境空气中采集的稻瘟菌孢子菌落形态呈放射状,菌落疏松,生长在培养基浅表,产孢量总体差异不明显,黑色素颜色较浅;从水稻感病组织上分离到的稻瘟菌菌落呈地毯状,菌落紧密,匍匐在培养基表面,产孢量个体差异较大(P<0.05),黑色素颜色较深。测定的稻瘟菌菌株对25个近等基因系都有致病性,联合致病性在12.0%~56.0%之间。来自环境空气中的菌株的平均联合致病性(24.8%)低于分离自‘月亮谷’纯系的菌株(38.4%)。进一步分析显示,稻瘟菌株联合致病性与其菌丝生长速率、产孢量相关性不明显;但与黑色素合成存在一定关联,颜色越深,致病性越强,来源于‘月亮谷’不同品系上的菌株致病性强于环境空气中的菌株。上述结果表明,元阳哈尼梯田环境中的稻瘟菌群体与‘月亮谷’纯系上分离到的稻瘟菌群体存在较大差异。

广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告

为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。