急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA母系表达基因3和Zeste同源物增强子-2表达与神经功能损伤的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)与Zeste同源物增强子-2(EZH2)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达水平及其与神经功能损伤之间的关系。方法选取延安市人民医院2021年1月至2022年11月收治的92例AIS患者为脑卒中组,92例健康体检者为对照组,根据NIHSS评分将脑卒中组患者分为致残性损伤组19例,非致残性损伤组73例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应、酶联免疫吸附法分别检测血清lncRNAMEG3、EZH2水平。采用Spearman相关分析法进行AIS患者血清lncRNAMEG3、EZH2表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分之间的相关性分析;采用多因素Logistic回归分析AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、EZH2水平对AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断价值。结果脑卒中组患者血清lncRNA MEG3、EZH2表达水平均高于对照组(t=11.817、11.542,P<0.05)。Spearman相关分析显示,AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.540、0.603,P<0.01)。致残性损伤组体质量指数、吸烟史占比、甘油三酯、总胆固醇、同型半胱氨酸、发病-到院时间(ODT)、lncRNAMEG3、EZH2水平均高于非致残性损伤组(t/χ2=2.103、5.050、9.121、5.585、2.276、5.448、4.638、4.682,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,甘油三酯、总胆固醇、lncRNA MEG3、EZH2以及ODT均是AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素(OR=4.853、4.277、2.674、3.052、3.901,P<0.05)。lncRNA MEG3、EZH2联合诊断AIS患者合并神经功能致残性损伤的曲线下面积(AUC)大于lncRNAMEG3以及EZH2单独诊断的AUC(Z=2.626、2.954,P<0.01),敏感度、特异度分别为94.74%、82.15%。结论AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平均上升,与AIS患者神经功能损伤程度均正相关,可用作AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断指标,且联合诊断效果更好。

特应性皮炎患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3和微小RNA-23b-3p水平检测及意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)和微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)水平检测及意义。方法:选取AD患儿165例(AD组)和体检健康儿童160例(对照组)为研究对象。采用荧光定量PCR法检测两组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平。采用AD积分指数(SCORAD)对AD患儿疾病严重程度进行评估,并将AD组患儿分为AD轻度组(65例)、AD中度组(68例)和AD重度组(32例)。比较对照组和AD组以及不同严重程度AD患儿血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平。采用Pearson法分析AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平和SCORAD评分三者间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平检测对中、重度AD的诊断价值。结果:与对照组比较,AD组血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平显著降低(均P<0.05)。与AD轻度组比较,AD中度组和AD重度组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平依次降低,SCORAD评分依次升高(均P<0.05)。AD组血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平呈正相关(r=0.404,P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p水平与SCORAD评分均呈负相关(r=-0.383、-0.366,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断中度AD的曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.753、0.883。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断中度AD的AUC更高(Z=2.177、3.595,均P<0.05)。血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单项及联合检测诊断重度AD的AUC分别为0.794、0.778、0.895。与血清lncRNA MEG3、miR-23b-3p单独检测比较,两者联合检测诊断重度AD的AUC更高(Z=2.104、2.293,均P<0.05)。结论:AD患儿血清lncRNA MEG3和miR-23b-3p水平呈低表达,与病情严重程度有关,有望成为评估儿童AD病情程度的生物标志物。

胆管癌患者血清长链非编码RNA母系表达基因3表达及其与预后相关性研究

目的:探讨胆管癌患者血清长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)表达及其与预后的关系。方法:选取胆管癌患者92例(胆管癌组)和体检健康者92例(对照组)为研究对象。术后随访36个月,根据预后情况分为预后不良组(44例,患者死亡)和预后良好组(48例,患者存活)。采用荧光定量PCR检测血清lncRNA MEG3表达水平。比较对照组与胆管癌组血清lncRNA MEG3表达水平。比较预后良好组和预后不良组临床资料、病理特征及血清lncRNA MEG3表达水平。采用Spearman法分析胆管癌患者血清lncRNA MEG3表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、血管浸润的相关性。采用多因素Logistic回归分析胆管癌患者预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA MEG3对胆管癌患者预后不良的预测价值。结果:胆管癌组血清lncRNA MEG3表达水平低于对照组(P<0.05)。预后不良组肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、有血管浸润比例高于预后良好组,血清lncRNA MEG3表达水平低于预后良好组(均P<0.05)。胆管癌患者血清lncRNA MEG3表达水平与肿瘤分化程度呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移、血管浸润呈负相关(均P<0.05)。肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、血清lncRNA MEG3低表达是胆管癌患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。血清lncRNA MEG3预测胆管癌患者预后不良的曲线下面积为0.820,截断值为0.620,敏感度为87.10%,特异度为70.80%。结论:胆管癌患者血清lncRNA MEG3呈低表达,与患者预后密切相关,对预测胆管癌患者预后不良有较高预测价值。

