长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路直接或间接影响骨质疏松症

背景:近年来大量的研究发现长链非编码RNA参与骨质疏松症的发生和发展。p38MAPK信号通路参与骨髓间充质干细胞、成骨细胞以及破骨细胞的分化等过程而参与骨质疏松症的发展,而长链非编码RNA可通过影响p38MAPK信号通路,直接或间接参与骨质疏松症的发生及发展过程。目的:综述长链非编码RNA通过p38MAPK信号通路,直接或间接影响骨质疏松症的进展,为长链非编码RNA在骨质疏松症中预防和治疗提供一个新思路。方法:检索PubMed、中国知网和万方数据库的相关文献,以“长链非编码RNA,骨质疏松,间充质干细胞,成骨细胞,破骨细胞,p38信号通路”为中文检索词,以“long non-coding RNA,osteoporosis,mesenchymal stem cells,osteoblasts,osteoclast,p38 signaling pathway”为英文检索词,排除陈旧、重复以及可信度低的观点,将检索到的文献进行归纳、总结和分析,选取76篇具有代表性的文章。结果与结论:(1)长链非编码RNA通过多种途径参与骨质疏松症的防治,包括促进骨髓间充质干细胞的成骨分化、促进成骨细胞分化和成骨细胞分泌活性、抑制破骨细胞增殖和对骨的吸收作用,以及调节成骨相关细胞通路的激活或抑制,激活p38MAPK信号通路延缓骨质疏松症进展,抑制该信号通路抑制破骨细胞的吸收作用,从而影响骨质疏松的发生和发展。(2)相应长链非编码RNA的过表达或低表达会通过p38MAPK信号通路来影响成骨细胞和破骨细胞的增殖或分化,调节骨重塑过程,进而影响骨质疏松症的发生和发展。大量的基础研究结果显示,长链非编码RNA和p38MAPK信号通路或许可以成为骨质疏松症治疗中的潜在应用和临床转化价值;且相应的长链非编码RNA过表达或低表达慢病毒、转染质粒,相应的p38MAPK信号通路抑制剂等在体外细胞实验及动物模型中都被证实有靶向调控作用。(3)因此,通过靶向调控长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来调节骨髓间充质干细胞的分化和功能,或通过长链非编码RNA和p38MAPK信号通路来抑制破骨细胞的增殖分化,或许能提供一种创新的治疗策略,可以延缓骨质疏松症的进展。

长链非编码RNA P53、P21在大鼠模型动脉粥样硬化中的应用

本研究旨在深度剖析长链非编码RNA P53和P21在大鼠动脉粥样硬化模型中的作用及应用潜能。择取60只大鼠,随机平均划分为正常组与粥样硬化组,借由构建大鼠动脉粥样硬化模型,综合运用多种实验技术(如免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、酶联免疫分析等)及仪器(如彩色多普勒超声诊断仪),对两组中P53和P21的表达状况、调控机制及其与疾病演进的关联予以系统性且全方位的解析。研究成果有望为动脉粥样硬化的诊断与治疗提供新颖且极具价值的靶点与策略。This study aims to deeply analyze the role and application potential of long non-coding RNA P53 and P21 in rat atherosclerosis model. 60 rats were selected and randomly divided into normal group and atherosclerosis group. By constructing rat atherosclerosis model, a variety of experimental techniques (such as immunohistochemistry staining, real-time fluorescence quantitative PCR, protein blotting, enzyme-linked immunosorbent assay, etc.) and instruments (such as color Doppler ultrasound diagnostic instrument) were used to systematically and comprehensively analyze the expression status, regulatory mechanism and relationship between P53 and P21 and disease progression in the two groups. The research results are expected to provide novel and valuable targets and strategies for the diagnosis and treatment of atherosclerosis.

