乙型肝炎病毒基因型分布及耐药突变位点分析

目的探讨开封地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布,基因耐药突变位点分布情况。方法选取开封地区2018年1月至2020年12月期间收集200例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者,采用基因测序技术检测患者基因型,对检测结果进行统计分析。并对患者血清中HBV-DNA进行核苷类似物(NAs)耐药基因位点分析。结果开封地区200例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者基因型C型179例,占比97.8%,B型4例,占比2.2%,未检测出B+C型及其他型;200例患者测序结果中26例检测出NAs基因耐药突变位点,基因C型患者耐药突变位点检出率高于基因B型患者。结论开封地区乙型肝炎表面抗原阳性患者HBV基因型以C型为主,B型较少,未检测到其它基因型;基因C型患者NAs耐药位点检出率高于B型。NAs耐药突变位点中共检出9种不同耐药突变位点组合模式,以单位点突变为主。

PARK9基因rs207663位点突变与早期帕金森病认知改善治疗应答相关性

目的探讨PARK9基因rs207663位点突变与早期帕金森病认知改善治疗应答相关性。方法选取2020年10月至2023年10月于邯郸市第四医院神经内科接受治疗的100例早期帕金森病患者为研究组,以100例健康体检者为对照组。检测PARK9基因rs207663位点基因多态性,比较2组等位基因、基因型分布,以及分析不同基因型患者经治疗后的疗效情况。结果PARK9基因rs207663位点存在3种基因型:GG、GA、AA,研究组GG基因型、G等位基因频率高于对照组(40.0%vs 26.0%,P<0.05;63.0%vs 50.0%,P<0.01)。治疗后,3种基因型简易智能状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分均呈增加趋势,其中GG基因型MMSE评分低于GA基因型[(22.95±1.34)分vs(23.89±1.68)分,P<0.05],GG基因型MoCA评分低于GA基因型[(24.86±1.83)分vs(25.12±1.48)分,P<0.05]。GA基因型总资产、安全选项次数、负反馈利用率均高于GG基因型[(-1541.50±537.24)元vs(-3102.00±1274.38)元,P<0.01;(9.24±3.27)次vs(7.11±2.14)次,P<0.05;(0.51±0.23)vs(0.35±0.15),P<0.05];AA基因型风险选项次数低于GA基因型,GA基因型风险选项次数低于GG基因型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARK9基因rs207663位点多态性与早期帕金森病认知改善治疗应答存在显著相关性,其中GG基因型患者治疗应答较差,GG基因型患者偏爱高风险和高回报选项,负反馈利用率较低。

测序比对基因突变位点与修水黄羽乌鸡卷羽性状的关联性

为探明修水黄羽乌鸡羽毛外卷遗传机制,对基础群进行系统选育,且通过测序寻找与卷羽性状相关的位点。结果表明,在修水黄羽乌鸡群体中,部分个体在出壳10日龄后逐渐显现羽毛外卷的性状,通过测序对比,在E22C19W28_E50C23区域KRT75基因的上游序列上检测到1处碱基突变,发现单核苷酸多态位点(G> T)与卷羽性状极显著相关(P<0.001)。