长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染(LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir)组、共转染阴性对照(LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒)组,采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型,25 mmol·L^(-1)葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,对照组细胞以正常培养基培养,将大鼠与细胞均分组进行处理,以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后,通过伊文思蓝(EB)检测大鼠视网膜血管通透性;TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率;EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况;依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量;实时荧光定量PCR实验检测HRMEC及大鼠视网膜组织miR-145-5p表达;蛋白免疫印迹法检测HRMEC及大鼠视网膜组织凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)表达;双荧光素酶实验验证HRMEC中LncRNA MEG3对miR-145-5p的靶向调节作用。结果LncRNA MEG3过表达组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC增殖率均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC增殖率均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均低于模型组、共转染组,Bcl-2表达均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均高于模型组、共转染组,Bcl-2表达均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3过表达质粒组细胞相对荧光素酶活性(0.33±0.05)低于转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3空载质粒组(1.02±0.21),差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA MEG3可通过靶向下调miR-145-5p表达,抑制炎症反应,减轻DR大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡,促使HRMEC DR细胞模型存活,改善DR大鼠视网膜血管屏障功能。

靶向淋巴细胞激活基因3(LAG-3)纳米抗体的筛选与活性分析

目的建立淋巴细胞激活基因3(LAG-3)免疫噬菌体纳米抗体文库,获得高特异性和亲和力的抗LAG-3纳米抗体,并鉴定其功能活性。方法采用人LAG-3蛋白免疫羊驼,获取外周血cDNA;通过巢式PCR获得纳米抗体基因,构建至pComb3XSS质粒,电转至大肠杆菌XL1-Blue中构建纳米抗体噬菌体免疫文库,并对文库进行质量分析。通过噬菌体展示技术筛选抗LAG-3特异性纳米抗体,通过第二代基因测序技术获得纳米抗体的基因序列。将目的序列构建到大肠杆菌BL21(DE3)周质表达载体pET-22b(+)中进行抗体表达,Prism A柱进行纯化,通过高效液相色谱-质谱分析(HPLC-MS)、ELISA、Western blot法和表面等离子共振技术(SPR)进行抗体性质和功能分析。结果构建的纳米抗体噬菌体免疫文库的库容为7.20×10^(8)菌落形成单位(CFU),序列分析文库多样性良好,经过4轮淘筛后获得3条具有不同氨基酸序列的抗LAG-3纳米抗体,分别为重链抗体重链可变区结构域-L1-3(VHH-L1-3)、VHH-L3-2和VHH-L13-2,纳米抗体表达纯化后纯度在95%以上,三种抗体均可以与重组人LAG-3蛋白进行特异性结合;其中VHH-L13-2抗体的亲和力指数KD值为3.971×10^(-9)mol/L,且对于LAG-3和纤维蛋白原样蛋白1(FGL-1)的结合具有抑制作用,半数抑制浓度(IC_(50))值为15.58 nmol/L。结论成功构建了LAG-3纳米抗体噬菌体免疫文库,筛选获得了特异性好、亲和力高的LAG-3纳米抗体,且对于LAG-3与其配体的结合具有一定的抑制作用。