长链基因间非编码RNA-p21通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡

目的:探讨lincRNA-p21在胃癌细胞凋亡中的作用及其潜在机制。方法:在胃癌MGC-803细胞系中分别转染siRNA以及过表达质粒实现下调/上调lincRNA-p21表达。lincRNA-p21和YAP的mRNA水平由qRT-PCR方法测定。之后通过流式细胞术和TUNEL测定对细胞凋亡进行检测,并用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白。结果:上调lincRNA-p21促进胃癌细胞凋亡,反之亦然。研究还发现下调lincRNA-p21会引起YAP mRNA及蛋白表达量升高。最重要的是,由lincRNA-p21下调引起的抑制凋亡作用可以通过敲低YAP表达来解除。结论:lincRNA-p21可以通过调控YAP表达促进胃癌细胞凋亡,这可能为胃癌治疗提供新思路。

基因间长链非编码RNA 467对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 467(linc00467)对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞株HEC-1A、Ishikawa、KLE和RL-95-2,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测4种细胞中linc00467的相对表达量,选择高表达linc00467的子宫内膜癌细胞株HEC-1A、Ishikawa进行后续实验。分别构建2个linc00467慢病毒沉默表达载体sh-linc00467#1、sh-linc00467#2和空载慢病毒质粒;将对数生长期HEC-1A、Ishikawa细胞分为sh-NC组、sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组,sh-NC组细胞转染空载慢病毒质粒,sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组细胞分别转染sh-linc00467#1和sh-linc00467#2;应用RT-qPCR法检测3组细胞中linc00467的相对表达量,5-乙炔基-2-脱氧尿苷(EdU)实验、克隆形成实验检测3组细胞增殖能力,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,划痕实验检测3组细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测3组细胞侵袭能力。结果HEC-1A细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著高于KLE和RL-95-2细胞(P<0.05);Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著高于KLE和RL-95-2细胞(P<0.05);HEC-1A与Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),KLE细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著低于RL-95-2细胞(P<0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量显著低于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞中linc00467 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组EdU阳性HEC-1A、Ishikawa细胞数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组EdU阳性HEC-1A、Ishikawa细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞克隆数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞克隆数比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞凋亡率显著高于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞划痕愈合率显著低于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。sh-linc00467#1组和sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa侵袭细胞数显著少于sh-NC组(P<0.01);sh-linc00467#1组与sh-linc00467#2组HEC-1A、Ishikawa侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论下调linc00467表达可抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进子宫内膜癌细胞凋亡。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

重型颅脑损伤病人血清微小RNA-542-3p、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1表达及其与预后的关系

目的探讨微小RNA-542-3p(miR-542-3p)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在重型颅脑损伤(STBI)病人血清中的表达及与病人预后的关系。方法2020年1月~2022年7月收治的128例STBI病人为重型组,130例轻、中型TBI病人为对照组,检测病人血清miR-542-3p、lncRNA TUG1表达量,采用Pearson法分析二者相关性。Logistic回归分析血清miR-542-3p、lncRNA TUG1对STBI病人预后不良的影响,并以受试者工作特征(ROC)曲线分析二者对STBI病人预后的预测效能。结果重型组病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量分别低于和高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。STBI病人血清miR-542-3p与lncRNA TUG1表达量呈负相关(r=-0.595,P<0.001)。预后不良组血清lncRNA TUG1与miR-542-3p水平分别高于和低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。高lncRNA TUG1水平是STBI病人预后不良的危险因素(P<0.05),高miR-542-3p水平是保护因素(P<0.05)。血清miR-542-3p、lncRNA TUG1联合预测STBI病人预后的曲线下面积(AUC)(0.939)高于单独预测的AUC(Z=2.410,P=0.016;Z=3.339,P<0.001)。结论STBI病人血清miR-542-3p表达下调,lncRNA TUG1表达上调,二者均可用于STBI病人预后预测,且二者联合的预测价值更高。

长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

长链非编码RNA Pvt1致癌基因在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化过程中的作用研究

目的研究长链非编码RNA Pvt1致癌基因(PVT1)在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化(EMT)过程中的作用。方法收集不同级别胶质瘤临床样本,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PVT1表达水平;U87MG和U251细胞系分别转染siRNA-PVT1及siNC后,CCK-8检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果与正常脑组织相比,随着胶质瘤分级的增加,PVT1表达水平逐渐升高(P﹤0.05)。胶质母细胞系U87MG和U251的PVT1表达水平均明显高于正常HEB细胞系(P﹤0.01)。培养2、3天后,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞光密度值均低于siNC组。与siNC组相比,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞侵袭细胞数量均减少。siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞系中E-cadherin蛋白相对表达量均高于siNC组,N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量均低于siNC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论长链非编码RNA PVT1在胶质瘤中高表达,其表达水平与胶质瘤恶性程度有关;沉默PVT1可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和EMT过程,为胶质瘤的基因疗法提供了一个新的潜在靶点。