厦门地区结核病患者对利福平与异烟肼的耐药情况及其耐药基因突变位点分析

目的:探究厦门地区结核病患者对利福平与异烟肼的耐药情况及其耐药基因突变位点,为临床耐药结核病患者的抗结核治疗提供参考。方法:选取2019年1月—2020年12月厦门大学附属第一医院收治的1029例结核病患者作为研究对象,采集患者的各种临床标本并通过DNA微阵列芯片技术检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平与异烟肼的耐药情况及其耐药基因突变位点的分布情况。结果:1029例结核病患者分离出的MTB对利福平和/或异烟肼的总耐药率为18.56%(191/1029);男性患者对利福平和/或异烟肼的总耐药率略高于女性(19.24%vs 16.60%,P>0.05);在各年龄段中,40~<60岁患者对利福平和/或异烟肼的总耐药率最高(19.80%),而<20岁患者对利福平和/或异烟肼的总耐药率最低(12.82%),但各年龄段结核病患者对利福平和/或异烟肼的总耐药率经比较其差异无统计学意义(χ^(2)=1.553,P>0.05);共有127例患者的利福平耐药相关基因rpo B发生突变,突变率为12.34%,位点531(C→T)突变频率最高(为52.76%),共有141例患者的异烟肼耐药相关基因发生突变,其中kat G基因突变100例,突变率为9.72%,位点315(G→C)突变频率最高(为68.09%),inh A基因启动子突变40例,突变率为3.89%,kat G基因和inh A基因启动子同时突变1例;1029例结核病患者中耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)的发生率为7.48%,基因rpo B 531(C→T)-kat G 315(G→C)的突变率最高(为45.45%),有1例患者的MTB的rpo B、kat G和inh A基因均发生了突变。结论:厦门地区MTB耐多药和利福平耐药的形势严峻,rpo B 531、kat G 315和rpo B 531-kat G 315是其利福平耐药、异烟肼耐药和耐多药的主要突变位点。

结直肠癌患者RAS、BRAF基因突变与MSI状态的相关性及其临床病理特征

目的:结直肠癌是人类最常见的恶行肿瘤之一,其发病率和病死率呈逐年上升趋势。本研究旨在分析结直肠癌患者大鼠肉瘤病毒癌基因(rat sarcoma viral oncogene,RAS)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物(V-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B,BRAF)突变与微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)状态相关性及其临床病理特征,为结直肠癌临床治疗及预后评估提供依据。方法:回顾性分析444例结直肠癌患者的临床病理资料,并提取肿瘤组织基因组DNA,采用荧光定量PCR法检测Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)、Neuroblastoma大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(neuroblastoma rat sarcoma viral oncogene homolog,NRAS)第2、3、4外显子及BRAF V600E突变;运用PCR-毛细血管电泳行MSI状态分析。结果:K(N)RAS基因突变184例(41.44%,184/444),其中KRAS突变173例(94.02%,173/184),NRAS突变11例(5.98%,11/184),K(N)RAS共突变3例。BRAF V600E突变21例(4.7%,21/444)。微卫星高度不稳定(microsatellite instability high,MSIH)48例(10.81%,48/444),微卫星低度不稳定(microsatellite instability low,MSI-L)和微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)共396例(89.19%,396/444)。K(N)RAS基因突变右半结肠癌多于左半结肠癌,且黏液腺癌突变率高于单纯腺癌(均P<0.05)。K(N)RAS基因突变与患者性别、年龄、肿瘤大小、肉眼分型、组织学分化程度、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。女性BRAF V600E突变高于男性,低分化高于中分化(均P<0.05),BRAF V600E突变与患者发病年龄、肿瘤位置、大小、肉眼分型、组织学类型、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。发生MSI-H的患者中,右半结肠癌多于左半结肠癌,肿瘤直径≥4.5 cm病例多于直径更小病例,隆起型多于其他肉眼分型,黏液腺癌多于单纯腺癌,低分化多于高分化(均P<0.05),而与患者性别和年龄均无关(均P>0.05)。K(N)RAS突变与MSI-H发生无关(P>0.05),但RAS基因Gly位点突变与MSI-H发生相关(P<0.05)。携带RAS基因Gly位点突变的MSI-H结直肠癌患者男性多于女性,发病年龄无差异,右半结肠多于左半结肠,肉眼分型多为溃疡型,单纯腺癌比例高于黏液腺癌,多为中低分化,较多处于病理分期I~II期,常不伴淋巴结转移和BRAF V600E突变,Gly突变位点多为Gly12Ser/Asp突变。BRAF V600E突变与MSI-H发生有关(P<0.05)。与K(N)RAS突变型MSI-L/MSS结直肠癌比较,K(N)RAS突变型MSI-H结直肠癌较易发生于右半结肠,肿瘤直径≥4.5 cm的病例较多,组织学类型多为黏液腺癌,较少发生淋巴结转移,多处于病理分期I~II(均P<0.05);K(N)RAS突变型MSI-H结直肠癌与性别、年龄、肿瘤肉眼分型、组织学分化均无相关(均P>0.05)。与RAS野生型-MSI-L/MSS结直肠癌比较,RAS野生型-MSI-H结直肠癌多发生于右半结肠,肿瘤直径≥4.5 cm,多为溃疡型和隆起型,较多为黏液腺癌,且多为中低分化(均P<0.05),而RAS野生型-MSI-H结直肠癌与性别、年龄、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。结论:结直肠癌KRAS基因Gly位点突变、BRAF V600E突变与MSI-H发生相关;MSI-H-RAS基因Gly点突变结直肠癌患者有其独特的临床病理特征;RAS-MSI基因状态与临床病理特征相关;K(N)RAS、BRAF V600E、MSI检测有利于结直肠癌患者个体化治疗及预后评估。