老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3和信号素3A表达及其临床意义

目的分析老年急性缺血性脑卒中患者N-myc下游调节基因3(NDRG3)和信号素3A(SEMA3A)表达及其临床意义。方法选择2020年9月至2022年9月聊城市人民医院老年病科收治的老年急性缺血性脑卒中患者100例(研究组)。研究组根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为轻度组34例,中度组31例,重度组35例;出院后随访3个月,依照改良的Rankin量表评分分为预后良好组69例,预后不良组31例。另选取同期我院健康体检者100例(对照组)。使用Westernblot法检测外周血单个核细胞(PBMC)中NDRG3、SEMA3A表达,ELISA法检测外周血内皮生长因子、转化生长因子β1、TNF-α、白细胞介素17水平,Spearman等级相关性分析NDRG3、SEMA3A与NIHSS评分的相关性,ROC曲线分析NDRG3、SEMA3A对老年急性缺血性脑卒中患者预后不良的预测价值。结果研究组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达较对照组明显升高(1.11±0.16vs0.76±0.13,0.78±0.13vs0.42±0.09,P<0.01)。轻度组、中度组、重度组PBMC中NDRG3、SEMA3A表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。预后不良组NDRG3、SEMA3A表达明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关性分析显示,老年急性缺血性脑卒中患者NIHSS评分与NDRG3、SEMA3A表达呈正相关(r=0.597,P<0.01;r=0.618,P<0.01),NDRG3与SEMA3A表达呈正相关(r=0.477,P<0.01)。ROC曲线分析显示,NDRG3+SEMA3A联合预测的曲线下面积优于NDRG3、SEMA3A单独预测(0.962vs 0.861、0.880,P<0.01)。结论老年急性缺血性脑卒中患者NDRG3、SEMA3A表达上调,且与患者病情严重程度及预后密切相关。

B淋巴细胞瘤-2关联永生基因3蛋白、多重肿瘤抑制基因1在宫颈癌癌前病变中表达及联合液基细胞学检查的临床意义

目的研究B淋巴细胞瘤-2关联永生基因3(BAG3)蛋白、多重肿瘤抑制基因1(P16)在宫颈癌癌前病变中表达及联合液基细胞学检查的临床意义。方法选择绵阳市中心医院2015年6月至2017年6月在妇科门诊筛查并确诊的120例宫颈病变病人为研究对象,根据其病变情况分为两组,其中癌前病变组病人69例,宫颈癌组病人51例。对比两组病人的BAG3、P16水平,将不同严重程度宫颈癌癌前病变病人的BAG3、P16水平进行比较,分析联合检测效能。结果宫颈癌组病人的BAG3(2.74±0.37)水平、P16(1.45±0.38)水平显著高于癌前病变组BAG3(1.70±0.51)、P16(0.53±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。不同严重程度宫颈癌癌前病变病人的BAG3和P16水平差异有统计学意义(P<0.05),其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)组的BAG3(1.01±0.24)水平低于CINⅡ组BAG3(1.78±0.79)和CINⅢ组的BAG3(2.33±0.88),且CINⅡ组低于CINⅢ组,差异有统计学意义(P<0.05);CINⅠ组的P16(0.21±0.06)水平低于CINⅡ组P16(0.45±0.10)和CINⅢ组的P16(0.72±0.17)水平,且CINⅡ组低于CINⅢ组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合诊断对于宫颈癌的诊断特异度显著高于单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线分析结果发现联合检测对于宫颈癌癌前病变的诊断ROC曲线下面积显著高于单独检测(P<0.05)。结论随着宫颈癌前病变的进展,P16、BAG3表达增加,BAG3蛋白、P16联合液基细胞学检查对于病人的诊断具有积极的意义。

长链非编码RNA母系表达基因3对宫颈癌细胞自噬的影响

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)对宫颈癌细胞自噬的影响。方法将人宫颈癌细胞系HeLa分为两组,对照组转染空载质粒的HeLa细胞,实验组使用病毒转染方式对HeLa细胞系进行过表达MEG3基因。使用实时荧光定量聚合酶链反应技术测定HeLa细胞中MEG3基因的信使RNA(mRNA)表达水平,然后采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Western blot技术检测HeLa细胞中自噬标记蛋白[微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ]的表达水平。结果实验组lncRNA MEG3 mRNA表达水平显著高于对照组(750.59±7.30比1.01±0.04)(t=324.911,P<0.001)。不同时点间HeLa细胞增殖率的主效应差异有统计学意义(P<0.01),不考虑测量时间两组间的主效应差异有统计学意义(P<0.01),组间和时点间存在交互作用;与对照组相比,实验组不同时点间HeLa细胞的细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。实验组HeLa细胞总凋亡率明显高于对照组[(32.43±0.50)%比(19.67±0.05)%](t=36.032,P<0.001)。两组LC3-Ⅰ蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组LC3-Ⅱ蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值低于对照组(P<0.01)。结论lncRNA MEG3可以抑制宫颈癌自噬和增殖活性,促进肿瘤细胞的凋亡,有望成为宫颈癌治疗的靶点。