长链基因间非编码RNA 00963通过靶向微小RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系。将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭。结果与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达。干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用。结论干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭。

基因间长链非编码RNA 152靶向微小RNA-103a-3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 152(LINC00152)靶向调控微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞(ANIP-973、NCI-H157、A549和NCI-H1975)的LINC00152水平。选取LINC00152水平最高的细胞分别转染LINC00152特异性小干扰RNA(si-LINC00152组)或无关序列(si-NC组),另设未转染细胞为对照组。QPCR检测LINC00152水平,活细胞计数CCK-8法、Transwell小室和划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的水平;荧光素酶报告实验验证LINC00152靶向结合miR-103a-3p的能力。结果NSCLC细胞的LINC00152水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),尤其是NCI-H1975细胞的最高。si-LINC00152组的LINC00152水平为0.352±0.087,低于对照组的1.058±0.219和si-NC组的1.126±0.139(P<0.05)。与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组NCI-H1975细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P<0.05);si-LINC00152组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(27.386±2.428)%和(78.840±5.031)个,低于si-NC组的(77.675±4.803)%和(179.208±13.264)个及对照组的(76.371±5.385)%和(174.003±15.678)个(P<0.05);与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组的MMP-2和MMP-9水平均降低,而PTEN水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告分析证实,miR-103a-3p模拟物降低了野生型LINC00152的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论LINC00152在NSCLC细胞中高表达并发挥促癌作用,与NSCLC的迁移侵袭密切相关,LINC00152与miR-103a-3p间的相互作用在NSCLC靶向治疗中有一定潜能。

基因间长链非编码RNA 113靶向微小RNA-493-3p对肺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 113(LINC00113)调控微小RNA-493-3p(miR-493-3p)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移过程中的分子功能。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测LINC00113和miR-493-3p在50对NSCLC癌组织和癌旁组织及4株NSCLC细胞株(A549、NCI-H1975、HCC827和NCI-H1299)的水平,双荧光素酶报告系统验证LINC00113与miR-493-3p的相互关系;将NCI-H1299细胞分为4组:对照组(空白对照)、LINC00113干扰(si-LINC00113)组(转染si-LINC00113+miR-493-3p无关序列miR-NC)、miR-493-3p抑制物inhibitor(miR-inhibitor)组(转染无关序列si-NC+miR-493-3p inhibitor)和共转染组(转染si-LINC00113+miR-493-3p inhibitor)。通过MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测LINC00113和miR-493-3p对NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁组织相比,NSCLC组织的LINC00113水平升高至2.125±0.119,而miR-493-3p水平降低至0.592±0.040,且两者水平呈负相关(r=-0.760,P<0.05)。与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,NSCLC细胞的LINC00113水平升高,而miR-493-3p水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。野生型LINC00113序列与miR-493-3p模拟物共转染细胞的荧光素酶活性降低(P<0.05)。对照组、si-LINC00113组、miR-inhibitor组和共转染组的细胞活力分别为1.381±0.076、0.863±0.070、1.824±0.102和1.452±0.105,划痕愈合率分别为(54.370±5.366)%、(26.203±1.817)%、(73.067±2.846)%和(51.587±4.288)%,穿膜细胞数分别为(339.265±12.032)、(183.619±9.387)、(467.113±8.950)和(325.667±6.036)个,与对照组相比,si-LINC00113组的细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数均降低(P<0.05),miR-inhibitor组均升高(P<0.05),而共转染组的无明显变化(P>0.05)。结论NSCLC组织和细胞中LINC00113高表达且miR-493-3p低表达,下调LINC00113可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能通过靶向miR-493-3p来发挥促癌作用,LINC00113/miR-493-3p轴有望成为NSCLC治疗的潜在靶点。