CYP2C9*3和VKORC1基因位点突变对华法林稳定剂量及PT-INR达标天数的影响

目的探讨CYP2C9*3和VKORC1基因位点突变对华法林稳定剂量及凝血酶原时间-国际标准化比值(PT-INR)达标天数的影响。方法收集应用华法林抗凝治疗住院患者69例,采用焦磷酸测序检测CYP2C9*3和VKORC1基因位点多态性,同步检测患者PT-INR,查阅并收集患者病历资料、用药剂量及实验室检验数据。结果VKORC1野生型占85.51%(59/69),突变型占14.49%(10/69)。CYP2C9*3野生型占89.86%(62/69),突变型占10.14%(7/69)。两种基因位点均为野生型占78.26%(54/69),一种基因位点突变占18.84%(13/69),两种基因位点均突变占2.90%(2/69)。VKORC1基因型AA+CYP2C9*3基因型AC的华法林稳定剂量均低于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,VKORC1基因型AG/GG+CYP2C9*3基因型AA的华法林稳定剂量高于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,差异有统计学意义(P<0.05)。VKORC1基因型AA+CYP2C9*3基因型AA的PT-INR达标天数少于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VKORC1和CYP2C9*3两个基因位点突变影响华法林稳定剂量,并造成PT-INR达标天数延长。

等位基因差异特异性PCR检测HBVDNA的前C区1896突变位点及其临床意义

为了探讨ＨＢＶ前Ｃ区 １８９６突变位点检测的临床意义，采用３－末瑞等位基因差异特异性ＰＣＲ方法对９５例乙型肝炎病毒感染者的ＨＢＶＤＮＡ１ ８９６位点进行基因型（野生株／突变株）的检测，结果显示：总突变率为６４．２％，总野生率为５５．８％，纯野生型和纯突变型的检出率分别为２８．４％和２７．４％；不同临床类型的乙肝病毒感染者均可出现突变，其野生型、突变型和混合感染型的检出率之间的比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），急性乙肝与慢性乙肝、携带者、肝硬化和肝癌的总突变率存在差异（Ｐ＜０．０５）；血清不同ＨＢｅ系统均可发生突变．抗－ ＨＢｅ阳性组的突变率显著高于ＨＢｅＡｇ阳性和ＨＢｅ系统阴性组（Ｐ＜０．０５），提示：机体感染了ＨＢＶ后．变异主要是发生在慢性持续性感染过程中．突变株逐渐替代了野生株并成为优势株．使宿主得以持续感染ＨＢＶ。

一种筛选水稻Mutmap+突变位点的简易方法

利用基因组重测序技术进行基因定位目前已在水稻功能基因组学研究中得到广泛应用。其中,Mutmap+技术因无需进行杂交操作,且无需背景亲本的基因组信息,具有更广阔的应用前景。然而,目前Mutmap+技术筛选候选突变位点的方法依赖于复杂的数据计算,要求研究者具有较高的生物信息学知识。根据Mutmap+的实验原理,设计一种简单的筛选候选突变位点的方法。该方法对混池测序的表型池与非表型池的突变指数分别加以限定,即表型池突变指数等于1,非表型池突变指数小于0.5。对测序所得突变位点进行简单排序,即可得到候选突变位点。运用该筛选方法,从6个水稻不育突变体成功克隆突变基因,并对其中1个突变体进行了细胞学表型的验证。该方法可简化Mutmap+技术的数据分析流程,便于将Mutmap+技术更好地运用到水稻功能基因组学研究中。