索磷布韦/维帕他韦联合或不联合利巴韦林治疗基因3型慢性丙型肝炎肝硬化患者的疗效和安全性

目的探讨索磷布韦/维帕他韦±利巴韦林(sofosbuvir/velpatasvir±ribavirin,SOF/VEL±RBV)治疗基因3型丙型肝炎肝硬化患者的疗效和安全性。方法回顾性纳入2018年6月至2023年2月就诊于昆明市第三人民医院诊断为基因3型(GT3)肝硬化患者,使用SOF/VEL+RBV治疗12周,如有RBV禁忌或者RBV不耐受,则采用SOF/VEL治疗12或24周。分析患者在治疗前、治疗4周、12周及停药后12周的病毒学指标、肝肾功能指标和不良反应等。结果最终纳入319例GT3肝硬化患者,其中SOF/VEL+RBV组308例,SOF/VEL组11例。停药12周后,SOF/VEL+RBV组持续病毒学应答(SVR12)率达98.37%(303/308),与基线相比,APRI评分和FIB-4指数水平均下降(P<0.05),总胆红素、天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。SOF/VEL组SVR12率为72.73%(8/11)。SOF/VEL+RBV组的不良反应为轻度溶血性贫血(15.26%)、乏力(8.12%)和皮疹(8.77%),SOF/VEL组为1例乏力(9.09%)。结论索磷布韦/维帕他韦联合利巴韦林方案在基因3型丙肝感染的代偿期肝硬化和失代偿期肝硬化患者中都能获得较高SVR12率(98.37%),生化学指标和肝纤维化程度均较治疗前有所改善且安全性好。

外切体复合物基因3在肝癌中的预后价值及其免疫相关性

目的:基于生物信息学和实时定量PCR(qRT-PCR)实验分析外切体复合物基因3(EXOSC3)在肝癌中的差异表达、预后价值、潜在机制及其免疫相关性。方法:运用TCGA数据库和ICGC数据库分析EXOSC3在肝癌中的表达情况和预后价值,并用qRT-PCR验证EXOSC3在肝癌中的表达。在TCGA数据库中分析EXOSC3在肝癌中的共表达基因并进行GO和KEGG富集分析。运用TIMER数据库和CIBERSORT算法分析EXOSC3与肿瘤免疫细胞浸润的相关性,评估其对免疫检查点抑制治疗的疗效。结果:EXOSC3在肝癌中高表达并与患者预后显著相关,共表达基因富集分析显示EXOSC3可能通过细胞周期、p53等信号通路调控肝癌的发展进程。同时,EXOSC3与6种免疫细胞浸润显著相关,并可能影响免疫抑制治疗疗效。结论:EXOSC3可作为一种影响肝癌的预后标志物,其可能通过影响细胞周期、p53等信号通路及免疫细胞免疫应答过程控制肝癌的发展进程。

可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白3、淋巴细胞激活基因3表达水平与子宫内膜癌疾病转归的相关性

目的:探讨可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(sTim-3)、淋巴细胞激活基因3(LAG-3)表达水平与子宫内膜癌疾病转归的相关性及其临床意义。方法:选取2019年2月—2021年3月于本院接受手术治疗的52例子宫内膜癌患者为研究对象,依据术后1年疾病转归情况分为良好组34例、不良组18例。比较两组术前、术后1d、术后1个月血清sTim-3、LAG-3水平。分析术前不同临床病理特征患者血清sTim-3、LAG-3水平及其与临床病理特征相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清各指标对疾病转归的预测价值。分析血清各指标不同表达者转归不良的危险度。结果:与良好组比较,术后1d、术后1个月不良组血清sTim-3、LAG-3水平升高(P<0.05);血清sTim-3、LAG-3水平与临床FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与分化程度呈负相关(P<0.05);联合预测转归不良的AUC(0.906)均大于单项预测0.735、0.836(P<0.05);sTim-3、LAG-3高表达者转归不良的危险度分别是低表达者的1.789倍、1.737倍(P<0.05)。结论:子宫内膜癌疾病转归不良患者血清sTim-3、LAG-3水平明显增高,且与临床病理特征密切相关,其对疾病转归具有一定预测价值。