特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-23b-3p水平检测及意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)水平检测及意义。方法:选取AD患儿165例(AD组)和体检健康儿童160例(对照组)为研究对象。采用荧光定量PCR法检测两组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平。采用AD积分指数(SCORAD)对AD患儿疾病严重程度进行评估,并将AD组患儿分为AD轻度组(65例)、AD中度组(68例)和AD重度组(32例)。比较对照组和AD组以及不同严重程度AD患儿血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平。采用Pearson法分析AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平和SCORAD评分三者间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平检测对中、重度AD的诊断价值。结果:与对照组比较,AD组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平显著降低(均P<0.05)。与AD轻度组比较,AD中度组和AD重度组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平依次降低,SCORAD评分依次升高(均P<0.05)。AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平呈正相关(r=0.404,P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平与SCORAD评分均呈负相关(r=-0.383、-0.366,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断中度AD的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.753、0.883。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断中度AD的AUC更高(Z=2.177、3.595,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断重度AD的AUC分别为0.794、0.778、0.895。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断重度AD的AUC更高(Z=2.104、2.293,均P<0.05)。结论:AD患儿血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平呈低表达,与病情严重程度有关,有望成为评估儿童AD病情程度的生物标志物。

长链基因间非编码RNA 00681竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞侵袭和迁移

目的:检测长链基因间非编码RNA 00681(long intergenic noncoding RNA 00681,linc00681)在恶性黑素瘤组织和皮肤良性痣组织中的表达,探索沉默linc00681对黑素瘤A375细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:采用一步法实时定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测恶性黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达。利用小干扰RNA技术沉默黑素瘤A375细胞中linc00681的表达。应用划痕实验检测敲低linc00681对细胞迁移距离的影响,Transwell检测敲低linc00681对细胞迁移和侵袭能力的影响。生信分析网站分析linc00681和微小RNA-16(microRNA-16,miR-16)的潜在结合位点。荧光素酶报告实验检测linc00681与miR-16的结合能力。挽救实验检测miR-16对linc00681调控A375细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:黑素瘤组织和A375细胞中linc00681的表达高于皮肤良性痣和正常黑素HEMa-LP细胞。沉默linc00681表达后,A375细胞迁移距离、迁移和侵袭细胞数目均显著降低。研究显示:linc00681可吸附结合miR-16;linc00681和miR-16共同沉默组侵袭和迁移能力明显高于linc00681单独沉默组。结论:linc00681在黑素瘤组织和A375细胞中表达升高,并可通过竞争性结合miR-16促进黑素瘤细胞迁移和侵袭。

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA X失活特异转录物(lncRNA XIST)通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系;划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA和蛋白表达。结果在卵巢癌组织和细胞系中,lncRNA XIST高表达,miR-340-5p低表达(P<0.05)。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达(P<0.05)。转染si-lncRNA XIST后,lncRNA XIST水平、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);共转染si-lncRNA XIST和miR-340-5p inhibitor后上述指标均得到逆转(P<0.05)。结论lncRNA XIST通过下调miR-340-5p促进卵巢癌细胞EMT。

长链非编码RNA母系表达基因3、微小RNA-21表达与冠状动脉钙化的相关性分析

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA-21(miR-21)与冠状动脉钙化的相关性。方法选取2018年6月至2019年6月在邯郸市中心医院行冠状动脉造影及CT检查确诊为冠状动脉钙化病人189例作为钙化组,另选取同期在该院行冠状动脉造影及CT检查显示无冠状动脉钙化者183例作为未钙化组。采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)法检测血清LncRNA MEG3、miR-21表达水平,采用Pearson法分析病人血清LncRNA MEG3、miR-21水平及与糖化血红蛋白(HbA1c)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平相关性,采用logistic回归模型分析冠状动脉钙化发生的影响因素,采用ROC曲线评估血清LncRNA MEG3、miR-21表达水平对冠状动脉钙化的预测价值。结果与未钙化组相比,钙化组血清miR-21[2.87±0.93比1.02±0.29]、HbA1c[(6.95±1.31)%比(5.41±1.26)%]、hs-CRP[(5.13±1.74)mg/L比(3.02±1.01)mg/L]、TNF-α[(11.72±3.92)ng/L比(9.82±4.13)ng/L]、IL-1β水平[(4.96±0.95)ng/L比(2.32±0.74)ng/L]及冠心病(80.95%比15.85%)、高血压比例(53.97%比22.40%)较高(P<0.05),血清LncRNA MEG3表达水平[0.62±0.17比1.01±0.31]较低(P<0.05)。冠状动脉钙化病人血清LncRNA MEG3与miR-21、hs-CRP、TNF-α、IL-1β水平呈负相关,miR-21与hs-CRP、TNF-α、IL-1β水平呈正相关(P<0.05)。冠心病、LncRNA MEG3、miR-21水平是影响冠状动脉钙化发生的危险因素(P<0.05)。血清LncRNA MEG3、miR-21联合检测预测冠状动脉钙化的曲线下面积为0.88[95%CI:(0.84,0.91)],灵敏度为84.13%,特异度为85.79%。结论冠状动脉钙化病人血清LncRNA MEG3表达水平明显降低,miR-21表达水平明显升高,二者可能作为生物标志物,共同预示冠状动脉钙化发生。