安徽淮北市CHB患者HBV基因型、耐药类别分布与耐药突变位点的分析

目的了解安徽淮北市慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型、耐药类别分布特征及耐药位点。方法选取2018年1月—2020年12月淮北矿工总医院及其下属医院收治的HBV-DNA阳性CHB患者141例,收集血清。采用荧光定量PCR反应进行HBV-DNA定量检测。采用PCR-RFLP法检测HBV基因分型。采用Sanger法测序分析P区基因序列核苷类似物耐药相关突变位点和耐药情况。结果141例CHB患者中有109例成功分型,其中HBV基因型以C型为主(71.56%),B型(17.43%)次之,B+C型最少(11.01%)。CHB患者耐药突率为25.69%,且C型(28.21%)最高。常用核苷类似物的耐药性,以拉米夫定及阿德福韦最高(60.71%),替比夫定次之(25.00%)、恩替卡韦最低(3.57%)。P区检出16种耐药突变类型和3种突变模式,均以C型为主。其中阿德福韦以rtN236T和rtA181T/S常见;拉米夫定以rtL180M+M204I/V为主,rtA181T及V207M次之;恩替卡韦以rtA181S+T184N为主;替比夫定以rtL180M+M204I/V常见。结论安徽淮北市HBV基因型以C型为主,C型耐药突变率最高。核苷类似物耐药均以C型为主,且突变模式较复杂。不同类型CHB患者耐药突变类别及位点存在差异性,因此有必要对HBV基因型及耐药相关突变进行检测,以提高核苷类似物抗病毒治疗的疗效。

两个中国视网膜色素变性家系EYS新突变位点的临床表型分析

目的 应用目标区域捕获技术检测两个中国视网膜色素变性(RP)家系的EYS新突变位点,并分析其类型与临床表型特征的关系。方法 采集2018年10月在沈阳何氏眼科医院门诊确诊为视网膜色素变性的两个家系共6人纳入研究,采集所有受检者外周血5 ml,提取DNA后,采用目标区域捕获测序和Sanger验证来鉴定基因变异位点,并进一步分析该基因变异的特殊临床表型。结果 在两个家系中,门诊确诊2例患者, 4例正常表型家庭成员。基因检测发现, 1例视网膜色素变性家族中发现了EYS基因的两个错义杂合突变c.3489T>A和c.5852C>T。在另一例视网膜色素变性家族中发现了EYS基因的两个基因突变,分别是c.6557G>A和c.8153C>A,经家系共分离确认为复合杂合突变。两个家系的夜盲发病年龄提前,视力极差。结论 本研究报告了2例中国常染色体隐性遗传视网膜色素变性(ARRP)家系中EYS的两个新发突变位点c.8153C>A和c.5852C>T,扩充了视网膜色素变性的基因谱和新的临床表型。光学相干断层扫描血管成像(OCT-A)检查有助于评估黄斑中心凹下脉络膜毛细血管萎缩程度,间接评估病情发展。

猪GH基因部分突变位点对生产性能的影响

本试验利用PCR -RFLPs技术 ,用MspⅠ ,ApaⅠ两种限制酶 ,检测了猪生长激素基因 +2 0 6～ +711位共5 0 6bp片段中的 [+2 95～ +30 0、+5 6 3～ +5 6 6 ]2处突变位点 ,分析了各多态位点在姜曲海猪中的分布及其与生产性能的关系。发现 :姜曲海猪中 ,MspⅠ酶切突变位点中的G1G2基因型和G2G2基因型个体的生产性能没有差异 ,不同日龄体重在两组间变化没有规律。ApaⅠ酶切突变位点G4G4基因型个体的 2 0日龄体重、45日龄体重高于G3G3/G3G4基因型个体 ,但差异不显著 ,G4G4基因型个体的 70日龄体重极显著高于G3G3/G3G4基因型个体 (P <0 .0 1)。G4G4基因型个体的 0～ 70日龄日增重也极显著高于G3G3/G3G4基因型个体 (P <0 .0 1)。这些结果显示GH基因有可能作为数量性状基因座的侯选基因。