香猪CYP3A29基因3′-UTR结构变异及其与肌肉雄激素水平的关联分析

【目的】探究猪特有的细胞色素P450超家族3A亚族成员29(cytochrome P4503A 29,CYP3A29)基因3′-UTR区核苷酸结构变异(structural variation,SV)对该基因表达的影响,解析该结构变异与香猪肉质性状形成的关系。【方法】以香猪、大白猪为研究对象,应用UCSC、miRBase、PITA、RBPsuite等软件预测CYP 3 A 29基因3′-UTR区结构变异区间所包含的重复元件、miRNA和RBP结合位点;采用PCR方法对结构变异位点进行基因分型;计算群体基因型频率、基因频率及Hardy-Weinberg平衡状态;采用实时荧光定量PCR检测该变异对CYP 3 A 29基因表达的影响;利用ELISA法检测香猪肌肉组织中CYP3A29蛋白含量和雄激素(T、DHT)水平,并使用SPSS 17.0软件对T、DHT含量与不同基因型进行Pearson相关性分析。【结果】生物信息学分析显示,CYP 3 A 29基因3′-UTR的结构变异区全长303 bp,该变异区存在1个长为241 bp的短散在元件(short interspersed element,SINE),属于Pre0_SStRNA家族,位于Chr3:6819917―6820161,含有33个miRNAs和13个RBPs结合位点。基因分型显示,该结构变异在香猪、大白猪群体中呈现出丰富的多态性,表现为II基因型(插入型)、ID基因型(杂合型)、DD基因型(双缺失)。基因型群体分布频率显示,香猪中的D等位基因频率高于大白猪,该结构变异在香猪中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),在大白猪中处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05)。实时荧光定量PCR和ELISA结果显示,CYP 3 A 29基因ID基因型个体mRNA表达量和蛋白含量均显著高于II和DD基因型(P<0.05)。相关性分析结果显示,香猪不同基因型个体CYP3A29基因含量与肌肉组织中T浓度呈显著相关(P<0.05),与DHT浓度不相关(P>0.05)。香猪ID基因型个体T浓度显著高于DD和II基因型(P<0.05),DD基因型个体DHT浓度显著高于ID和II基因型(P<0.05)。【结论】CYP 3 A 29基因3′-UTR区长度为303 bp的结构变异在香猪群体中具有多态性,以缺失型D等位基因为主,即该结构变异在香猪中缺失SINE元件,导致CYP 3 A 29基因表达上调,进而影响香猪肌肉组织中T浓度。CYP 3 A 29基因3′-UTR结构变异与香猪肉质性状具有相关性。

慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血CD8^+ T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3水平升高

目的观察慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染处于不同自然史患者外周血T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3(LAG-3)表达的变化,探讨抑制性受体LAG-3在T细胞的表达变化与处于不同自然史慢性HBV感染者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒(HBV)e抗原(HBe Ag)和HBV DNA水平的关系。方法选取处于慢性HBV感染自然史为免疫耐受期(IT)患者24例、免疫清除期(IC)32例和非活动或低复制期(LR)患者31例,健康体检者30例为正常对照(HC)。应用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞表达LAG-3的比例;免疫分析法、生化分析法和PCR分别检测患者肝脏功能、HBV血清学标志物和HBV DNA水平。采用Mann-Whitney U检验分析各组间T细胞LAG-3表达率的差异;Spearman等级相关性分析各期慢性HBV感染患者外周血T细胞LAG-3表达阳性率与血清ALT、HBV DNA和HBe Ag水平的相关性。结果慢性HBV感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例较HC组显著增高,且处于IT期的患者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例明显高于IC期或LR期患者及HC组。处于IC期患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与患者血清中ALT水平呈显著负相关;IT组患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与血清中HBe Ag呈正相关。然而,不同自然史慢性HBV感染患者外周血LAG-3+CD4+T细胞比例和LAG-3+CD8+T细胞比例与血清HBV DNA水平无相关性。结论 LAG-3在慢性HBV感染患者外周血CD8+T细胞高表达,尤其是IT期患者CD8+T细胞高表达,可能是造成CD8+T细胞功能低下、HBV在肝脏长期复制的重要因素之一。

胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响。方法选取2011年4月至2017年4月于新乡市中心医院手术切除的胶质瘤组织及癌旁组织(距瘤旁边缘>2 cm)标本各73例,采用免疫组织化学法检测胶质瘤组织和癌旁组织中BAG3蛋白表达;培养人胶质瘤U87细胞,待细胞融合度达70%以上时随机分为siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组,siRNA-BAG3组细胞转染BAG3干扰序列,siRNA-对照序列组细胞转染阴性对照序列,空白对照组细胞不作任何处理,转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测U87细胞中BAG3 mRNA表达,Western blot法检测U87细胞中BAG3蛋白表达,细胞计数试剂盒-8检测U87细胞增殖情况,克隆形成实验检测U87细胞克隆能力,流式细胞仪检测U87细胞凋亡情况,Transwell小室检测U87细胞侵袭能力。结果胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率为73.97%(54/73),低表达率为26.03%(19/73);癌旁组织中BAG3蛋白高表达率为36.99%(27/73),低表达率为63.01%(46/73);胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率显著高于癌旁组织(χ~2=20.215,P<0.05)。胶质瘤组织中BAG3蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径及Karnofsky评分无关(P>0.05),而与肿瘤分级有关(P<0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA相对表达量分别为1.42±0.11、2.17±0.12和2.31±0.18;siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3蛋白相对表达量分别为0.20±0.12、0.84±0.13和0.92±0.12;siRNABAG3组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72、96 h时,siRNA-BAG3组U87细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞克隆形成数分别为30.76±6.19、81.32±3.55、85.07±3.05;siRNA-BAG3组U87细胞克隆形成数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞克隆形成数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组细胞凋亡率分别为(21.43±6.89)%、(5.50±2.95)%、(7.37±3.31)%;siRNA-BAG3组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组侵袭细胞数分别为116.92±8.82、179.00±11.64、172.48±18.16,siRNA-BAG3组侵袭细胞数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05),siRNA-对照序列组与空白对照组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BAG3蛋白在胶质瘤组织中呈高表达,且与肿瘤恶性程度有关,特异性沉默人胶质瘤U87细胞中BAG3基因可有效抑制细胞增殖及侵袭能力。

3品种鹅Myostatin基因3′-调控区SNPs群体遗传学分析

利用已测得的鹅Myostatin基因3′-调控区核苷酸序列设计5对PCR-SSCP引物,对扬州鹅、皖西白鹅以及五龙鹅3品种家鹅该区域内单核苷酸多态性进行了分析,并探索了单核苷酸多态性与生产性能之间的关系。结果表明,检测到A→G(88位)和G→T(353位)2个单碱基突变位点。88位处,E等位基因为优势等位基因,具有EE、EF两种基因型,以扬州鹅杂合子频率最高(0.550),皖西白鹅30个个体仅有一例EF型;353位处,G为优势等位基因,具有GG、GH和HH 3种基因型,3品种均具有较高的GG基因型频率、较低的HH基因型频率。屠体性能分析发现,EF基因型家鹅具有更高的屠体性能;扬州鹅、皖西白鹅GG型个体的腿肌重和腿肌率显著高于HH型个体(P<0.05),五龙鹅腿肌重、腿肌率具有GG型(GH型(HH型的趋势,但差异不显著(P>0.05)。

人VEGF受体II基因3区的克隆、表达研究

用RT PCR法从人胎儿脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF受体II基因 3区 ,将其重组到 pAYZ表达载体中 ,构建成人VEGF受体II基因 3区表达载体。将该载体转化大肠杆菌 16C9,获得稳定表达 ,表达产物以可溶性状态存在 ;SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,其分子量约为 14kD。以纯化的表达产物免疫Balb/c小鼠 ,眼球采血制备抗血清 ,抗血清效价在 10 3以上 ,并具有抑制VEGF诱导内皮细胞增殖的作用 ,在抑制肿瘤血管新生中具有潜在的应用前景。

长链非编码RNA母系表达基因3在肿瘤中表达的研究现状

长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)在多种肿瘤组织及细胞中异常表达,可通过不同的机制参与肿瘤的发生发展,并且与肿瘤转移、耐药及预后密切相关。作者就MEG3在肿瘤中表达的研究现状及作用机制作一综述。