长基因间非编码RNA 1475调控微小RNA-423-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 1475(LINC01475)对微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测胃癌组织和细胞的LINC01475和miR-423-5p水平并进一步通过双荧光素酶报告基因实验鉴定两者的靶向关系。选择胃癌SGC-7901细胞并分为4组:对照组(未转染)、LINC01475过表达组(转染过表达载体pcDNA3.1-LINC01475+miR-NC)、miR-423-5p过表达组(转染miR-423-5p模拟物mimics+空载体pcDNA3.1)和共过表达组(转染pcDNA3.1-LINC01475+miR-423-5p mimics);采用qPCR、MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估转染效果、细胞活力及迁移侵袭能力的变化。结果与癌旁组织相比,胃癌组织的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高,两者水平呈负相关(r=-0.686,P<0.05)。与人正常胃上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高(P<0.05)。在SGC-7901细胞中,miR-423-5p mimics显著降低了野生型LINC01475的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型LINC01475的荧光素酶活性(P>0.05)。与对照组相比,SGC-7901细胞的活力、划痕愈合率和穿膜细胞数在LINC01475过表达组中降低,而在miR-423-5p过表达组增多(P<0.05);共过表达组的SGC-7901细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论LINC01475可能部分通过抑制miR-423-5p表达在胃癌中发挥抑癌基因的作用。

基因间长链非编码RNA00963通过靶向miRNA-511-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨基因间长链非编码RNA00963(LINC00963)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法常规培养正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE和胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、Pa Tu8988,将Capan-1细胞分为NC组、si-NC组、si-LINC00963组、pc DNA-NC组、pc DNA-LINC00963组、mi RNA-NC组、mi RNA-511-3p组、anti-mi RNA-NC组、anti-mi RNA-511-3p组、si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组、si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测LINC00963和mi RNA-511-3p的表达水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶报告实验检测LINC00963和mi RNA-511-3p的靶向调控关系。结果与正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE比较,胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、PaTu8988中LINC00963相对表达量均升高,mi RNA-511-3p相对表达量均降低(P﹤0.05)。与si-NC组比较,siLINC00963组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均降低,细胞活性降低,细胞迁移和侵袭数目均减少(P﹤0.05);与mi RNA-NC组比较,mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均明显降低,细胞活性明显降低,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P﹤0.01)。mi RNA-511-3p与LINC00963野生型报告质粒共转染后Capan-1细胞的荧光素酶活性明显低于mi RNA-NC与LINC00963野生型报告质粒共转染后的细胞(P﹤0.01)。与si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组比较,si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均升高,细胞活性升高,细胞迁移和侵袭数目均增加(P﹤0.05)。结论低表达LINC00963可通过靶向上调miRNA-511-3p的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA BC002811对胃癌细胞活性、细胞间质转化及p27kip1活化的影响