PCR阻断联合荧光探针检测HBV基因前C区G1896A突变株

目的研究和评估PCR扩增阻断联合荧光探针检测乙型肝炎病毒(HBV)基因前C区1896位点突变的新方法。方法根据HBVDNA前C区1896位点的突变设计一系列引物,引物3′末端位于1896位,并与突变模板1896位碱基互补.在引物的倒数第2及第3位碱基设计为错配碱基,以增加反应的特异性。结果以2个错配碱基的突变型引物对野生型质粒进行PCR扩增,具有显著的阻断作用,对1896位突变型质粒无阻断作用,而且对其检测的最低拷贝数可达5×103拷贝/ml。选用该引物对95例随机采集的HBV阳性标本进行HBV前C区G1896A位碱基突变的检测,8例为阳性,其突变率为8.4%。结论本法在临床标本检测中是一种有效的和简便的方法。

中国遗传性胰腺炎患者胰蛋白酶原基因多位点杂合突变及其临床特征(英文)

用基因产物直接测序法对2个遗传性胰腺炎家系中胰腺炎患者(共有4例成员)的胰蛋白酶原基因(cationic trypsinogen,PRSS1)5个外显子进行测序,并分析其各自的临床特征.在4例胰腺炎患者中均出现了PRSS1基因杂合突变,但两家系PRSS1基因突变的位点不同,且临床表现差异较大,其中家系1出现6例糖尿病患者且发病年龄较家系2明显延迟,平均发病年龄为29岁,分析其PRSS1基因发现3号外显子336位碱基存在G→A杂合性突变,为中性突变,表达的氨基酸从赖氨酸(Lys)→赖氨酸(Lys),同时在同一外显子的361位碱基还存在另一个G→A杂合性突变,造成121位的丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)所取代,胰蛋白酶原的空间结构发生改变,其与抑制因子的结合位点消失,"保护失败"而产生有活性的胰蛋白酶,造成胰腺自身的消化.而家系2未发现糖尿病患者,其胰腺炎患者的血清肿瘤标志物不增高,先证者(Ⅲ8)在胰腺炎发病过程中表现为CD4+T/CD8+Tcell和乙肝表面抗体(anti-HBs)随病程进展逐渐降低,而Ⅲ7不表现出此现象,分析其PRSS1基因发现3号外显子361位碱基同样存在G→A(c.361G→A)突变,而且在415位还存在一个杂合性突变点T→A(c.415T→A),其中c.415T→A不存在于Ⅲ7.胰蛋白酶原基因存在多种形式的突变,而且与临床表型相关.

猪解耦联蛋白基因3(UCP3)3′侧翼区突变位点多态性及其对胴体、肉质性状的影响

利用PCR-RFLP技术,分析了猪解耦联蛋白基因3(UCP3)的3′侧翼区一碱基变异区Ava 位点的多态性在不同猪群体间的基因型分布及其多态性对猪胴体、肉质性状的影响。结果表明:经χ2独立性检验,发现该多态片段3种基因类型在各品种间分布不一致,杜洛克与中国地方猪种淮南猪、二花脸猪、清平猪、八眉猪相比差异极显著(P<0.01),中国地方猪种间比较差异均不显著(P>0.05);采用最小二乘法以及回归法分析了大白×梅山资源家系F2代139头个体的Ava 位点多态性与相应的胴体、肉质性状的连锁关系,未发现该位点对猪胴体、肉质性状的显著性影响。UCP3基因3′侧翼区多态位点基因片段在各猪群间分布类型的不同显示出中国地方猪种与外来猪种相比所具有的种质差异,但该位点是否用作为改良猪胴体、肉质性状的标记位点并在标记辅助选择中加以应用还有待进一步的研究。