TLR4基因3'未翻译区G11367C与IκB-α Hae Ⅲ位点多态性的交互作用和急性胰腺炎及其严重程度的关系

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因3'未翻译区G11367C与NF-κB抑制因子(nuclear factor kappa B,IκB)-αHae III位点多态性的交互作用和急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)及其严重程度的关系。方法:选择新乡医学院第一附属医院2013年5月至2015年6月收治的AP患者450例(AP组),AP组又分为轻度AP组(MAP亚组)、中度AP组(MSAP亚组)和重度AP组(SAP亚组)各150例,以150例健康体检者作为对照组。以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR技术检测TLR4基因3'未翻译区G11367C和IκB-αHae III多态性。每位研究对象进行面对面的问卷调查,采用非条件logistic回归对资料进行分析,估算G11367C和IκB-αHae III多态性与AP发病风险的调整比值比(OR)及95%可信区间(95%CI),并分析G11367C与IκB-αHae III多态性的交互作用。结果:G11367C(GC),IκB-αHae III(AG)和IκB-αHae III(GG)基因型频率AP组的分布分别为69.56%,33.78%和36.22%;MAP亚组分别为49.33%,24.67%和26.00%;MSAP亚组分别为70.67%,34.67%和36.67%;SAP亚组分别为88.67%,42.00%和46.00%;对照组分别为26.67%,14.00%和14.67%;上述基因型频率在AP组与对照组之间以及各AP亚组之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。G11367C(GC)基因型者患AP的风险均显著增加(ORAP=6.2828,ORMAP=2.6776,ORMSAP=6.6250,ORSAP=21.5147),IκB-αHae III(AG)和IκB-αHae III(GG)基因型者患AP的风险也显著增加(分别ORAP=5.7369,ORMAP=2.5277,ORMSAP=6.1824,ORSAP=17.85751;ORAP=5.8724,ORMAP=2.5902,ORMSAP=6.4027,ORSAP=18.9022)。基因突变的协同分析发现:G11367C(GC)/IκB-αHae III(GG)基因型者频率在AP组、MAP亚组、MSAP亚组、SAP亚组和对照组的分布频率分别为26.44%,12.67%,26.00%,40.67%和4.00%,AP与对照组之间以及各AP亚组之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。G11367C(GC)/IκB-αHae III(GG)基因型者患AP的风险显著增加(ORAP=30.1314,ORMAP=6.7612,ORMSAP=39.5000,ORSAP=401.5833),G11367C(GC)与IκB-αHae III(GG)基因型在AP发生、发展存在正向的交互作用(均γ>1),另外在G11367C(GC)和IκB-αHae III(AG)之间也存在正向交互作用(均γ>1)。结论:携带G11367C(GC),IκB-αHae III(AG)和IκB-αHae III(GG)基因型的个体属AP高危险人群,基因型多态性的交互作用促进了AP的发生和发展。

淋巴细胞活化基因3的免疫抑制功能及其在慢性病毒感染性疾病中的作用

T细胞耗竭是机体抗病毒的T细胞应答不能有效地控制病毒复制和清除病毒的主要机制。淋巴细胞活化基因3(LAG-3)是重要的免疫共抑制分子,主要表达在活化的T细胞表面,与CD4分子结构相似,且能与主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类分子高度结合,负向调节T淋巴细胞的增殖和功能,维持其内环境的稳定。慢性病毒感染性疾病中,LAG-3高表达于病毒特异性T细胞表面,引起T细胞的耗竭。

前列腺癌患者前列腺癌基因3的表达

目的评价前列腺癌基因3（PCA3）在前列腺癌诊断中的临床应用价值。方法选取我院2009年11月~2010年11月收治的30例前列腺癌（前列腺癌组）、22例前列腺增生（前列腺增生组）患者及12例健康男性（对照组）,采用逆转录聚合酶链式反应方法检测其外周血中PCA3 mRNA表达情况。结果对照组及前列腺增生组外周血标本中未见PCA3 mRNA阳性表达,而前列腺癌组患者外周血标本中PCA3 mRNA阳性率为99.3%（28/30）,差异有高度统计学意义（χ2=65.283,P〈0.01）。结论前列腺癌中PCA3 mRNA有明显组织特异性的阳性表达,有望成为前列腺癌诊断的新肿瘤标志物。