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA) BC002811对胃癌细胞活性、细胞间质转化及p27kip1活化的影响。方法 :收集本院原发性胃癌手术切除样本50例,采用TaqMan RNA试剂盒检测BC002811的相对表达量。将胃癌细胞株HGC-27细胞培养及转染后分为HGC-27组(无转染的HGC-27细胞)、BC002811-NC组(HGC-27细胞+BC002811 siRNA-NC)、BC002811组(HGC-27细胞+BC002811 siRNA);HGC-27组、空载体组(HGC-27细胞+p27kip1空质粒)、p27kip1组(HGC-27细胞+p27kip1质粒);HGC-27组、BC002811+空载体组(HGC-27细胞转染BC002811+p27kip1空质粒)、BC002811+p27kip1组(HGC-27细胞转染BC002811+p27kip1)。Transwell分别检测各组HGC-27细胞侵袭、转移能力,采用免疫印迹检测HGC-27细胞vimentin、E-cadherin蛋白表达,采用qRT-PCR检测HGC-27细胞BC002811、p27kip1表达。结果 :与胃癌组织比较,癌旁组织BC002811的表达显著降低。与HGC-27组比较,BC002811组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高,HGC-27组与BC002811-NC组差异无统计学意义。与HGC-27组比较,p27kip1组HGC-27细胞的侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高,HGC-27组与空载体组差异无统计学意义。与HGC-27组比较,BC002811+空载体组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高;与BC002811+空载体组比较,BC002811+p27kip1组HGC-27细胞侵袭、迁移能力及E-cadherin表达水平显著降低,vimentin表达水平升高。Pearson相关分析结果显示,在HGC-27细胞侵袭、迁移中,BC002811与vimentin水平呈负相关性,与E-cadherin水平呈正相关;vimentin与E-cadherin水平呈负相关性。结论 :在胃癌细胞中BC002811-siRNA激活p27kip1水平、抑制胃癌细胞的迁移及侵袭,其作用机制可能与调控胃癌细胞间质转化蛋白表达相关。

急性髓系白血病患者外周血白细胞长链基因间非编码RNA324(LINC00324)与免疫表型的相关性分析

目的分析急性髓系白血病(AML)患者外周血白细胞长链基因间非编码RNA324(LINC00324)与免疫表型的关系。方法用实时荧光定量PCR和生物信息学数据库分析AML患者外周血白细胞及KG-1、THP-1、U937细胞株中UNC00324的表达水平,并采用Peraon相关分析40例AML患者LINC00324的表达水平与红细胞及血小板计数及LINC00324与免疫表型CD14、CD68、CD64、CDllb、CD4、CD45、CD33、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、CD163、CD2、CD58、CD117、CD43、CD34、CD99、CD8、CD38、CD10、CD13、CD56、CD7、TdT、CD235a、CD138、CD61、髓过氧化物酶(MPO)、CD19的关系。同时选取cBioPortal数据库的数据集(TCGA,NEJM 2013)分析173名AML患者的临床病例数据,分析患者肿瘤样本中LINC00324的表达水平与外周血幼稚细胞百分比及白细胞计数的相关性。结果AML患者外周血白细胞LINC00324表达下调,其表达水平与免疫表型CD33、红细胞及血小板数显著正相关。生物信息学数据库分析显示LINC00324在髓系白血病细胞株中低表达,AML患者中LINC00324表达与CD33、CD117、CDllb、CD14、CD64等多种免疫表型相关,与外周血幼稚细胞百分比及白细胞计数呈负相关。结论UNC00324可能参与调控免疫细胞的分化发育及功能,为AML靶向药物开发或治疗提供新策略。

联合检测血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16和微小RNA-16-5p对胃癌的诊断价值

目的探讨血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)联合微小RNA(miR)-16-5p检测对胃癌的诊断价值。方法选取武汉市第三医院2018年1月至2020年1月收治的102例胃癌患者作为胃癌组,另选取同期102名体检健康者为对照组。对比2组血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平,分析血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平与胃癌患者临床及病理参数的关系,Pearson相关性方法分析血清lncRNA SNHG16与miR-16-5p水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平对胃癌的诊断价值。结果胃癌组血清lncRNA SNHG16水平明显高于对照组,miR-16-5p水平明显低于对照组[(2.03±0.17)比(1.69±0.34)、(0.56±0.06)比(0.82±0.28)](均P <0.001)。胃癌患者血清lncRNA SNHG16、miR-16-5p水平与TNM分期、侵袭程度、淋巴结转移、远处转移相关(均P <0.05)。Pearson相关性分析结果显示,胃癌患者血清lncRNA SNHG16与miR-16-5p水平呈负相关(r=-0.405,P <0.001)。ROC曲线分析显示,lncRNA SNHG16与miR-16-5p联合[曲线下面积(AUC)=0.903,95%置信区间0.854~0.940]诊断胃癌的AUC大于lncRNA SNHG16(AUC=0.816,95%置信区间0.755~0.866)、miR-16-5p(AUC=0.826,95%置信区间0.766~0.875)单独检测。结论胃癌患者血清lncRNA SNHG16水平显著提升,miR-16-5p水平显著降低,二者呈负相关,联合检测血清lncRNA SNHG16和miR-16-5p水平可提升胃癌诊断价值。