猪GH基因部分突变位点在不同品种中的分布

采用 PCR-RFLPs技术 ,以 Msp 、Apa 为内切酶 ,检测猪 GH基因 2 0 6～ 71 1位大小为 5 0 6bp片段中 2处突变位点 ( 2 95～ 3 0 0位及 5 63～ 5 66位 ) ,分析各多态位点在皮特兰猪、杜洛克猪、长白猪、姜曲海猪、梅山猪 5个品种中的分布。结果表明 :1 Msp 酶切突变位点的 3种基因型在 5个品种中分布差异极显著 ,皮特兰猪与长白猪、姜曲海猪、梅山猪 ,杜洛克猪与长白猪、梅山猪 ,长白猪与姜曲海猪两两猪群间差异极显著 ,其他猪群间差异不显著。中国地方梅山猪、姜曲海猪和国外长白猪等位基因 G1 的比例很低 ,皮特兰猪群的等位基因 G1 的比例略高 ,其他猪群 G2 等位基因频率较高。2 Apa 酶切突变位点 3种基因型 ,除梅山猪与其他猪群间分布差异极显著外 ,其他两两猪群间分布无差异 ,但各群体中 G4

镉和氯化汞致体细胞hprt基因位点突变的作用和突变频率的研究

目的 了解镉和汞对细胞hprt基因位点的影响 ,探讨化学诱变物致机体损伤早期检测的敏感指标。方法 采用多核细胞法研究化学诱变物氯化汞和镉对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果 氯化汞可诱发大鼠血淋巴细胞hprt基因位点突变 ,突变频率随着染毒浓度的增加而升高 ,突变频率 ^Y (10 -3 )与氯化汞浓度C (mg/kg)之间拟合成 ^Y =0 0 4 2 3C +1 0 4 6 3的直线回归方程。不同浓度金属镉也能致hprt基因突变 ,镉浓度与突变频率之间有剂量反应关系。 结论 氯化汞和镉对血淋巴细胞hprt基因位点及突变频率有影响 。

国人SCN5A基因新的同义突变位点

目的研究中国人心原性猝死相关基因SCN5A突变位点。方法采用聚合酶链反应和DNA测序对1例RQT间期综合征(LQTs)和2例特发性J波患者SCN5A基因进行突变检测。结果①3例患者在国内、外已知的SCN5A突变位点上,均未发现有突变。②发现1个新的同义突变(T990C),位于钠通道α-亚基的DⅠ区段S5～S6胞外环上。结论这个新的同义突变可能通过影响门控性钠通道的跨膜电流而与恶性心律失常的发生相关。

乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前C基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶(ALT)关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组:大三阳组(106例)和小三组(66例)。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异(P<0.05),nt1896变异率无显著差异(P>0.05)。小三阳患者中ALT升高组(>40 U/L)HBV DNA(+)患者nt1896变异率100%,而ALT正常组HBV DNA(+)患者nt1896变异率30%(3/10)(P<0.05)。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率(P>0.05)。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。

eNOS基因G894T突变位点与缺血性脑卒中的关系

目的 为了了解内皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)基因G894T突变位点与中国人群缺血性脑卒中之间的关系。方法 我们利用PCR和分子杂交技术对北京地区 2 94例缺血性脑卒中患者及 2 80例非卒中对照的eNOS基因G894T突变位点进行了检测和分析。结果 G894T位点在两组人群中的分布均符合Hardy -Weinberg遗传平衡定律 ,但该位点基因型频率及等位基因频率在两组人群中分布无差异。结论 eNOS基因G894T突变不是中国人群缺血性脑卒中发病的遗传学危险因素。

耐链霉素结核分枝杆菌rpsL基因高突变位点43Codon分子信标检测的实验研究

目的选择耐链霉素(STR)结核分枝杆菌rpsL基因主要突变位点密码子43序列设计分子信标探针及扩增体系,并建立运用荧光显微镜及图像分析软件检测荧光结果及定性判断的方法。方法运用软件Beacon designer设计43Codon分子信标探针及建立其扩增体系,采用荧光显微镜观测反应后的荧光信号及图像分析软件定性判断结果。结果包含43Codon rpsL基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物条带清晰;通过荧光显微镜观测到标准株及耐STR株PCR产物与分子信标探针杂交后荧光信号区别明显;67株耐STR与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,P<0.05和P<0.01的耐STR组检出率为80%。结论分子信标技术是一种具有高灵敏、高特异核酸检测技术;采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。